一种兰花种子萌发培养基[发明专利]

[12]发明专利申请公布说明书

[21]申请号200810118432.7

[51]Int.CI.

A01C 1/00 (2006.01)A01G 31/00 (2006.01)

[43]公开日2009年1月28日[22]申请日2008.08.15[21]申请号200810118432.7

[71]申请人中国科学院植物研究所

地址100093北京市海淀区香山南辛村20号中科

院植物所[72]发明人王瑞霞 宋松泉 何明高 宋希强

[11]公开号CN 101352117A

[74]专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司

代理人关畅

权利要求书 2 页 说明书 9 页

[54]发明名称

一种兰花种子萌发培养基

[57]摘要

本发明公开了一种兰科植物种子萌发培养基。该培养基由NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、Na2·EDTA、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸、酪蛋白胨、土豆泥、蔗糖组成，用水定容。用本发明培养基培养兰花，不仅能够缩短种子萌发时间，还能提高种子萌发率。实验表明，用本发明培养基培养兰花，从开始播种至种子萌发，仅需2星期；种子萌发率在70％以上。本发明方法适合于多种附生兰花的培养，还具有操作简单、成本低廉的优点。因此，本发明培养基及本发明培养兰花的方法具有重要的推广价值，适于实际应用。

200810118432.7

权 利 要 求 书

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第1/2页

1、一种兰科植物种子萌发培养基，由终浓度为144.07-96.05mg·L的NH4NO3、终浓度为40.40-26.93mg·L的KNO3、终浓度为528-352mg·L的CaCl2·2H2O、终浓度为444-296mg·L

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-1

-1

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的MgSO4·7H2O、终浓度为107.29-71.53mg·L

-1

-1

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的

KH2PO4、终浓度为0.83-0.1038mg·L的KI、终浓度为6.2-0.775mg·L的H3BO3、终浓度为22.3-2.7875mg·L的MnSO4·4H2O、终浓度为8.6-1.075mg·L的ZnSO4·7H2O、终浓度为0.25-0.0313mg·L0.025-0.0031mg·L

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的Na2MoO4·2H2O、终浓度为

-1

的CuSO4·5H2O、终浓度为0.025-0.0031mg·L

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的

CoCl2·6H2O、终浓度为27.8-3.475mg·L的FeSO4·7H2O、终浓度为37.3-4.6625mg·L的Na2·EDTA、终浓度为100-12.5mg·L的肌醇、终浓度为0.5-0.0625mg·L

-1-1

-1

的烟酸、终浓度为0.5-0.0625mg·L

-1

的盐酸吡哆醇、终浓度为

-1

0.1-0.0125mg·L的盐酸硫胺素、终浓度为2-0.25mg·L的甘氨酸、终浓度为750-300mg·L

-1

-1

的酪蛋白胨、终浓度为45-20g·L

-1

的土豆泥、终浓度为

30-15g·L的蔗糖组成，用水定容。

2、根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述培养基的pH值为4.5-6.5。 3、根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于：所述NH4NO3的终浓度为120.06mg·L，所述KNO3的终浓度为33.666mg·L，所述CaCl2·2H2O的终浓度为440mg·L，所述MgSO4·7H2O的终浓度为370mg·L，所述KH2PO4的终浓度为89.411mg·L

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，所述KI的终浓度为0.415mg·L，所述H3BO3的终浓度为3.1

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mg·L，所述MnSO4·4H2O的终浓度为11.15mg·L，所述ZnSO4·7H2O的终浓度为4.3mg·L，所述Na2MoO4·2H2O的终浓度为0.125mg·L，所述CuSO4·5H2O的终浓度为0.0125mg·L，所述CoCl2·6H2O的终浓度为0.0125mg·L，所述FeSO4·7H2O的终浓度为13.9mg·L，所述Na2·EDTA的终浓度为18.65mg·L，所述肌醇的终浓度为50mg·L，所述烟酸的终浓度为0.25mg·L，所述盐酸吡哆醇的终浓度为0.25mg·L，所述盐酸硫胺素的终浓度为0.05mg·L，所述甘氨酸的终浓度为1mg·L，所述土豆泥的终浓度为30g·L，所述酪蛋白胨的终浓度为0.5g·L，所述蔗糖的终浓度为20g·L。

4、根据权利要求3所述的培养基，其特征在于：所述培养基的pH值为5.5。 5、根据权利要求1-4中任一所述的培养基，其特征在于：所述土豆泥是按照

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200810118432.7权 利 要 求 书 第2/2页

