酶联免疫诊断试剂的质量控制

酶联免疫诊断试剂的质量控制

【摘要】 酶联免疫吸附试验（elisa）是免疫检验中最常用的方法，由于这种方法具有灵敏性高、特异性强、重复好（精密度）、操作方便、试剂稳定等优点，已成为免疫检验中的主要技术。尽管如此，若想用elisa方法得到准确的结果那就必须要严格按照试剂的说明书进行标准操作，并且进行全面的质量控制。以下是个人针对酶联免疫诊断试剂质量控制的几点体会和实际操作过程中需要注意的地方。

【关键词】 质量控制；酶联免疫；灵敏度；特异性；精密度；符合率

国家对hbsag、hcv、hiv、tp四项酶联免疫诊断试剂采取“批批检”的严格审查，并且强制要求对献血者进行上述四个项目的检测，被称为血筛类检测。由于批次不同和生产厂家的不同，导致在实际的工作过程中遇到试剂批内、批间重复性差和不同厂家试剂不一致结果［1］，以及试剂盒在存储以及运输的过程中的质量安全等问题，对购买的试剂进行质量控制是非常有必要的。使用前，要对试剂进行批批检查并且综合进行评价，选择灵敏度高、特异性强的试剂，以供献血者进行筛查，来控制并且减少上述四类疾病的输血传播。1 试剂检测前的质量控制

1.1 试剂的选用 在选择的试剂上必须是经卫生部批准的有生产许可证厂家生产的通过国家“批批检”批次的试剂。

1.2 试剂的准备 在实验开始前，先将试剂盒从冰箱中拿出，在室温中放置30分钟后再进行检测，使试剂盒在使用前与室温平衡，以确保满足反应微孔内的温度要求。开始实验前需要查看试剂盒中反应板的密封性和各组分渗漏情况，发现反应板不密封或者试剂渗漏时，应采取更换试剂盒的措施。为了配合实验过程中常规的洗板过程，洗涤液需要用新鲜的蒸馏水进行配制。蒸馏水的质量十分关键，它有可能造成实际空白值和阴性本底的上升。2 试剂的性能检测的质量控制

对试剂的性能检测的要求：从检测结果和预期的结果计算其灵敏度、特异性、精密度、符合率等指标来判断试剂是否符合实验室的检测要求。除了一些国家参考品外，建议各实验室确定一个或多个标准物质，用来控制检测试剂的批内和批间差异，以达到质量控制的目的。

灵敏度=真阳性真阳性+假阴性×100% 特异性=真阴性真阴性+假阴性×100% 精密度（cv）=标准差均值×100%

符合率=真阴性+真阳性真阴性+真阳性+假阴性+假阳性×100% 以乙型肝炎病毒表面抗原（hbsag）的国家参考品检测结果为例： 从表1来看：三个厂家的试剂对卫生部血清盘的前三项性能检测结果一致，但比较cv值，发现厂家2的试剂cv最低，表明精密性最好。

从表2来看，厂家1在特异性和灵敏度符合率达到100%，是三个厂家中最高。 表1 卫生部血清盘 厂家 阳性 符合率 阴性 符合率 最低检出 限符合率 cv值 （%） 是否 合格

1 3/3 20/20 3/3 5 合格 2 3/3 20/20 3/3 4 合格 3 3/3 20/20 3/3 8 合格 表2 临检中心血清盘

厂家 特异性符合率 灵敏度符合率 是否合格 1 14/14 26/26 合格 2 13/14 24/26 合格 3 14/14 25/26 合格 3 检测方法标准化

检测用的试剂必须是该批次产品的全部配套试剂组分，不同批次之间不可混用。加样量要依据说明书的规定（加样用枪应定期校准），加样速度不可过快，液体要加在孔底，避免加在孔壁上部，

这个地方最容易出现特异性吸附。试剂的加入除了要垂直滴加外，速度的均衡也是保证结果准确的方法。温育的温度和反应的时间要严格控制，反应板不应叠加在一起，为了防止蒸发最好采取封板的方式，以此来避免发生“边缘效应”的情况，提高检测的重复性［2］。显色时间必须严格按照说明书的操作进行，时间过长或时间不足都会影响结果的准确性。目前很多实验室采用全自动酶免操作系统，对于全自动仪器操作，我认为最主要的是根据说明书的要求和试剂厂家提供的一系列参数设置系统参数，更好的做到试剂与系统的匹配，提高实验室检测的质量。4 样 本

4.1 重视预防检验干扰 补体和类风湿因子以及高浓度的非特异性异嗜性抗体、交叉反应物质和异性免疫球蛋白以及某些自身的抗体等等在日常的临床标本中可能产生检验干扰的情况，从而造成假阳性，这个应当引起我们的高度重视。

4.2 样本应新鲜 如果有细菌的污染，那么菌体内就有可能伴有内源性hrp，从而会发生假阳性的反应。如果样本放置的时间过长，igg可以聚合成多聚体。那么，在间接法elisa的测定中就会导致本底太深而造成假阳性［3］。另外还要避免样本中出现严重溶血的情况。因为hb中含有血红素基因，它有过氧化物活性，如果血清中hb浓度过高，就容易出现在温育的过程中吸附于固相，从而，更容易与后面的加入hrp的底物反应显色，而造成假阳性。如不能立即测定的样本应该对其进行低温保存，来避免反复冻融。同时，

标本凝固不全的话它残留的纤维蛋白也容易造成假阳性，应该将其凝固完全以后再分离血清。5 总 结

为了保证试剂的质量，除了对试剂进行销售前的批批检查以外，国家还建立一套规范的试剂销售后的质量再评体系（如临检中心、血站、医院的室间质量评价），并且通过对市场进行产品抽样，建立市场抽样的机制和程序［4］，对保证试剂的质量及促进质量的提高都有极其重要的作用。 参考文献

［1］ 李金明.临床酶免疫测定技术［m］.北京人民军医出版社，2005（1）：11-94.

［2］ 田爱民.a型人缺乏抗一b伴严重冷凝索1例［j］.中国输血杂志2001，14(2)：117-109.

［3］ 王海滨.血液免疫学研究［a］.上海第二军医大学出版社，2008(32)：114-116.

［4］ 姜键，华敏玉，郭永芳.6例疑难血型鉴定分析［j］.临床输血与检验，2003，5(4)：291-293.