氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞黏附分子表达的影响

中西医结合心脑血管病杂志２０１３年５月第１１卷第５期　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｖｅｉｎ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａｄｉｐｏｎｅｃ　・　５７９　・　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００５，４５（１）：２ｌ一２５．　［１７］Ｄｕｌａｋ　Ｊ，Ｄｅｓｈａｎｅ　Ｊ，Ｊｏｚｋｏｗｉｃｚ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｈｅｍｅ　ｏｘｙｇｅｎａｓｅ一１　ａｎｄ　ｃａｒｂｏｎ　ｍｏｎｏｘｉｄｅ　ｉｎ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｆｏｃｕｓ　ｏｎ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｔｉｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　１／ａｄｅｎｏｓｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｍｅｄ　Ｊ（Ｅｎｇ１），２０１１，１２４（１６）：２５４０—２５４７．　　ＣＪ，Ｇｎｏ　ＳＦ，Ｓｈｉ　ＴＭ．Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌ１　［１ｏ］　Ｌｉｌｉｎｅ　ＭＤＡ—ＭＢ一２３１　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐａｒｔｈｅｎｏｌｉｄｅ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆ　ｅｒａｔｉｏｎ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｌｕｍｅｎ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｕｍ—　［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００８，１１７（２）：２３１—２４１．　［１８］Ｍｕｓｔａｆａ　Ｓ，Ｗｅｌｔｅｒｍａｎｎ　Ａ，Ｆｒｉｔｓｃｈｅ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｈｅｍｅ　ｏｘｙｇｅｎａｓｅ　１（ＨＭＯＸ１）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｉｓｋ　ｏｆ　ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ　ｖｅｎｏｕｓ　ｂｉｌｉｃａｌ　ｖｅｉｎ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｍｅｄ　Ｊ（Ｅｎｇ１），２０１２，１２５　（１２）：２１９５—２１９９．　ｔｈｒｏｍｂｏｅｍｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．Ｊ　Ｖａｓｃ　Ｓｕｒｇ，２００８，４７（３）：５６６—５７０．　［１９］　Ｊｉａｎｇ　Ｈ，Ｈｅ　Ｃ，Ｇｅｎｇ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．ＲｈｏＴ１　ａｎｄ　Ｓｍａｄ４　Ａｒｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｌｙｍｐｈ　ｎｏｄｅ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ａｎｄ　ｏｖｅｒａｌｌ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｉｎ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　［１１］　Ｘｕ　ＭＧ，Ｗａｎｇ　ＪＭ，Ｃｈｅｎ　Ｌ，ｅｌ　ａ１．Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｍｐｒｏｖｅｓ　ｈｕｍａｎ　ｓｍａｌｌ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｐｌｏｓ　Ｏｎｅ，２Ｏ１２，７（７）：ｅ４２２３４．　［２０］　Ｆｒａｎｓｓｏｎ　Ｓ，Ｒｕｕｓａｌａ　Ａ，Ａｓｐｅｎｓｔｒ６ｍ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ａｔｙｐｉｃａｌ　Ｒｈｏ　ＧＴＰａｓｅｓ　ｍｉｒｏ一１　ａｎｄ　ｍｉｒｏ一２　ｈａｖｅ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｒｏｌｅｓ　ｉｎ　ｍｉｔｏｃｈｏｎ—　ａｒｔｅｒｙ　ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｈｕｍ　Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ，２００８，２２（６）：３８９—３９３．　　