如下方法得到的：将去皮洗净的土豆切成小块，然后放入组织捣碎机中捣碎，得到的匀浆即为土豆泥。

6、一种萌发兰科植物种子的方法，是用权利要求1-5中任一所述培养基培养所述兰科植物种子，得到萌发的种子。

7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述培养的条件包括温度为24-26℃、相对湿度为49-51％。

8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述培养的条件还包括光照，光强为23-25μmol·m·s、光暗周期为12h光照/12h黑暗。

9、根据权利要求6、7或8所述的方法，其特征在于：所述兰科植物为五唇兰属、万代兰属或安诺兰属。

10、根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述五唇兰属植物为五唇兰(Doritis pulcherrima Lindl.)，所述万代兰属植物为小蓝万代兰(Vandacoerulescens Griff.)，所述安诺兰属植物为安诺兰(Anota hainanensis(Rolfe)Schltr.)。

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200810118432.7

说 明 书

一种兰花种子萌发培养基

第1/9页

技术领域

本发明涉及一种兰花种子萌发培养基。背景技术

兰科植物约有775属，19500种，广布于热带、亚热带和温带，主产南美和亚洲热带。我国有166属1000多种，主要分布在江南各省，以广东、海南、云南和台湾居多。兰科植物是一个特殊的植物类群，是被子植物中最为进化的科之一；其中白芨、天麻等可药用；少数可作香料植物，如香子兰等；而大多数种类色彩艳丽、花期长，可作为名贵的观赏植物，具有很高的商业价值。

在我国列入重点保护的1300种濒危植物中，兰科植物占了1200余种，达90％以上，主要因为自然条件下兰科植物种子萌发困难，萌发率比较低，一般不超过5％。兰花种子非常小(一个蒴果中有几万到上百万粒种子，呈粉尘状)，无胚乳，仅有分化不完全的胚细胞，在种子萌发阶段一般要依靠菌根真菌为其提供养分，不同的物种所需的菌根真菌不同。

为了满足日益增长的兰花市场需求，人们开始采用非共生萌发方法人工栽培兰花。但目前的方法中兰花种子萌发周期较长、萌发率不高，不能满足引种栽培和规模化种植的需要。

附生兰(Epiphytic)主要附生在热带雨林的树干或有少量腐殖质的悬岩上，又称为气生兰，如五唇兰(Doritis pulcherrima Lindl.)、万代兰(Vanda)和安诺兰(Anota hainanensis(Rolfe)Schltr.)等。发明内容

本发明的目的是提供一种用于萌发兰科植物种子的培养基。

本发明所提供的兰科植物种子萌发培养基，由终浓度为144.07-96.05mg·L的NH4NO3、终浓度为40.40-26.93mg·LCaCl2·2H2O、终浓度为444-296mg·Lmg·Lmg·L

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的KNO3、终浓度为528-352mg·L

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的

的MgSO4·7H2O、终浓度为107.29-71.53

-1-1

的KH2PO4、终浓度为0.83-0.1038mg·L的H3BO3、终浓度为22.3-2.7875mg·L

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的KI、终浓度为6.2-0.775的MnSO4·4H2O、终浓度为

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8.6-1.075mg·L的ZnSO4·7H2O、终浓度为0.25-0.0313mg·L

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的

200810118432.7说 明 书 第2/9页

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Na2MoO4·2H2O、终浓度为0.025-0.0031mg·L0.025-0.0031mg·L

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的CuSO4·5H2O、终浓度为

-1

的CoCl2·6H2O、终浓度为27.8-3.475mg·L

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的FeSO4·7

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H2O、终浓度为37.3-4.6625mg·L的Na2·EDTA、终浓度为100-12.5mg·L的烟酸、终浓度为0.5-0.0625mg·L

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的肌醇、终浓度为0.5-0.0625mg·L

的盐酸吡哆醇、终浓度为0.1-0.0125mg·Lmg·L

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的盐酸硫胺素、终浓度为2-0.25

-1

的甘氨酸、终浓度为750-300mg·L

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的酪蛋白胨、终浓度为45-20g·L

的土豆泥、终浓度为30-15g·L的蔗糖组成，用水定容。 所述培养基的pH值可以为5.0-6.0。

上述培养基中，效果最佳的一种培养基的各物质的浓度如下：所述NH4NO3的终浓度为120.06mg·L

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，所述KNO3的终浓度为33.666mg·L

-1

-1

，所述CaCl2·2H2O

-1

的终浓度为440mg·L

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，所述MgSO4·7H2O的终浓度为370mg·L

，所述KI的终浓度为0.415mg·L

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，所述KH2PO4

的终浓度为89.411mg·L度为3.1mg·L

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，所述H3BO3的终浓，所述ZnSO4·7H2O

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，所述MnSO4·4H2O的终浓度为11.15mg·L

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的终浓度为4.3mg·L，所述Na2MoO4·2H2O的终浓度为0.125mg·L

