细菌培养接种、常用生化反应及细菌生长方式

实验报告Array课程名称：医学微⽣物学指导⽼师：________________成绩：__________________ 实验名称：细菌培养接种、常⽤⽣化反应及细菌⽣长⽅式实验类型：_____同组学⽣姓名：_____ ⼀、实验⽬的和要求（必填）⼆、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作⽅法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、⼼得⼀、实验⽬的1.了解细菌常⽤培养基

2.掌握细菌的分离培养技术及纯种移种法3.熟悉细菌各种⽣长现象4.熟悉细菌常⽤⽣化反应⼆、实验材料

⽣理盐⽔、⼤肠杆菌液、⽩⾊葡萄球菌液、痢疾杆菌液，接种环、酒精灯以及多种培养基。三、操作⽅法1.细菌接种法

1)分离培养法——平板划线法（葡萄球菌/⼤肠埃希菌）2)纯种培养法

①斜⾯培养基接种法（葡萄球菌/⼤肠埃希菌）

a)⽤左⼿握住菌种管和斜⾯培养基管，右⼿持接种环或接种针。

b)⽤右⼿⼩指与⼿掌、⼩指与⽆名指分别拔出两管的棉塞，将管⼝通过⽕焰灭菌。c)⽤接种环或接种针伸⼊菌种管内，挑取⽤来接种的菌苔。

d)伸⼊斜⾯培养管内，先从斜⾯底部到顶端拖⼀条接种线，再⾃下⽽上蜿蜒划线。e)接种完成之后，⽤⽕焰灭菌培养管⼝，并塞上棉塞，置于37℃培养。②半固体培养基接种法--- 穿刺接种法（⼤肠埃希菌/痢疾杆菌）a)⽤左⼿握住菌种管和半固体培养管，右⼿持接种针

b)⽤右⼿⼩指与⼿掌、⼩指与⽆名指分别拔出两管的棉塞，将管⼝通过⽕焰灭菌。c)⽤接种针伸⼊菌种管内，挑取⽤来接种的菌苔。

d)垂直刺⼊半固体中⼼，⾄近管底部，然后沿穿刺线退出。

e)塞回棉塞，接种针重新灭菌。接种完毕，于37℃培养18—24h，观察⽣长情况。③液体培养基接种法（葡萄球菌/⼤肠埃希菌/痢疾杆菌）a)⽤灭菌接种环挑取⽤来接种的菌苔。

b)在试管内壁与液⾯交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。2. ⽰教

1) 细菌的⽣长现象① 液体培养基② 固体培养基③ 半固体培养基2) 常⽤⽣化反应① 乳糖发酵试验② Indol 试验③ 硫化氢试验④ 尿素分解试验四、实验结果1. 细菌接种试验

对⼤肠杆菌的分离2. 细菌的⽣长现象

1) ⼤肠杆菌（固体培养基）圆形凸起，边缘整齐，表⾯光滑，湿润2) 痢疾杆菌（半固体培养基）沿穿刺线⽣长3) ⽩⾊葡萄球菌（液体培养基）成⽩⾊，葡萄串状3. 常⽤⽣化反应

1) 乳糖发酵试验 ⼤肠杆菌⊕，2) Indol 试验 ⼤肠杆菌＋，肖⽒沙门菌-3) 硫化氢试验 ⼤肠杆菌 -，变形杆菌 +4) 尿素分解试验 痢疾杆菌 -，变形杆菌 +五、结果分析

1.⼤肠杆菌的分离使单菌落出现。通过划布使单个细菌被分离出来。

2.细菌⽣长中⼤肠杆菌：具鞭⽑，⽆芽孢；痢疾杆菌：⽆芽胞，⽆荚膜，⽆鞭⽑,兼性厌氧；⽩⾊葡萄球菌既表⽪葡萄球菌，⽆鞭⽑，⽆芽孢，⽆荚膜。3.⽣化反应：

1) 糖发酵试验原理：不同细菌具有不同的糖分解酶，故分解各种糖后的产物也不相同，有的产酸，有

的尚有⽓体形成，借此可鉴别各种细菌。乳糖发酵试验在肠道病原菌的鉴定中尤其重要。接种细菌若具有分解乳糖的酶，分解产酸就会使指⽰剂变⾊。如指⽰剂为酸性复红则变为红⾊；若有⽓体形成，则⼩倒管内有⽓泡集聚。

