通络止痛胶囊对佐剂性关节炎大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的调节

浙江中医杂志２００９年２月第４４卷第２期　通络止痛胶囊对佐剂性关节炎大鼠血清ＩＬ一１Ｉ３、ＩＬ一６、ＴＮＦ一　的调节＊　侯丽萍　周晓莉　田永峰。　魏　玮　田　俊　郝建军　１　山西省太原市类风湿病医院　山西太原０３０００６　２　山西省中医药研究院　山西太原０３００１２　３　北京市宣武区社区卫生管理中心　北京１０００５０　４　北京市宣武区中医院　北京１０００５０　５　华中科技大学同济医学院　湖北武汉４３００３０　６　湖北省武汉市中西医结合医院　湖北武汉４３００２２　摘要　目的：观察通络止痛胶囊对佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠血清白细胞介素一１（ＩＬ一１８）、白细胞介素一６（ＩＬ一　６）、肿瘤坏死因子０ｃ（ＴＮＦ—ｏｃ）的影响。方法：将５０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为正常对照组、空白模型组和治　疗组（高剂量组、中剂量组、低剂量组），每组１０只，用Ｅ１　ＩＳＥ测定ＡＡ大鼠外周血细胞因子ＩＬ一１Ｂ、ＩＬ一６　和放射免疫法测定ＴＮＦ　ａ的表达情况。结果：与正常组相比，ＡＡ大鼠外周血中ＩＩ　一１Ｂ、ＩＬ一６、ＴＮＦ—ｄ显著　升高（Ｐ＜０．０１），通络止痛胶囊低、中、高剂量组大鼠血清ＩＬ一１８、ＩＬ一６、ＴＮＦ—ａ水平显著低于模型组，尤以　高剂量组最显著（Ｐ＜０．０１）。结论：不同剂量的通络止痛胶囊均能够降低ＡＡ大鼠血中ＩＬ一１８、ＩＬ一６和　ＴＮＦ一０【的含量，尤以高剂量作用显著，提示通络止痛胶囊可能通过降低ＩＬ一１Ｊ３、ＩＬ一６和ＴＮＦ—ｄ，抑制ＡＡ　大鼠骨与软骨的破坏，减轻滑膜炎症。　关键词　佐剂性关节炎　ＩＬ一１Ｊ３　ＩＩ　一６　ＴＮＦ　ａ　通络止痛胶囊　大鼠　类风湿关节炎（ＲＡ）是一种以关节滑膜慢性炎症　司产品。ＴＮＦ仪器：ＤＦＭ一６型多管放射免疫计数器，　合肥众成机电技术公司生产。　２　方法　为特征的自身免疫性疾病，目前认为ＲＡ与自身免疫　因素、遗传、感染、心理因素有关，其中炎性介质和细胞　因子在ＲＡ的炎症及关节损伤中起关键性作用。我们　临床应用通络止痛胶囊治疗ＲＡ，取得满意疗效，本实　验通过观察该药对佐剂性关节炎大鼠白细胞介素一１　（ＩＬ一１Ｂ）、白介素６（ＩＩ　一６）、肿瘤坏死因子ａ（ＴＮＦ—ａ）的　２．１佐剂性关节炎（ａｄｉｕｖａｎｔ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＡＡ）大鼠模型　复制：依随机原则将５Ｏ只Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为正常对照　组、空白模型组和治疗组（高剂量组、中剂量组、低剂量　组），每组１０只，适应性喂养１周后，空白模型组和治　疗组采用完全弗氏佐剂０．１ｍｌ注射于大鼠左后足跖皮　内。正常对照组于相同部位注射生理盐水０．１ｍｌ作为　对照。　影响，探讨中药复方防治佐剂性关节炎的作用机制，为　临床立法组方提供药理学实验依据。　１　材料　１．１动物：４～６周龄清洁级Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体重２００±　２０ｇ，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。　２．２给药方法：造模后第１２天开始给药，通络止痛胶　囊治疗组按高剂量组２ｇ／ｋｇ、中剂量组ｌｇ／ｋｇ、低剂量　１．