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，所述

CuSO4·5H2O的终浓度为0.0125mg·Lmg·L

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，所述CoCl2·6H2O的终浓度为0.0125

，所述Na2·EDTA的终浓度为

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，所述FeSO4·7H2O的终浓度为13.9mg·L

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18.65mg·L，所述肌醇的终浓度为50mg·L，所述烟酸的终浓度为0.25mg·L，所述盐酸吡哆醇的终浓度为0.25mg·Lmg·L

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，所述盐酸硫胺素的终浓度为0.05

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，所述甘氨酸的终浓度为1mg·L

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，所述土豆泥的终浓度为30g·L，所。

述酪蛋白胨的终浓度为0.5g·L 所述最佳培养基的pH值优选为5.5。

，所述蔗糖的终浓度为20g·L

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上述任一培养基中所述土豆泥是按照如下方法得到的：将去皮洗净的土豆切成小块，然后放入组织捣碎机中捣碎，得到的匀浆即为土豆泥。 本发明的另一个目的是提供一种萌发兰科植物种子的方法。

本发明所提供的萌发兰科植物种子的方法，是用上述任一种培养基培养所述兰科植物种子，得到萌发的种子。

其中，所述培养的条件可以是温度为24-26℃、相对湿度为49-51％的条件。 所述培养的条件中还可以包括光照，其中，光强可以为24±1μmol·m·s、光暗周期可以为12h光照/12h黑暗。

所述方法中，所述兰科植物可为五唇兰属、万代兰属或安诺兰属。

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200810118432.7说 明 书 第3/9页

所述五唇兰属植物具体可为五唇兰(Doritis pulcherrima Lindl.)，所述万代兰属植物具体可为小蓝万代兰(Vanda coerulescens Griff.)，所述安诺兰属植物具体可为安诺兰(Anota hainanensis(Rolfe)Schltr.)。

本发明培养基是集无机物、有机物、蔗糖、有机添加物和pH于一体的综合培养体系。用本发明培养基培养兰花，不仅能够缩短种子萌发时间，还能提高种子萌发率。实验表明，用本发明培养基培养兰花，从开始播种至种子萌发，仅需2星期，种子萌发率均在70％以上。本发明方法适合于多种兰花的培养，还具有操作简单、成本低廉的优点。因此，本发明培养基及本发明培养兰花的方法具有重要的推广价值，适于实际应用。 具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明均为常规方法。 实施例1、用培养基I培养五唇兰(Doritis pulcherrima Lindl.)和小蓝万代兰(Vanda coerulescens Griff.)种子。 一、实验原料：

种子：本实验以五唇兰和小蓝万代兰的种子为实验材料，五唇兰和小蓝万代兰的成熟果荚均采自海南。

培养基：培养基I的组成如表1所示。

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200810118432.7说 明 书 第4/9页

表1、附生兰非共生萌发高效培养基I

其中，土豆泥的制备方法如下：将土豆洗净后削皮，用刀切成小块，然后放入组织捣碎机中捣碎，得到的匀浆即为土豆泥。 二、用该培养基I培养种子的方法如下： 1、种子消毒：

(1)消毒液处理：取完全成熟的果荚，剖开果皮取出种子，将种子置于10.0ml

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200810118432.7说 明 书 第5/9页

离心管中，再向离心管中加入消毒液(消毒液为5％(质量百分含量)次氯酸钙溶液，用蒸馏水定容)，使消毒液液面没过种子，盖上离心管的盖子，放置20-40min，期间摇动3-5次；用在火焰中烧过的镊子将小块无菌棉花慢慢推入离心管中下部，将离心管的底部向上倾斜，使消毒液流出棉花块。

(2)洗涤：向步骤(1)的离心管中加入无菌水，用镊子将棉花块向上拉，无菌水随即流入离心管底部并浸没种子，用手转动数次；再将离心管的底部向上倾斜，并将棉花块朝管底方向推入，使无菌水流出棉花块。如此重复洗涤4-5次。得到消毒的种子。 2、培养：

