基质金属蛋白酶在疾病诊断中的应用及其检测方法_NormalPdf

JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2020，51（5）：614-621基质金属蛋白酶在疾病诊断中的应用及其检测方法

吴玉冰，尹莉芳，秦超*

（中国药科大学药学院药剂系，南京211198）

摘

要

近年来，随着对基质金属蛋白酶与疾病关系的研究逐渐深入，越来越多的研究发现基质金属蛋白酶与多种疾病的

严重程度、诊断和预后等密切相关。因此基质金属蛋白酶作为一种非常有潜力的生物标志物得到了越来越多的关注。本文总结了基质金属蛋白酶在肿瘤、心血管疾病、炎症性疾病和神经退行性疾病等疾病诊断中的应用，并对基于RNA水平、蛋白质水平和MMPs的水解酶活性的3类检测方法进行了介绍，以期为基质金属蛋白酶检测的临床应用提供理论参考。关键词

基质金属蛋白酶；生物标志物；疾病诊断；检测技术

R966；Q71

文献标志码

A

文章编号

1000-5048（2020）05-0614-08

doi：10.11665/j.issn.1000-5048.20200514

引用本文吴玉冰，尹莉芳，秦超.基质金属蛋白酶在疾病诊断中的应用及其检测方法［J］.中国药科大学学报，2020，51（5）：614–621.

中图分类号

Citethisarticleas：WUYubing，YINLifang，QINChao.Clinicalapplicationanddetectionofmatrixmetalloproteinasesindiagnosis［J］.J

ChinaPharmUniv，2020，51（5）：614–621.

DepartmentofPharmaceutics,SchoolofPharmacy,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing211198,China

WUYubing,YINLifang,QINChao*

Clinicalapplicationanddetectionofmatrixmetalloproteinasesindiagnosis

AbstractRecently,anincreasingnumberofstudieshavefoundthatmatrixmetalloproteinase(MMPs)arecloselyrelatedtotheseverity,diagnosisandprognosisofavarietyofdiseases.MMPshavethereforealsogainedincreasingattentionasapotentialbiomarker.Inthispaper,theapplicationofMMPsinthediagnosisoftumors,cardiovasculardiseases,inflammatorydiseasesandneurodegenerativediseaseswassummarized,andthreetypesofdetectionmethodsbasedonRNAlevel,proteinlevelandhydrolaseactivityofMMPswereintroduced,whichaimstoprovidesometheoreticalreferenceforthestudyofclinicalapplicationofMMPsdetection.Keywordsmatrixmetalloproteinases;biomarker;diseasediagnosis;detectiontechnology

ThisstudywassupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(No.81871477)

细胞外基质（ECM）是组织的细胞外组分，能够起到为细胞提供支持、储存生长因子、调节细胞运动、细胞间相互作用和细胞间通讯的作用。ECM由多种基质大分子组成，这些基质大分子的括胶原蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白、糖蛋白、蛋白聚糖和糖胺聚糖等［1］。在涉及维持组织稳态和再生的生物过程（例如伤口愈合和纤维化）

收稿日期基金项目

2019-11-27

*

中，ECM的形成和降解是其中的关键［2］，控制这一关键生理过程的酶被称为基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases，MMPs）。MMPs是锌依赖型内切酶，能够共同切割ECM的所有成分。

具体组成和结构因组织而异。ECM的主要成分包

MMPs，其中23种被发现在人体内有表达。MMPs使用数字进行编号，从MMP-1到MMP-28。但是由于有不同团队同时发现同一种MMP的情况出现，

目前，在脊椎动物中共鉴定出24种已知的

通信作者Tel：025‒83271018E-mail：nada77@163.com

国家自然科学基金资助项目（No.81871477）

第51卷第5期吴玉冰，等：基质金属蛋白酶在疾病诊断中的应用及其检测方法

615所以6和MMPMMPs-22的编号中不包括MMP-4、MMP-5、MMP-［3］。基于在体外的底物特异性，可以

将MMPs分为7类［1，4］

：（1）胶原酶（collagenases），包

括Ⅰes蛋）、MMP-1、MMP-8、MMP-13和MMP-18，能够切割

白，Ⅱ包括、Ⅲ（明MMP型间质胶原蛋白；胶）和-2和基MMP底膜-9（2）明胶酶（gelatinas⁃蛋，能够切割变性的胶原白；（3）基质溶解素（stromelysins），包括MMP-3、MMP-10和MMP-11，

