高效液相色谱_质谱法测定水产品中孔雀石绿及其代谢物

第辫卷增刊分析侧试学报年月咫“川和目‘”以一色相谱质谱法测定水产品中液高效孔雀石绿及其代谢物郭德华,叶长淋,李波上海,方晓明上海出入境检验检疫局在水产养殖过程中人们经常使用各种药物进行水体消毒和防止鱼病害孔雀石绿就是其中的一种染料类杀菌剂留时间较长「”近年来发现它特别是其代谢物在水产体内有明显的残留现象且代谢物的残由于孔雀石绿化学官能团三苯甲烷是一种致癌物质所以欧盟美国等宣布禁止其在经济鱼类观赏鱼除外养殖过程中使用的报道【色谱一经文献检索国内虽有水产品中孔雀石绿残留量检验方法礴〔’但未涉及代谢物残留量检测方法的报道国外已建立的检测方法主要采用了气相色谱质’谱联用法测定孔雀石绿代谢物‘”高效液相一色谱法同时测定孔雀石绿及其代谢物我们利用一和高效液相质谱法同时测定孔雀石绿及其代谢物‘和一技术分别建立了高效液相色谱法初筛法和高效液相串联质谱法确证法两种检测方法实验部分,原理一试样中的残留物用乙睛见光处可检测的孔雀石绿法确证醋酸盐缓冲混合液提取乙睛再次提取后一液液分配到二氯甲烷层最后用丙磺酸固相提取小柱净化洗脱液上机测定外标法定量其中的隐性孔雀石绿用外衍生柱还原为可对呈阳性的样品用液相色谱四极杆串联飞行时间质谱仪器与试剂一离子色谱仪配有紫外四极杆一一可见光检测器美国戴安公司一高效液相色谱仪配高速均质器离心机拌有飞行时间串联质谱仪英国质谱公司姗固相萃取装置氧化柱空的不锈钢预柱管伪丙磺酸两端覆以的过滤板把拌有的硅藻土装柱添加数滴甲醇后压实后旋紧一临用前用甲醇冲洗固相萃取小柱二氯甲烷甲醇乙睛液相色谱纯醋酸盐缓冲液溶解到无水乙酸钠及甲苯磺酸于溶液峨刃水中用冰醋酸调节溶液盐酸经胺甲醇溶液移取甲苯磺酸最后用水稀释到盐酸经胺水溶液到盐酸经胺水容量瓶用甲醇定容二甘醇孔雀石绿及隐性孔雀石绿标准品纯度大于孔雀石绿及隐性孔雀石绿标准溶液标准混合液,,用甲醇配成质量浓度为加的标准储备液根据需要配成适当浓度的仪器条件日一条件色谱柱进样量条件冲一一拼在川柱和检川测器之间连接氧化柱流动相乙睛拌一一醋酸盐缓冲液体积比流速柱温室温检测波长,色谱柱拼侣一乃一在色谱柱和检测器之流速间连接子源温度测定方式氧化柱流动相醋酸按电离方式℃乙腊体积比柱温室温进样量℃以毛细管电压干燥气流量锥体电压碰撞能量离干燥温度母离子雾化气流量碎片离子© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net

第期郭德华等高效液相色谱一质谱法测定水产品中孔雀石绿及其代谢物增刊测定步骤准确称取样品于离心管内加入以叉〕侧〕盐酸经胺水溶液的速度均质而甲苯磺酸溶液醋酸盐缓冲溶液用均质机以巧加入乙腊后剧烈震摇将离心管置于离心机内以醇的离心管中的速度离心乙睛把上清液转移至装有水和二甘加入重复上述操作将上清液转移至同一后置于离心机内以离心管中的速度离心在离心管中加入巧二氯甲烷振荡用尖嘴移液管将下层溶液转移至的梨形烧瓶中再用二氯甲烷重复上述操作用次合并二氯甲烷层于同一梨形烧瓶中于℃旋转蒸发至约乙睛溶解残渣将固相萃取小柱安装在固相萃取装置上用乙睛活化小柱把烧瓶中的溶液转移到小柱上在抽真空情况下过柱再用乙睛洗涤烧瓶两次每次用在不抽真空的情况下依次准确刻度试管流动相根据需要流动相和盐酸经胺甲醇溶液洗脱过拜柱把洗脱液收集到中如有必要用流动相稀释至微孔滤膜滤液供液相色谱测定准确移取适量标准混合液于刻度试管中放在℃加热板上用氮气流吹干准确加入盐酸轻胺甲醇溶液用流动相稀释至混匀对色谱法检测呈阳性的样品溶液用二氯甲烷提取移取二氯甲烷层并挥干准确加入流动相以溶解残渣按质谱条件参数进行测定结果与讨论,氧化铅衍生柱浓度与转化效率的关系我们用同样规格的空柱分别填充了种不同氧化铅含量的衍生柱考核隐性几的隐性孔雀石绿标准溶液重复进样次观察每次峰面积数值以上的即可得到最大的变化情况并计算次的平均峰面积数值试验结果发现氧化铅含量达到氧化铅含量的衍生柱并且稳定的峰面积数值考虑到衍生柱使用寿命本标准采用孔雀石绿的在线转化效率用,】仍图孔雀石绿及隐性孔雀石绿标准品的总离子流图隐性孔雀石绿保留时间孔雀石绿保留时间一丁「一条件的选择试验了不同参数毛细管电压锥体电压和碰撞电压等对测定结果的影响细管电压的增大后趋于平缓结果表明随着毛时达到最大值后孔雀石绿的电离急剧增大信号响应值增加电压达到随锥体电压的变化对孔雀石绿的响应值影响不大碰撞能量到达在分子离子峰〔产生断裂形成特征性碎片离子基础上响应值达到最大见图© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net

第卷分析测试学报增刊〔冶四巧为一、氏占四趁价菊。一、、溯刃么打峨竺以招办吧、二。侣姗浅叨肠子团夕八而趁仍巧,为刃之刃图不同碰撞能量情况下隐色孔雀石绿的信号响应值和质谱图方法的检出限回收率精密度以本底无孔雀石绿及其代谢物残留的鳗鱼为样品采用添加法用一一法进行回收率及精密度试验加标平均回收率为采用液相串联质谱法的检出限也为一相对标准偏差为检出限为魄八拜八结论一用高效液相色谱可见光检测法进行孔雀石绿残留量快速筛选并配以串联质谱进行确证符合当前检测工作快速和准确的需要将检测对象扩充到较母体蓄积时间更长的代谢物也是残留检测的发展趋势符合动物源性食品种药物残留监控的技术要求参考文献川【【卢迈新黄樟翰等美洲鳗对几种药物的敏感性研究淡水渔业仪旧郭德华叶长淋等液相色谱法测定鳗鱼中的孔雀石绿化学分析计量一刊阴犯一一扭认一砚耐一一一一几卿而理鸣‘匀一即场拍丽锐卫倒比一代刁底既。户记耐丽场成划碑”烧玩一丽丽山兄一词吧龙拼货八仆一一晚卫一一玩呛© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net