2) 吲哚 (Indol) 试验原理：有些细菌具有⾊氨酸酶，能分解蛋⽩胨中的⾊氨酸⽣成吲哚(靛基质)。吲

哚⽆⾊不能直接察见，加⼊对⼆甲基氨基苯甲醛试剂(吲哚试剂)，作⽤后能形成红⾊的玫瑰吲哚，则被⾁眼所识别。3) 硫化氢试验原理：某些细菌能分解培养基中胱氨酸等含硫氨基酸，⽣成硫化氢。硫化氢遇铁(如硫酸亚铁)或铅离⼦，则形成⿊褐⾊的硫化亚铁(或硫化铅)

沉淀物，⿊⾊沉淀物愈多，表⽰⽣成的硫化如左图所⽰在ⅠⅡⅢ区细菌分布⽐较集中，在Ⅳ区占布了⼆分之⼀的培养基中，⾁眼可见⼤量的单个菌落以供挑选纯种⽤。

氢量愈多，硫化氢试验⽤的培养基中含有硫代硫酸钠，它是⼀种还原剂，能保持还原环境，使形成的硫化氢不再被氧化。4)尿素分解试验原理：有的细菌具有尿素酶，能分解尿素形成⼤量的氨，使培养基pH值上升⽽变成碱性，使酚红指⽰剂呈现红⾊，是为阳性反应。六、讨论⼼得

培养基配成后，灭菌要充分，单个或少数细菌（或其他微⽣物的细胞、孢⼦）接种到固体培养基表⾯，如果条件适宜，就会形成以母细胞为中⼼的体形较⼤的⼦细胞群体。这种由单个或少量细胞在固体培养基表⾯繁殖形成的、⾁眼可见的⼦细胞群体称为菌落。

菌落形态包括菌落的⼤⼩、形状、边缘、光泽、质地、颜⾊和透明程度等。每⼀种细菌在⼀定条件下形成固定的菌落特征。不同种或同种在不同的培养条件下，菌落特征是不同的。这些特征对菌种识别、鉴定有⼀定意义。细胞形态是菌落形态的基础，菌落形态是细胞形态在群体集聚时的反映。细菌是原核微⽣物，故形成的菌落也⼩；细菌个体之间充满着⽔分，所以整个菌落显得湿润，易被接种环挑起；球菌形成隆起的菌落；有鞭⽑细菌常形成边缘不规则的菌落；具有荚膜的菌落表⾯较透明，边缘光滑整齐；有芽孢的菌落表⾯⼲燥皱褶；有些能产⽣⾊素的细菌菌落还显出鲜艳的颜⾊。如果细菌菌体接种于半固体培养基中或液体培养基中，是不能形成菌落的。在半固体培养基中，接种的⽆鞭⽑的细菌只沿着穿刺线⽣长，⽽有鞭⽑的细菌可在穿刺线的周围扩散⽣长。细菌菌体接种于液体培养基中，细菌⽣长后能使液体培养基变得混浊。混浊情况视细菌对氧⽓需求的不同⽽有所不同：好氧菌仅使上部培养液混浊，厌氧菌使底部培养液混浊，兼性厌氧菌使培养液上下均匀混浊；有的细菌可在培养液表⾯形成菌环或菌膜，或在底部产⽣沉淀。

临床上由于细菌感染⽽致病的各种标本及带菌者所需检查的各种标本，往往并⾮单⼀的细菌，⽽且混有其它⾮致病菌（⼈体正常菌

群）。因此当对此标本需作出细菌鉴定时，就必须从标本中分离出致病菌，称为细菌分离培养技术。另外，对已得到可疑病菌进⾏细菌鉴定及菌种保存等培养，称为纯培养接种技术。

平板划线四区法：注意要严格⽆菌操作，灼烧后接种环要冷却，划线时⽤腕⼒，不要使接种环嵌⼊琼脂，各个分区要分明，在培养⽫底部贴标签，倒置培养――防⽌细菌被冲散

不同细菌由于所含的酶系统不完全相同，因⽽对营养物质的分解能⼒及代谢产物亦不⼀致，据此，可⽤以鉴别细菌的种类。本实验采⽤⽣化技术来区别不同性质的细菌。

本实验中⽩⾊葡萄球菌在液体培养集中的⽣长现象不是很明显，有待改进，或者替换菌种