用1-2ml 0.1％琼脂溶液(0.1g琼脂溶于100ml水中，并高压灭菌)冲洗步骤1中所述棉花块，然后取出棉花块，并将上述1-2ml 0.1％琼脂溶液与种子混匀，得到种子悬浮液；然后用移液器将种子悬浮液吸取至培养基表面，将培养皿(或培养瓶)封口，并水平方向旋转数次，使种子均匀地分布在培养基表面，然后进行培养。

培养条件为：在温度为26℃、相对湿度为51％的条件下暗培养2星期，此时种子已萌发，可统计萌发率；但此时萌发的原球茎为白色且较小，统计萌发率时较困难；为了便于统计，通常将其继续培养15天(培养条件为：光强度为25μmol·m

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·s

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、12h光照/12h黑暗、26℃、51％相对湿度)，然后再统计种子萌

发率。种子萌发率＝萌发的种子数目/总的种子数目。判断种子萌发的标准为：种子吸水膨大，胚突破种皮。

两种兰花分别设3次重复实验，每次处理100-200粒种子。结果取平均数。 结果表明，从开始播种至种子萌发所需的时间平均为14天，五唇兰的平均萌发率为86.7％；小蓝万代兰的平均萌发率为76％。 实施例2、用培养基II培养五唇兰和小蓝万代兰种子。 一、实验原料：

种子：本实验以五唇兰和小蓝万代兰的种子为实验材料，五唇兰和小蓝万代兰的成熟果荚均采自海南。

培养基：培养基II的组成如表2所示。

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200810118432.7说 明 书 第6/9页

表2、附生兰非共生萌发高效培养基II

其中，土豆泥的制备方法如实施例1中所述。 二、用该培养基II培养种子的方法如下： 1、种子消毒：方法如实施例1中所述。 2、培养：

按照实施例1中所述方法，将经过步骤1消毒后的种子接种于培养基II中。

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200810118432.7说 明 书 第7/9页

培养条件为：在温度为25℃、相对湿度为50％的条件下暗培养2星期，此时种子已萌发，可统计萌发率；但此时萌发的原球茎为白色且较小，统计萌发率时较困难；为了便于统计，通常将其继续培养15天(光强度为24μmol·m

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·s

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、12h

光照/12h黑暗、25℃、50％相对湿度)，然后再统计种子萌发率。种子萌发率＝萌发的种子数目/总的种子数目。判断种子萌发的标准为：种子吸水膨大，胚突破种皮。 两种兰花分别设3次重复实验，每次处理100-200粒种子。结果取平均数。 结果表明，从开始播种至种子萌发所需的时间平均为14天；五唇兰的平均萌发率为94.1％；小蓝万代兰的平均萌发率为73.3％。 实施例3、用培养基III培养五唇兰和小蓝万代兰种子。 一、实验原料：

种子：本实验以五唇兰和小蓝万代兰的种子为实验材料，五唇兰和小蓝万代兰的成熟果荚均采自海南。

培养基：培养基III的组成如表3所示。

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200810118432.7说 明 书 第8/9页

表3、附生兰非共生萌发高效培养基III

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200810118432.7说 明 书 第9/9页

其中，土豆泥的制备方法如实施例1中所述。 二、用该培养基III培养种子的方法如下： 1、种子消毒：方法如实施例1中所述。 2、培养：

按照实施例1中所述方法，将经过步骤1消毒后的种子接种于培养基III中。 培养条件为：在温度为24℃、相对湿度为49％的条件下暗培养2星期，此时种子已萌发，可统计萌发率；但此时萌发的原球茎为白色且较小，统计萌发率时较困难；为了便于统计，通常将其继续培养15天(光强度为23μmol·m

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·s

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、12h

光照/12h黑暗、24℃、49％相对湿度)，然后再统计种子萌发率。种子萌发率＝萌发的种子数目/总的种子数目。判断种子萌发的标准为：种子吸水膨大，胚突破种皮。 两种兰花分别设3次重复实验，每次处理100-200粒种子。结果取平均数。 结果表明，从开始播种至种子萌发所需的平均时间为14天，五唇兰三的平均萌发率为79％；小蓝万代兰的平均萌发率为79％。

以上实验结果表明，用本发明培养基培养附生兰，使附生兰不通过共生就可以萌发，而且萌发所需的时间大大缩短，仅为2星期左右，其萌发率也得到了显著的提高，均在70％以上。

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