ＫＴ，Ｃｈａｉ　ＪＤ，Ｘｉｎｇ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｄａｎｓｈｅｎ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａ１　ｐｒｏ—　［１２］　Ｊｉｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｏｘｉｄｉｚｅｄ　ｌｏｗ——ｄｅｎｓｉｔｙ　ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｍ—　ｄｒｉａｌ　ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ，２００６，３４４　（２）：５００—５ｌ０．　ｐａｉｒｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｊ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖ　ＳｃｉＢ，２０１０，１１（８）：６１８—６２６．　［１３］　Ｗｅｎ　Ｚ，Ｗａｎｇ　Ｚ，Ｗａｎｇ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｅｃｈａ—　［２１］Ｋａｒａｎｊａｗａｌａ　ＺＥ，Ｉｌｌｅｉ　ＰＢ，Ａｓｈｆａｑ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｎｅｗ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｏｆ　ｐａｎ—　ｃｒｅａｔｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａ　ｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａ１　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｆｏｒｍｕｌａ　Ｓｉ—Ｗｕ—Ｔａｎｇ　ｕ　ｓｉｎｇ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ　ａｎｄ　ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙ　ｍａｐ［Ｊ］．Ｐｌｏｓ　Ｏｎｅ，２Ｏ１１，６（３）：ｅｌ８２７８．　ｌｙｓｅｓ：Ｃｌａｕｄｉｎ　１８　ａｎｄ　ａｎｎｅｘｉｎ　Ａ８［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｓｕｒｇ　Ｐａｔｈｏｌ，２００８，３２　（２）：１８８—１９６．　　ａ１．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉ—　［１４］　Ｗａｎｇ　Ｅ，Ｂｕｓｓｏｍ　Ｓ，Ｃｈｅｎ　Ｊ，ｅｔｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＰＨＹ９Ｏ６）ａｎｄ　ＣＰＴ一１　１　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　［２２］　ｗｈｉｔｅ　ＡＨ，Ｗａｔｓｏｎ　ＲＥ，Ｎｅｗｍａｎ　Ｂ，ｅｔ日　．ＡｎｎｅｘｉｎⅧｉｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎ—　ｔｉａｌｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｂｙ　ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｐｌａｔｅ　ｄｕｒｉｎｇ　ｅｎｄｏｃｈｏｎｄｒａｌ　ｏｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｃ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ［Ｊ］．ＢＭＣ　Ｍｅｄ　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，　２Ｏ１１，１１（４）：３８．　ＥＪ］．Ｊ　Ｂｏｎｅ　Ｍｉｎｅｒ　Ｒｅｓ，２００２，１７（ｉ０）：１８５１—１８５８．　［１５］　Ｓｕｎ　Ｙ，Ｇｕｏ　ＱＭ，Ｌｉｕ　ＤＬ，ｅｔａ１．Ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ　ｒｅ—　ｃｅｐｔｏｒ　２。Ｔｏｌｌ一１ｉｋｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　４，ＣＳＦ２　ａｎｄ　ＬＹ６４　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃｈｒｏｎｉｃ　作者简介：刘建伟，现工作于吉林大学药学院（邮编：１３００２１）；张晓天、张　超、赛景影、王鑫磊、王槐栋、王放（通讯作者），工作于吉林大学白求恩医　学院（邮编：１３００２Ｉ）。　ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｏｒａｌ　Ｄｉｓ，２０１０，１６（４）：３４３—３５０．　［１６］　Ｔｅｌｅｒｏｎ　ＡＡ，Ｃａｒｌｓｏｎ　Ｂ，Ｙｏｕｎｇ　ＰＰ．Ｂｌｏｏｄ　ｄｏｎｏｒ　ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌ　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｆｉｌｔｅｒｓ　ａｓ　ａ　ｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ—ｄｅｒｉｖｅｄ　（收稿日期：２０１３—０３—１４）　（本文编辑王雅洁）　氧化低密度脂蛋白对　血管内皮细胞黏附分子表达的影响　何玉萍，江摘要：目的溺，何玉珊，许翌嘉　观察氧化低密度脂蛋白（ｏｘ—ＬＤＩ　）对人脐静脉内皮细胞（ＥＣＶ３０４）细胞黏附分子（ＣＡＭｓ）表达的影响，探讨ｏｘ—ＬＤＬ损伤　血管内皮细胞（ＶＥＣ）的作用及机制。方法　采用人类单核细胞系（Ｕ９３７）一ＥＣＶ３０４联合培养的方法，ｏｘ—ＬＤＩ　为诱导损伤因素，用　流式细胞术（ＦＣＭ）测定ＥＣＶ３０４细胞表面细胞间黏附分子一１（ＩＣＡＭ一１，ｃＤ５４）、血管细胞黏附分子一１（ｖｃＡＭ一１，ｃＤ１０６）、Ｅ一选　择素（ＣＤ６２Ｅ）和Ｐ一选择素（ＣＤ６２Ｐ）的表达率。结果论ｏｘ—ＬＤＬ促进ｃＡＭｓ表达，与正常对照组比较有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。结　ｏｘ—ＬＤＬ诱导促进内皮细胞表面黏附分子表达，导致ＶＥＣ损伤，参与动脉硬化（Ａｓ）的发生、发展。　关键词：动脉硬化；氧化低密度脂蛋白；人脐静脉血管内皮细胞株；细胞黏附分子　中图分类号：Ｒ５８９．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—１３４９（２０１３）Ｏ５一Ｏ５７９—０３　动脉硬化（ＡＳ）是动脉血管壁的一种慢性炎症性疾病＿１］，细　胞黏附分子（ＣＡＭｓ）是介导细胞与细胞之间、细胞与细胞基质　之间相互黏附的糖蛋白，正常情况下呈低水平表达，在炎性反应　１．１材料ＥＣＶ３０４细胞株（中山大学细胞库），人类单核细胞　系Ｕ９３７（上海细胞生物研究所）；ＲＰＭＩ一１６４０培养液（美国　ＧＩＢＣＯ）；胎牛血清（美国ＧＩＢＣＯ）；低密度脂蛋白（ＬＤＬ，美国　刺激下表达明显上调。研究表明，ＡＳ处内皮细胞分泌的黏附分　子增加，炎性基因的表达也增加　］。本实验采用单核细胞一内皮　细胞（ＭＣ—ＥＣ）联合培养的方法，观察氧化低密度脂蛋白（ｏｘ—　ｓＩＧＭＡ）；单克隆抗体ｃＤｌＯ６一ＦＩＴＣ、ＣＤ５４一ＰＥ、ＣＤ６２Ｅ—ＰＥ、　ＣＤ６２Ｐ—ＰＥ、ＩｇＧ—ＰＥ、ＩｇＧ—ＦＩＴＣ（均是美国ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ产　品）；流式细胞仪：（美国ＢＥＣＫＭＡＮ　ＣＯＵＩ　ＴＥ公司ＡＬＴＲＡ　ＬＤＬ）对人脐静脉内皮细胞（ＥＣＶ３０４）ＣＡＭｓ表达的影响，探讨　ｏｘ—ＬＤＬ损伤血管内皮细胞（ＶＥＣ）的作用及机制。　１材料与方法　型），四色荧光，配套ＥＸＰＯ　３２采集分析软件。　１．２　ｏｘ—ＬＤＬ的制备　将ＬＤＬ置于含１０　ｍｏｌ／Ｌ　ＣｕＳＯ　的　ＰＢＳ（ｐＨ７．２）溶液中，３７℃温育２４　ｈ，再将ｏｘ—ＬＤＬ液置含２００　・　５８０・　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＩＮＴＥＧＲＡＴＩＶＥ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＯＮ　ＣＡＲＤＩＯ一／ｃＥＲＥＢＲ０ＶＡｓｃｕＬＡＲ　ＤＩＳＥＡＳＥ　Ｍａｙ　２０１３　Ｖｏ１．１　１　Ｎｏ．５　ｐｔｍｏｌ／Ｉ　ＥＤＴＡ的ＰＢＳ　４℃中透析２４　ｈ，超滤除菌后４℃保存备　用。　ｌ＿３实验方法　ＦＩＴＣ、ＣＤ５４一ＰＥ、ＣＤ６２Ｅ—ＰＥ、ＣＤ６２Ｐ—ＰＥ单克隆抗体各１Ｏ　Ｌ，室温避光孵育３０　ｍｉｎ后，ＰＢＳ洗２遍，流式细胞仪检测，其　结果以阳性百分率表示。每份样本均设阴性对照（加相应ＩｇＧ　抗体），以消除本底荧光的影响。　１．５统计学处理２　结　果　用ｓＰｓｓ１６．０软件进行ｔ检验，数据以均数±标　准差（　±５）表示。　１．３．１　ＭＴＴ法检测不同浓度ＯＸ—ＬＤＬ对细胞活性的影响　细胞以５×１Ｏ　个／ｍＩ　细胞数接种人９６孔培养板，待细胞生长　至稳定状态（约２４　ｈ），分别加入ＯＸ—ＬＤＬ高浓度组（１００／ｘｇ／ｍＬ）、　中浓度组（５０￣ｇ／ｍＩ　）、低浓度组（２５／，ｇ／ｍＬ），正常对照组加等　量生理盐水，置于３７℃、５　ＣＯ２、９５　空气的培养箱培养２４　ｈ　２．