猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的RT—PCR检测

江苏农业科学２０１３年第４１卷第４期　一１９９一　蒋成砚，杨秋艳，鲁　念，等．猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的ＲＴ—ＰＣＲ检测［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（４）：１９９—２００　猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的　ＲＴ—ＰＣＲ检测　蒋成砚，杨秋艳，鲁念，王琴，唐悦，郑娥　（红河学院生命科学与＆术学院，云南蒙自６６１　１００）　摘要：根据ＮＣＢＩ登录的ＰＲＲＳＶ　Ｇ５、ＣＳＦＶ　Ｅ２的全基因序列，设计２对引物，以ＰＲＲＳＶ、ＣＳＦＶ总ＲＮＡ为模板，通　过筛选最佳ＲＴ—ＰＣＲ反应条件，利用ＲＴ—ＰＣＲ成功扩增出目的片段，证明所检测病料为猪繁殖与呼吸障碍综合征病　毒（ＰＲＲＳＶ）和猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）混合感染。　关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征；猪瘟；病毒；ＲＴ—ＰＣＲ　中图分类号：￥８５８．２８　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２—１３０２（２０１３）０４—０１９９—０２　猪繁殖与呼吸综合征（ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＲＲＳ）和猪瘟是危害养猪业的重要传染病，且经常　１材料与方法　１．１材料　出现二者混合感染，给养猪业造成严重经济损失４猪繁殖与　呼吸综合征是由病毒引起的一种高度接触性传　病，主要临　床特征为流产、产死胎、木乃伊胎、弱胎、呼吸困难，发病过程　１．１．１病料病料采自云南省蒙自市某猪场，采取病猪的肺　ＤＥＰＣ、氯仿、异丙醇、乙醇、ＭＯＰＳ、溴化乙　脏、脾脏、淋巴结、肾脏，置一２０℃保存。　中会出现短暂性的两耳皮肤紫绀，故又被称为蓝耳病。猪瘟　病毒（ｃｌａｓｓｉｃａｌ　ｓｗｉｎｅ　ｆｅｖｅｒ　ｖｉｒｕｓ，ＣＳＦＶ）是黄病毒科（Ｆｌａｖｉｖ　ｉｒｉ—　ｄａｅ）瘟病毒属（Ｐｅｓｔｉｖｉｒｕｓ）的成员，猪是该病的唯一宿主。近　年来一些原已宣布消灭猪瘟的欧洲国家如荷兰、比利时、英　１．１．２主要试剂锭、甘油、溴酚蓝、无水醋酸钠、ＮａＯＨ、ＥＤＴＡ、琼脂糖、甲醛、　ＲＮＡｉｓｏ　Ｐｌｕｓ（宝生物工程大连有限公司）、ＲＴ—ＰＣＲ试剂盒　（北京全式金生物技术有限公司）。　国、德国、意大利、西班牙等又相继暴发猪瘟，我国一些地区的　猪瘟发病率亦呈上升趋势…。目前两病混合感染有上升趋　势，给养猪业带来严重影响。本研究用ＲＴ—ＰＣＲ方法对１例　猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟混合感染病例作了检测，旨在为　１．２．３主要仪器超净工作台（苏州净化设备有限公司）、　低温离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）、微波炉（格　兰仕牌）、ＰＣＲ仪（东胜创新生物科技有限公司）、电泳仪（广　东省汕头市医用设备厂）、凝胶成像系统（上海精科实业有限　公司）。　１．２方法　防治猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟混合感染提供理论依据。　收稿日期：２０１２—０９—２８　基金项目：红河学院大学生科技创新项目。　１．２．１引物设计参照ＧｅｎＢａｎｋ中录入的ＰＲＲＳＶ　Ｇ５基因　作者简介：蒋成砚（１９７７一），男，云南宣威人，硕士，讲师，主要从事动　物微生物与免疫研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｃｙ　ｂｉｏｌｏｇｙ＠１２６．ＣＯｒｎ。　序列，通过引物设计软件Ｐｒｉｍｉｅｒ　５．０分析设计了１对引物，　上游引物（Ｐ１）５　一ＡＴＧＴＴＧＧＧＧＡＡＡＴＧｃＴＴＧＡｃＣＧ一３　；下　２３（３）：４８６—４９１．　４小结　［４］陶浩，魏炳栋，陈群．黄芪多糖对肉鸡生长性能和脏器指数及　０．０２％黄连素和０．２％黄芪多糖同时添加在ＡＡ肉鸡日　粮中，能够提高肉鸡的４２日龄体重和日增重，缩短同样体重　仔鸡的饲养周期，能够显著提高仔鸡的免疫器官指数和血清　免疫球蛋白含量，提高ＡＡ肉鸡的抗病能力，但添加黄连素和　黄芪多糖对仔鸡的饲料转化能力无显著影响。　参考文献：　胰腺消化酶活性的影响［Ｊ］．湖南农业大学学报：自然科学版，　２０１１，３７（４）：４２５—４２８．　［５］吕美．黄芪多糖粗提物对肉仔鸡生长及代谢调控的研究［Ｄ］．　郑州：河南农业大学，２００５：１６—１９．　［６］陈阳，李旭．黄芪多糖在鸡生产中的应用［Ｊ］．广东饲料，　２０１１，２０（６）：２３—２５．　［７］高杨，王洪芳，陈辉，等．饲粮添加黄芪多糖对蛋鸡免疫功能　及肠道菌群的影响［Ｊ］．动物营养学报，２０１１，２３（３）：４４７—４５１．　［１］索占伟，胡格，段慧琴，等．小檗碱对大鼠肠黏膜微血管内皮细　胞分泌一氧化氮的影响［Ｊ］．中国中西医结合杂志，２００７，２７（９）：　８３２—８３４．　［８］王俊丽，章世元，徐春燕，等．黄芪多糖对肉仔鸡生产性能和部分　免疫指标的影响［Ｊ］．中国饲料，２０１０（８）：１８—２１．　［２］孙镇平，周保华，王秋生，等．小檗碱促进肉鸡生长代谢的试验观　察［Ｊ］．中国兽医杂志，２００９，４５（１）：６９—７１．　［３］魏炳栋，于维，陶浩，等．黄芪多糖对１～１４日龄肉仔鸡生长　性能、脏器指数及抗氧化能力的影响［Ｊ］．动物营养学报，２０１１，　［９］司德昌，闵亚宏．黄芪多糖对肉仔鸡免疫功能的影响［Ｊ］．中国　预防兽医学报，２００８，３０（１２）：９７８—９８０．　［１０］张晋川，李巨银，陈光明，等．中草药组方对滨海草鸡生长和免　疫功能的研究［Ｊ］．江苏农业科学，２０１２，４０（３）：１６０—１６１．