能够切割层粘连蛋白和其他基底膜蛋白；（4）间质溶素（matrilysins），包括MMP-7和MMP-26，缺乏羧基末端结构域，能够切割蛋白多糖、层粘连蛋白、弹性蛋白和MMPs），在细胞表面表达并通过糖磷脂酰肌醇锚

Ⅳ型胶原蛋白等；（5）膜型MMPs（MT-（MMPMMP属弹性蛋白酶-15-17、MMP和MMP-（16metalloelastase和-25MMP）或跨-24）膜与质膜连接；结构域（MMP-14、），包括MMP（-126），金切割弹性蛋白和一些基底膜蛋白；（7）其他MMPs，包括MMP-19、MMP-20、MMP-23和MMP-28。

大多数MMPs不是组成型表达的，并且大多数细胞需要被激活以表达MMPs。MMPs的活性在转录和翻译后水平以及细胞定位中受到严格调节［4］MMPs。后会引起各种疾病，与其抑制剂之间的平衡相互作用受到影响例如炎症、关节炎、牙周病、血管疾病、糖尿病、纤维化、肿瘤、恶性血液病以及神经系统疾病等。由于它们在许多疾病中的重要作用，MMPs已经成为许多疾病治疗的靶点以及疾病诊断和预测的生物标志物。

本文主要总结MMPs作为生物标志物在各种疾病诊断中的应用以及检测方法，以期对MMPs的临床应用的进一步发展提供参考。1

基质金属蛋白酶在疾病诊断中的应用增殖、MMPs分化、参与到人体许多生理功能中，凋亡、免疫功能、组织愈合以及血管生例如细胞成等。并且MMPs的活性在转录、翻译、酶促激活

和MMPs调节也参与到许多病理过程中蛋白的抑制等方面都受到严密的调控。［5］，例如组织破坏

（如肿瘤侵袭和转移、关节炎、溃疡、炎症性疾病等），纤维化（如肝硬化、多发性硬化、动脉粥样硬化等），基质降解（如心肌病、主动脉瘤）以及各种骨关节疾病等。因此MMPs及其抑制剂TIMP被认为是许多疾病的潜在生物标志物，可以应用于疾病诊断，1.1

预后和监测中。ECM肿

是肿瘤微环境基质的非细胞成分，瘤

瘤中形成支架，主要负责促进肿瘤恶性表型［6］在肿。肿

瘤组织中的ECM主要由肿瘤相关成纤维细胞（CAF）产生，作为一种大分子复杂网络，具有独特的物理、生化、生物力学性质，并随着肿瘤的发展经历广泛的重塑［7］。人体内的MMPs家族由23种内肽酶组成，这些酶在肿瘤侵袭、转移［8］和血管生成［9］中具有重要作用。它们还对细胞行为产生显著影响，如转移性肿瘤细胞的生长和上皮细胞运动性的增加。MMPs在ECM重塑中起到了关键作用，并且参与各种形式的肿瘤进展，因此，MMPs作为肿瘤进展和转移性侵袭的生物标志物，已经逐渐成为临床监测多种肿瘤的重要工具。

2017年，Peisker等［10］研究发现，原发口腔鳞状

细胞癌患者与对照组相比，唾液中的MMP-9水平

明显升高，通过检测唾液中MMP-9的变化有助于临床口腔鳞状细胞癌的早期检测。Eissa等［11］的研究结果也表明，TIMP尿液中MMP-9/TIMP-2比MMP于-单2的比值可以作为膀胱癌的新型标志物。相和MMP-2/个蛋白的生物增加，-2/TIMP并且提高了在浅表和低度恶性肿瘤中的敏