１　ＭＴＴ检测结果ＯＸ—ＬＤＬ作用的各组细胞活性均下降，　后，每孔加入１０　ｇ／Ｌ的ＭＴＴ　１０／，Ｌ，培养４　ｈ，弃去培养基，每　ＴＬ　Ｊｍ人１５０　Ｌ二甲基亚砜（ＤＭＳＯ），置微量振荡器上振荡１Ｏ　ｍｉｎ，酶标仪（波长５７０　ｎｍ）测定吸光值（ＯＤ），筛选ＯＸ—ＬＤＬ适　与正常组比较，高、中浓度组有统计意义（Ｐ＜０．０５），而低浓度　组无统计意义，提示５０￣ｇ／ｍＬ　ＯＸ—ＬＤＬ为适宜的作用浓度。　详见表１。　表１　ＯＸ—ＬＤＬ不同浓度作用对内皮细胞ＥＣＶ３０４活性的影响（ｊ±５）　宜作用浓度。　１．３．２　ＯＫ—ＬＤＬ对血管内皮细胞黏附分子表达的影响　将　ＥＣＶ３Ｏ４细胞接种于２４孔板，待细胞生长至稳定状态（约２４　ｈ），加入５０／，ｇ／ｍＬ　ＯＸ—ＬＤＬ，对照组加等量生理盐水，置于３７　℃、５　ＣＯ　、９５　空气的培养箱中培养，２４　ｈ后，移去培养液，每　ＴＬ　Ｊｍ人含４×１Ｏ　人类单核细胞系Ｕ９３７细胞培养基细胞悬液，　３７℃孵育３０　ｍｉｎ，移去培养液，用ＰＢＳ轻洗２遍，去除未黏附的　细胞，用０．２５　胰蛋白酶和０．０２　ＥＤＴＡ混合液消化收集细　胞，测定细胞间黏附分子一１（ＩＣＡＭ一１，ＣＤ５４）、血管细胞黏附分　２．２　ＯＸ—Ｉ．ＤＩ　对血管内皮细胞黏附分子表达的影响　ＯＸ—ＬＤＩ　作用损伤组细胞表面黏附分子ＶＣＡＭ一１、ＩＣＡＭ—ｌ、ＣＤ６２Ｅ、　ＣＤ　６２Ｐ表达率均明显增高，与正常组比较有统计学意义（Ｐ＜　０．０１）。详见表２。　与正常组比较。１）Ｐ＜０．０５　子一１（ＶＣＡＭ一１，ＣＤ１０６）、Ｅ一选择素（ＣＤ６２Ｅ）和Ｐ一选择素　（ＣＤ６２Ｐ）。　１．４　ＦＣＭ检测ＶＣＡＭ一１、ＩＣＡＭ一１、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｐ的表达　率收集上述单细胞悬液，ＰＢＳ洗两次，分别加入ＣＤ１０６　表２　ＯＸ—ＬＤＬ对ＥＣＶ３０４细胞黏附分子表达的影响（ｊ±Ｓ）　３讨　论　导损伤因素，ＦＣＭ进行分析ＥＣＶ３０４细胞表面ＶＣＡＭ一１、　ＩＣＡＭ一１、Ｅ一选择素、Ｐ一选择素的表达，探讨ＯＸ—Ｉ　ＤＩ　致ＶＥＣ　ＡＳ是危害人类健康最大的疾病之一，是心脑血管病的主要　病理基础，其发病机制复杂，尚未完全阐明。自Ｒｏｓｓ提出ＡＳ　发病机制的“损伤反应”学说至今，ＶＣＥ损伤在ＡＳ的形成与发　展中的地位日趋受到关注。在ＡＳ解剖学证据出现之前已有内　皮功能紊乱的表现［。“］，而ＶＥＣ功能紊乱是ＡＳ发病的早期关　键性环节Ｉ　ｓ］。　损伤机制；结果显示，ＯＸ—ＬＤＬ促使内皮细胞ＣＡＭｓ表达明显　上调，提示ＯＸ—ＬＤＬ在内皮细胞黏附分子合成或诱导过程中扮　演了较为重要的角色，ＯＸ—ＬＤＬ刺激诱导内皮细胞ＣＡＭｓ表达　增高，而ＣＡＭｓ的高表达，又促进单核细胞黏附于内皮细胞，影　响血管内皮细胞功能，参与ＡＳ化的形成和发展。　ＶＥＣ是多种危险因子作用的重要靶器官。Ｏｘ—Ｉ　ＤＩ　通过　介导单核细胞和血管内皮细胞黏附，上调血管内皮细胞ＣＡＭｓ　的表达，致内皮细胞功能紊乱，损伤ＶＥＣ。阻断或抑制ＯＸ—Ｉ　Ｄ　对内皮细胞功能的损害，能有效预防、治疗心血管疾病的发生、　发展。　ｏｘ—ＬＤＬ是ＡＳ明确的危险因子，动脉壁中ＯＸ—ＬＤＬ的存　在是造成动脉壁持续损伤重要因素之一，ＯＸ—ＬＤＬ可直接损伤　内皮细胞，通过信号传导通路改变内皮细胞分泌活性，介导单核　细胞对内皮细胞的黏附，导致内皮细胞的损伤　’　。人Ａｓ的斑　块中有ＩＣＡＭ一１的表达，并在ＡＳ的病理过程中起重要作　用＿８］。高血脂患者血中的可溶性的ＩＣＡＭ一１、ＶＣＡＭ一１均升　高，认为血中可溶性ＩＣＡＭ一１、ＶＣＡＭ—ｌ是反应动脉粥样硬化　的早期变化指标［５］。ＭＣ—ＥＣ黏附是内皮细胞功能受损而处于　激活状态的表现之一，两种细胞黏附不仅是物理接触，而且涉及　ＭＣ、ＥＣ细胞表面诸多分子之间的相互作用，在相互作用过程　中两种细胞的功能均发生相应变化，促进细胞ＣＡＭｓ表达，而　参考文献：　［１］Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ　Ｊ，Ｌｉｂｂｙ　Ｐ，Ｈａｎｓｓｏｎ　ＧＫ．Ａｄａｐｔｉｖｅ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ａｎｄ　ａｔｈｅｒ　ｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．ＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ，２０１０，１３４（１）：３３—４６．　［２］Ｄａｉ　Ｇ，Ｋａａｚｅｍｐｕｒ—Ｍｏｆｒａｄ　ＭＲ，Ｎａｔａｒａｊａｎ　Ｓ，ｅｌ　ａ１．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｅｎｄｏ　ｔｈｅｌｉａｌ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｅｖｏｋｅｄ　ｂｙ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｗａｖｅｆｏｒｍｓ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ａｔｈ—　ｅｒｏｓｅｌｅｒｏｓｉｓ——ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｒｅｇｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｖａｓｃｕｌａ——　ＣＡＭｓ介导的炎症细胞与血管内皮细胞的黏附及损伤作用，被　认为是ＡＳ重要的始动环节，可作为炎症活动的指标［２　。