２　药品与试剂：通络止痛胶囊（山西正中药业生产，　批号：２００４０６２６）；完全弗氏佐剂（ＣＦＡ，）；ＩＩ　一１８、ＩＬ一６　（ＥＬＩＳＥ法）、ＴＮＦ—ａ（放射免疫法）试剂盒及试验试剂　组０．５ｇ／ｋｇ给药，分每日２次给药，连续给药１８天，其　他两组予同体积生理盐水，用药期间常规饲养。　２．３检测方法：各组最后一次灌药２小时后眼球取血　均由深圳达科为生物技术有限公司提供。　１．３　仪器：全自动酶标仪，３５５０型，美国ＢＩＯ—ＲＡＤ公　５ｍｌ，离心取上清液作为检测标本。ＩＬ一１８、ＩＬ一６采用双　抗夹心ＥＬＩＳＡ法，具体操作按测试药盒说明书要求进　行，于酶标仪４５０ｎｍ处读数。ＴＮＦ—ａ的测定用放射免　＊ｌ　基金项目：国家中医药管理局课题通络止痛胶囊对佐剂性　关节炎大鼠ＴＨ　／ＴＨ　及其细胞因子网络调控的研究，编号：Ｏ４—　０５ＪＩ　０４。　疫法，具体操作按测试药盒说明书要求进行。　２．４统计学处理：应用ＳＰＳＳ１１．５软件对数据进行统　计学处理与分析，各指标用均数±标准差（ｚ±ｓ）表示，　浙江中医杂志２００９年２月第４４卷第２期　两组治疗前后采用ｔ检验，组间比较采用单因素方差分　１　４　３　３　６　８　８　Ｏ　３　５　４　５　６　４　（ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｃａｓｃａｄｅ）［７］。ＲＡ患者血清及关节液中可检　２　６　３　５　析。　３　结果　９　４　测到大量的ＩＬ一１、ＴＮＦ—ａ，针对阻断二者产生、含量、效　Ｏ　４　±±±士应所设计的实验治疗也证明是有效的　。使用抗　±　Ｏ　１　１　１　ｌ　４　ｌ　Ｏ　２　９　５　Ｏ　０　与正常组相比，ＡＡ大鼠外周血中ＩＬ一１Ｇ、ＩＬ一６、　△　▲　ＴＮＦ—ａ单抗或多肽可减轻关节炎症状，表明ＴＮＦ是　▲　▲　１　ＴＮＦ—ａ显著升高（Ｐ＜０．０１），通络止痛胶囊低、中、高　２　２　７　●　５　４　８　４　ＲＡ有效的治疗靶基因＿９］。本文的研究结果表明，与正　★　●　３　５　剂量组大鼠血清ＩＬ一１Ｊ３、ＩＬ一６、ＴＮＦ—ａ水平显著低于模　１　７　Ｏ　０　１　２　８　１　常组相比，ＡＡ大鼠外周血中ＩＬ一１Ｊ３、ＩＬ一６、ＴＮＦ—ａ显著　５　２　型组，尤以高剂量组最显著（Ｐ＜０．０１）。血清ＩＩ　一１Ｊ３、　±＋一＋一±升高，提示±　ＩＬ一１Ｊ３、ＩＬ一６和ＴＮＦ—ａ介导ＲＡ的炎症反　ｌ　ｌ　ｌ　１　４　１　Ｏ　ＩＬ一６、ＴＮＦ—ａ检测结果见表１。　Ｏ　２　Ｏ　４　６　５　９　应。２　　△　▲　▲　▲　表１　通络止痛胶囊对ＡＡ大鼠血清Ｉ　１Ｇ、ＩＬ一６、　３　２　ＴＮＦ－ａ的影响（　一１０，　±ｓ）　８■　　７●　　７●　　９　６　Ｏ　４　８　８　组别　ＩＬ－Ｉ￣（ｎｇ／１）　ＩＬ一６（ｎｇ／１）ＴＮＦ－ａ（ｎｇ／１±）　Ｏ　±２　±ｌ　正常对照组　４　ｌ　２　７　９　４　空白模型组　△　▲　低剂量组　中剂量组　高剂量组　注：与正常组比较，△Ｐ＜０．０１；与模型组比较，▲Ｐ＜０．０１；　与低剂量组比较，●Ｐ＜０．０１；与中剂量组比较，★Ｐ＜０．０１。　４讨论　佐剂性关节炎动物模型是细菌学家Ｆｒｅｕｎｄ于上　世纪５Ｏ年代创立，又称福氏佐剂关节炎，造模多采用　大鼠。研究表明，ＡＡ大鼠的关节组织病理学及血中变　化改变－ｂ＇Ａ　ＲＡ类似口　；，且存在明显的免疫功能异　常＿３］，是一种典型的免疫性炎症模型，是人类类风湿关　节炎经典病理模型之一，适合于研究类风湿性关节炎　的发病机制和评价抗关节炎药物的作用。该法成熟可　靠，操作简便，被大量引用。