-2的比值的敏感性和特异性都有显著指标，MMP-9/TIMP-2和

感性。

另外，MMPs在实体瘤中呈现特异性的时空分布，针对过表达MMPs设计荧光探针可以对肿瘤进行Cheng生物原理，同时对等成像，有助于肿瘤的精确诊断和治疗。［12］设计了以荧光共振能量转移（FRET）为MMP-2和Caspase-3进行生物成像的荧Caspase光探-3针分别独立进行时间和空间定位，。这种荧光探针可以对MMP有望应

-2和用于简化精确肿瘤诊断和成像过程。1.2

正常心肌拥有许多种心血管疾病

ECM蛋白，包括胶原蛋

白、层粘连蛋白、纤连蛋白和低水平的基质细胞蛋白。这些蛋白都在心脏的生理功能中发挥作用，其中最丰富的是胶原蛋白，它能够形成一个复杂的网络，为心肌提供三维结构和拉伸强度［13］。在心血管疾病中，胶原网络的破坏需要可以切割胶原蛋白的MMPs参与。MMPs在血管重塑和血管生成［14-15］，侧支动脉形成［16］和血栓形成与消退［17］等多

616学报JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2020，51（5）：614-621第51卷

个过程中起重要作用，并且与动脉粥样硬化、主动脉瘤、缺血性卒中等多种血管疾病的发病机制相关［18］。因此，多种MMPs，包括MMP-1、MMP-2、MMP心血管疾病的诊断和监测工具。

-7、MMP-8和MMP-9等，经研究发现可以用作7928名受试者进行调查和随

访，发现KormiMMP等［19］对-8的血清浓度与冠状动脉疾病、心肌

梗死、脑卒中等多种心血管疾病风险相关。MMP-8关性。将与TIMP-1MMP的比值与心肌梗死的风险存在显著相-8和TIMP-1作为生物标志物有助

于预测心血管疾病和死亡风险。2017年，Zhong等［20］对来自中国急性缺血性卒中抗高血压试验CATIS）的3186名参与者的血清MMP-9进行了测量，发现血清MMP-9水平升高与死亡和严重残疾风险增加有关，血清MMP-9可能是缺血性卒中的重要预后因素。因此将血清MMP-9加入常规危险因素进行监测可能改善对死亡或严重残疾结果的风险预测。1.3

MMPs炎症性疾病

们可以调节炎症细胞从脉管系统向组织中炎症部可以在各种水平上协调炎症功能。它

位的迁移，还通过加工ECM成分、生长因子、细胞因子和趋化因子来调节炎症细胞的募集和向炎症部位的流入［21］，在生理和病理学上都积极参与到炎症反应中，是炎症标志物之一。MMPs作为炎症标志物可以帮助诊断和治疗某些炎症性疾病，包括类风湿关节炎［22-23］

，牙科炎症

［24］

和羊膜内炎症导

致的早产

［25-26］

等。

清MMPZhou-3等［27］对151名类风湿关节炎患者进行血

水平的测试和关节超声评分，发现血清MMP有效反映中重度类风湿关节炎患者的疾病活动，-3水平与关节超声评分结果密切相关，可以

并且可以灵敏且稳定地监测中重度类风湿关节炎患者的治疗反应。血清MMP-3和关节超声评分的联合使用可以作为临床监测类风湿关节炎疾病活动和治疗功效的简单且准确的评估方法。Alek⁃sandrowicz等［28］曾报道种植体周围龈沟液中的MMP监测种植体周围龈沟液中的-8水平与黏膜炎或种植体周围炎相关。通过MMP-8水平，有助于在表现出临床症状之前对黏膜炎或种植体周围炎