本　实验采用对Ｕ９３７一ＥＣＶ３０４联合培养的方法，用ＯＸ—ＬＤＩ　为诱　ｔｕｒｅＥＪ］．ＰＮＡＳ，２００４，１０１（４１）：１４８７１—１４８７６．　［３］郭渝成，张为，陈莉，等．微血栓形成与内皮细胞损伤问关系的临床　及实验研究［Ｊ］．中国微循环，２００２（３）：１４ｌ一１４３．　中西医结合心脑血管病杂志２０１３年５月第１ｌ卷第５期　ｎｏｎｅｓ　ＭＪ，Ｎｉｃｈｏｌａｓ　ＳＢ，Ｌｙｏｎ　ＣＪ．Ｉｎｓｕｈｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｎ—　［４］　Ｑｕｉ２５７．　ｄｏｔｈｅｌｉｕｍ［Ｊ］．Ｃｍｒ　Ｄｉａｂ　Ｒｅｐ，２００５，５（４）：２４６—２５３．　［９］Ｍａｎｓｏｏｒ　ＭＡ，Ｓｅｌｉｅｆｌｏｔ　Ｉ，Ａｒｎｅｓｅ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈｙ　ａｄｕｌｔｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ａｃｕｔｅ　ｈｙｐｅｒｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅｍｉａ　Ｅ５２　Ｆａｌｋ　Ｅ．Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ａｍ（２ｏｌｌ　Ｃａｒｄｉｏｌ，　２００６，４７（８　Ｓｕｐｐ１）：７—１２．　ａｎｄ　ｍｉｌｄ　ｈｙｐｅｒｌ　ｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉａ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００４，３７（５）：４０８—　４１４．　Ｅ６］　Ｖａｎｎｉｎｉ　Ｎ，Ｐｆｅｆｆｅｒ　Ｕ，Ｌｏｒｕｓｓｏ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ａｇｉｎｇ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｓｅａｓｅ：Ｅ—ｓｅｌｅｃｆｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　［１Ｏ］　蔡强军．单核一内皮细胞相互作用与动脉粥样硬化研究进展ＥＪ］．　中国动脉硬化杂志，２００２，１０（１）：８３—８５．　ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ａｓ　ａ　ｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｃｕｒｔ　Ｐｈａｒｍ　Ｄｅｓ，２００８，１４（３）：２２１—　２２５．　作者简介：何玉萍，女，副主任技师，现工作于广州中医药大学第一附属　医院（邮编：５１０４０５）；江溺、何玉珊、许翌嘉，工作于广州中医药大学第一　附属医院。　（收稿日期：２０１２—１２—１１）　［７］　Ａｋａｈａｓｈｉ　Ｈ。Ｈａｒａ　Ｋ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕ１ａｒ　ｄｉｓｅａｓｅｓ　ａｎｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　［Ｊ］．Ｒｉｎｓｈｏ　Ｂｙｏｒｉ，２００３，５１（２）：１３３—１３９．　ｌｏｏｉ　Ｍ，Ｓａｎａｔｉ　Ａ。Ａｈｍａｄｉｅｈ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ＩＣＡＭ一１，　［８］　ＨａｊｉＶＣＡＭ一１，Ｅ—ｓｅｌｅｃｔｉｎ，Ｐ—ｓｅｌｅｃｔｉｎ，ａｎｄＴＮＦ—ａｌＩｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈ　（本文编辑王雅洁）　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｉｎｖｅｓｔ，２００３，３２（４）：２４５—　脾通络开窍汤对ＡＤ大鼠海马　ＧＳＫ一３』３和ＰＰ２Ａ活性的影响及作用机制。　ｌｊ３【　日　杨**，吴林，陈炜，郑福奎，蔡鑫昆，温惠娟，王青碧，毕信亚　摘要：目的　研究温脾通络开窍汤对ＡＤ大鼠海马糖原合酶激酶～３１３（ＧｓＫ一３１３）和蛋白质磷酸酶２Ａ（ＰＰ２Ａ）活性的影响，并探　讨其可能的机制。方法　运用脑立体定位技术向大鼠右侧海马注射冈田酸，制备老年性痴呆大鼠动物模型，造模１４　ｄ后，采用经典　的Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫进行老年性痴呆大鼠模型的筛选，将造模成功大鼠随机分为模型组，西药组，温脾通络开窍汤高、中、低剂量组，另　设空白组。于造模后第２Ｏ天开始治疗，各治疗组给予相应的药物灌胃，模型组及空白组给予等体积的双蒸水灌胃。