本实验中，空白模型组和　治疗组注射ＣＦＡ２～３小时出现注射侧原发性肿胀；注　射后第３天，大鼠出现急性炎症反应：活动不利，倦怠，　进食减少，注射部位红、肿、痛；第１１～１５天开始出现　全身广泛性炎症，多关节红、肿、痛，倦怠乏力加重，进　食减少，足部活动明显受限。与文献报道相符，提示造　模成功。　现普遍认为，ＩＬ＿１、ＴＮＦ—ａ是ＲＡ发病机理中居中　心地位的促炎性因子，具有诱导炎症、酶的释放、纤维　细胞增生及组织损伤的作用；ＩＬ一６也是ＲＡ关节炎症　中主要的炎症介质，主要诱导免疫球蛋白的产生及急　性期蛋白的形成，增强ＩＬ一１、ＴＮＦ—ａ的效应¨４］，放大对　关节的损害作用＿５］，并诱导其他细胞因子如ＩＬ一１、ＩＬ一２　的产生并发挥致病作用＿６　；ＩＬ一６异常表达和失调是ＲＡ　的典型特征，是病程进展的重要病理因子。ＩＬ－１，ＩＬ一６，　ＴＮＦ—ａ被称为“前炎症因子”，三者之间互相作用。　ＴＮＦ＿ａ既可中和自身前炎症细胞反应，还可调节ＩＬ一１Ｇ　的表达，对ＩＬ一１、ＩＬ一６的增多与减少起中枢调节作用。　故有人认为ＴＮＦ—ａ启动了ＲＡ细胞因子的级联反应　●　★　　１　通络止痛胶囊是侯丽萍主任医师根据《温病条辨》　●　加减木防已汤、宣痹汤等，结合清末民初老中医石广济　５●　　５　６　先生的临床经验加减化裁而来，由防已、薏苡仁、黄柏、±　　１　滑石粉、连翘、半夏、稀莶草、苦参、百部等组成，临床研　２　Ｏ　▲　究表明具有良好的抗炎止痛、调节免疫系统及副作用　●　★　小的特点，能尽快控制病情，明显缓解症状，对湿热痹　效果显著口　。本方辛凉解肌表之热，辛淡渗在里之湿，　俾表邪从气化而散，里邪从小便而驱，上行肺气，通水　之上源，气行则水亦行；中调脾胃，运水之枢纽，气化则　湿亦化；下开水道，疏水之出路，湿去则热亦去，恰合湿　热痹之病机。湿热既去，经络通畅，通则不痛，故疾病　向愈，临床疗效显著。本试验结果表明：不同剂量的通　络止痛胶囊均能够降低ＡＡ大鼠血中ＩＬ一１ｊ３、ＩＬ一６和　ＴＮＦ—ａ的含量，尤以高剂量作用显著，提示通络止痛胶　囊可能通对过降低ＩＬ一１ｌ３、ＩＬ一６和ＴＮＦ—ｑ，抑制ＡＡ大　鼠骨与软骨的破坏，减轻滑膜炎症。　５参考文献　［１］叶日乔，祁文，黄有荣．补阳还五汤对佐剂性大鼠关节炎病理　形态学的影响［Ｊ］．中医正骨，２００４，１６（３）：１１－１２．　［２］李慧玲，邬剑，李雅江．大鼠佐剂性关节炎免疫功能的改变　［Ｊ］．黑龙江医药科学，２００４，２７（１０）：４５—４６．　［３］马东来，李俊，陈敏珠，等．大鼠佐剂性关节炎的诱导及其免　疫异常研究［Ｊ］．中国实验临床免疫杂志，１９９５，７（３）：１３．　［４］柏干苹，方勇飞．细胞因子与类风湿性关节炎［Ｊ］．临床内科　杂志，２００１，１８（４）：２５７—２５９．　［５］李景怡．类风湿关节炎相关机制研究进展［Ｊ］．医学综述，　２００３，９（１Ｏ）：６１９－６２１．　［６］李霞，孙健，范成明．细胞因子与类风湿关节炎［Ｊ］．大连大学　学报，２０００，２１（４）：１０２—１０５．　［７］叶霜，孙凌云．类风湿关节炎的药物治疗进展［Ｊ］．中华风湿　病学杂志，２０００，４（２）：１１１．　［８］蔡青，韩星海，孟济明．类风湿关节炎的病理生理及生物学治　疗进展［Ｊ］．中华风湿病学杂志，２０００，４（３）：１８３—１８６．　［９］燕太强，吕厚山，药立波，等．ＴＮＦ－ａ对类风湿关节炎滑膜细　胞中ＭＡＰＫ的作用『Ｊ］．中华风湿病学杂志，１９９９，３（３）：１３５．　［１Ｏ］周晓莉，白薇，陈旭东．通络止痛胶囊治疗湿热型类风湿关　节炎的临床研究［Ｊ］．中国新医药杂志．２００４，３（５）：６８—７０．　收稿日期　２００８—１２－０５　●　２Ｏ　９　５　±ｌ　Ｏ　Ｏ　▲　●