进行早期诊断并迅速进行治疗。

1.4

神经退行性疾病，神经退行性疾病

包括阿尔茨海默病、帕金森

病、多发性硬化、肌萎缩性脊髓侧索硬化症和亨廷顿舞蹈病等，是一种以神经元结构和功能逐渐丧失为特征的神经系统疾病。中枢神经系统（CNS）中的ECM主要由蛋白多糖组成，对神经细胞的发育、存活和活动至关重要。MMPs主要通过以下方式参与调节神经系统病变常见的神经炎症过程［29］：（1）ECM蛋白水解；（2）细胞增殖、分化和迁移；（3）炎症介质的激活和失活；（4）血-脑脊液屏障的通透性。因此，MMPs的水平变化可能作为神经退行性疾病早期诊断和疾病监测的潜在生物标志物。

Valado等［30］对葡萄牙人群中多发性硬化症患

者MMP-9血清浓度进行了研究，发现多发性硬化

症患者的血清9MMP-9显著高于健康人，并且力。有作为2016IFN年，-Gerwienβ治疗患者预后效果的标志物的潜MMP-等［31］曾报道使用一种荧光和放射性标记的MMP抑制剂观察自身免疫性脑脊髓炎（一种多发性硬化症）动物模型脑中的MMP活性，并使用放射性MMP配体进行MMP活性的正电子发射断层扫描（PET）成像。通过追踪MMP活性，检测到多发性硬化症早期的病变和持续白细胞浸润，作为一种非侵入手段，监测多发性硬化症病变的形成和进展。1.5

由于其他疾病

MMPs对人体许多病理过程的广泛参与，还有其他许多疾病也可以利用MMPs作为诊断或预后的检测指标。Zhou等［32］研究发现，不同肾病患者的尿液中MMP-7水平显著高于正常受试者，并且尿液中MMP-7水平与肾纤维化评分密切相关。MMP-7可以作为肾脏纤维化病变的非侵入性生物标志物，Sigal等并且还是纤维化的重要致病介质。［33］对70种潜在生物标志物与结核病的相关性进行了筛选，MMP-8是最终被确认与疾病严重程度和治疗反应相关的7种生物标志物之一。通过测量血液中MMP-8，可以确定疾病严重性并在治疗期间对疾病进行监测。Lertudomphonwanit等［34］曾报道MMP-7可以作为胆道闭锁的诊断生物标志物，并且当MMP-7与胆汁淤积的标志物γ-谷氨95%酰。

转肽酶（GGT）组合时，诊断性能能够达到（第51卷第5期吴玉冰，等：基质金属蛋白酶在疾病诊断中的应用及其检测方法

6172基质金属蛋白酶的检测

在MMPs的表达过程中，MMPs先通过转录、翻

译的过程以酶原的形式产生，随后通过蛋白水解或化学激活，才能够最终生成具有活性的MMPs。根MMPs据在这一过程中检测目标物的不同检测；（的检测方法分为2）基于蛋白水平的检测；3类：（1）（基于3）基于RNA，可MMPs水平的以将的水解酶活性的检测。2.1

MMPsRNA的合成需要经过水平

检测mRNA的水平，就能够研究mRNAMMPs的转录。通过的转录表达情况。常用的检测mRNA的方法主要包括反转录-聚合酶链式反应、2.PCR1.1

反转录-聚合酶链式反应核酸探针和Northern（RT-印迹杂交。PCR）RT再PCR以是先将技术。通过使用荧光监测扩增反应可以将实cDNA作RNA为反转录成为互补模板通过PCR进DNA行扩（cDNA增的）一后，-

种时荧光定量PCR与RT-PCR结合，对特定RNA序列进行快速灵敏的定量检测，该技术被广泛用于

研究和临床环境中的基因表达分析和病毒RNA定量。Lee等

［35］

为了研究缺氧和促炎刺激对类风湿

炎症关节中的MMP-1和MMP-13表达情况，在缺氧和常氧条件下，ILMMP-1β刺激下滑膜成纤维细胞的使用实时半定量VEGFRT-PCR、MMP检测了-12.列的核酸在体内或体外进行标记，1.2