２６　ｄ后，通过酶　联免疫吸附法检测ＰＰ２Ａ和ＧｓＫ一３Ｂ的活性。结果　模型组ＧｓＫ一３　的活性较空白组均有提高（Ｐ＜０．０５），而ＰＰ２Ａ表达两者相　比有显著性降低（Ｐ＜０．０５）。中药高、中剂量组与模型组相比，ＧｓＫ一３Ｂ的活性明显低于模型组（Ｐ＜０．０５），而ＰＰ２Ａ的表达明显高　于模型组（Ｐ＜０．０５），其中尤以中药高剂量组作用最明显，中药高、中、低剂量组存在一定量效关系。结论　温脾通络开窍汤治疗老　年性痴呆的可能机制是抑制ＧｓＫ一３０的活性和提高ＰＰ２Ａ的活性，从而降低ｔａｕ蛋白异常磷酸化水平达到抗ＡＤ的作用。　关键词：阿尔茨海默病；温脾通络开窍汤；糖原合酶激酶一３Ｂ；蛋白质磷酸酶２Ａ　中图分类号：Ｒ３２９．２　Ｒ２８５．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２一ｌ３４９（２０１３）Ｏ５一Ｏ５８１一Ｏ３　Ｔｈｅ　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ＩＶｌ，［ｅｅｈａｎｉｓｍ　ｃ　ｆ　Ｗｅｎｐｉ　Ｔｏｎｇｌｕｏ　Ｋａｉｑｉａｏ　Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＧＳＫ一３ｐ　ａｎｄ　ＰＰ２Ａ　ｉｎ　Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｅｆ　Ｒａｌｓ　ｗｉｌｈ　Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｙａｎｇ　Ｊｉｎｐｉｎｇ，Ｗｕ　Ｌｉｎ，Ｃｈｅｎ　Ｗｅｉ，ｅｔ　ａｌ　Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｈａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｉｔｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００１）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｅｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　Ｗｅｎｐｉ　Ｔｏｎｇｌｕｏ　Ｋａｉｑｉａｏ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ（ＷＴＫＤ）ｏｎ　ｔｈｅ　ａｃｉｔｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ　２Ａ（ＰＰ２Ａ）ａｎｄ　ｇｌｙｃｏｇｅｎ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｋｉｎａｓｅ——３１３（ＧＳＫ——３１３）ｉｎ　ｈｉｐＦｏｃａｍｐｕｓ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅ（ＡＤ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ＡＤ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｉｎｊｅｃｔｉｎｇ　ｏｋａｄａｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｒｉｇｈｔ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ　ｓｔｅｒ—　ｅｏｔａｘｉｃ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，．Ａｆｔｅｒ　１　４　ｄａｙｓ，ｔｈｅ　Ａ　Ｄ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｃｌａｓｓｉｃ　Ｍｏｒｒｉｓ　ｗａｔｅｒ　ｍａｚｅ，ａｎｄ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｉｎｔｏ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ，ｗｅｓｔｅｒｎ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｇｒｏｕｐ，ＷＴＫＤ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓａｇｅ，ｍｉｄｄｌｅ　ｄｏｓａｇｅ　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｄｏｓａｇｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ，ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｔｒｅａｔ—　ｍｅｎｔ　ｂｅｇａｎ　ａｆｔｅｒ　２０　ｄａｙｓ　ｏｆ　ｍｏｄｅｌ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ，ａｎｄ　ｅｖｅｒｙ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｕｐｐｈｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｒｅ　ｓｕｐｐｈｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃ　ｄｏｕｂｌｅ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｗａｔｅｒ，．Ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　２６　ｄａｙｓ，ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＰＰ２Ａ　ａｎｄ　ＧＳＫ一３ｐ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｅｎｚｙｍｅ　ｈｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ，．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＧＳＫ一３口ｉｎ　ｈｅｔ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｈｉｇｈ—　ｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＰＰ２Ａ　ｗａｓ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｂｅｆｏｒｅ　ｉｎ　ｔｗｏ　ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＧＳＫ一３Ｂ　ｉｎ　ＷＴＫＤ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓａｇｅ　ａｎｄ　ｍｉｄｄｌｅ　ｄｏｓａｇｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＰＰ２Ａ　ｉｎ　ＷＴＫＤ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓａｇｅ　ａｎｄ　ｍｉｄｄｌｅ　ｄｏｓａｇｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜　０．０５）．Ｔｈｅ　ＷＴＫＤ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓａｇｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｅｆｆｅｃｔ．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｄｏｓｅ—ｅｆｆｅｃｔ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｉｎ　ＷＴＫＤ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ．．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＷＴＫＤ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ａｎｔｉ—Ａ　Ｄ，ｗｈｉｃｈ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＧＳＫ一３１３ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＰＰ２Ａ，ｔｈｅｒｅｂｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　Ｔａｕ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｂｎｏｒｍａｌ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙ１ａｔｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｉｎ　ＡＤ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍｚｈｅｉｍｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅ；Ｗｅｎｐｉ　Ｔｏｎｇｌｕｏ　Ｋａｉｑｉａｏ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ；ｇｌｙｃｏｇｅｎ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｋｉｎａｓｅ一３１３；ｐｒｏｔｅｉｎ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ　２Ａ　１）为广西中医学院中药药效研究重点实验室开放基金课题（Ｎｏ：０９—００７—０６—０６）；广西高等学校优秀人才资助计划基金项目