-13的分泌水平。和核酸探针

核酸探针是指将已知碱基序

使其可以通过

碱基互补配对特异性检测组织或细胞中目标DNA或RNA，直接、简便地研究目的基因表达和定位的一种技术。根据核酸探针的来源和性质可以将其分为cDNA探针、基因组DNA探针、寡核苷酸探针、1RNA探针等。Shiozawa等［36］曾使用与人MMP来检测mRNAMMP片段互补的寡核苷酸探针进行原位杂交--1mRNA，从而研究MMP-1在人大肠癌中起到的作用。探针在3′尾端用洋地黄毒苷进

行标记。2.通过电泳分离不同相对分子质量的1.3

Northern印迹杂交

NorthernRNA印迹杂交是

后将其转

印到印迹膜上，并使用与部分或全部靶序列互补的杂交探针进行检测的技术。Northern印迹检测的优势包括可以检测RNA大小，观察剪接产物等，

并且转印完成的印迹膜可以进行长期储存和重复检测。与RT-PCR相比，Northern印迹法灵敏度较低，Li与活性高于等但特异性高，可以减少检测中的假阳性结果。［37］为了确定结膜松弛症是否与MMPs的表达TIMPs相关，使用Northern杂交对正常

人和患者结膜成纤维细胞中的MMPs、TIMPs和尿激酶纤溶酶原激活剂（uPA）的mRNA水平进行了检MMP测。发现患者结膜成纤维细胞中MMP-12.2

-3蛋白质水平

的转录表达显著增加。和MMPs基于蛋白质水平的检测即利用免疫手段对

MMPs进行检测，昂贵的抗进行识别。这些方法需要使用到价格较为是通过抗原抗体的特异性结合对

MMPs抗体，可以识别酶原形式的MMPs

和活性2.MMPs。子生物学及生物化学等多种学科中广泛使用的分2.1

Western印迹杂交

Western印迹杂交是分

析技术，用于定性和半定量检测单个蛋白质和蛋白修饰，特异性强、灵敏度高，但操作繁琐，成本较高。2019年，Ando等［38］的研究中，将Western印迹杂交作为乳腺癌患者尿液外泌体中MMP-1蛋白水平的检测手段，发现MMP-1有可能成为乳腺癌筛查的生物标志物。2.种固相酶免疫测定2.2

酶联免疫吸附测定（EIA），在各行业中都被广泛使（ELISA）ELISA是一

用。通常形式的ELISA测定是将具有未知抗原量的样品特异性或非特异性地固定在固体支持物表面，然后添加检测抗体与抗原形成复合物。检测抗体可以使用与酶连接的二抗进行检测或直接使用酶标记的抗体作为检测抗体。最后添加酶促底物产生可见信号，Farkas等通常使用呈色反应进行检测。［39］曾通过使用ELISA测定炎性肠病患者粪便中的MMP-9水平，发现粪便MMP-9对检测内镜下活跃的溃疡性结肠炎和囊袋炎具有很高的灵

敏度，2.异性抗体选择识别组织切片细胞中抗原的一种免2.3

可以作为评估肠道炎症的非侵入性方法。免疫组织化学（IHC）免疫组化是利用特

疫染色技术。抗体通常与酶或荧光基团连接进行可视化检测。免疫组化技术已经被广泛应用于诊断异常细胞以及对特定分子标志物的检测。通过使用这一检测方法，可以了解生物标志物和差异表达蛋白在生物组织不同部位的分布和定位。

618学报JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2020，51（5）：614-621第51卷

RoyMMPs等［40］技术分析了肿瘤和正常胰腺组织中的生物标志物或TIMPs为了研究胰腺恶性肿瘤能否使用尿液作为疾病预测因子，使用免疫组化表达，TIMP-并与尿液检测结果进行对照，1可能在胰腺恶性肿瘤的检测中具有诊断

发现MMP-2和价值。2.异性结合来对细胞内特定生物分子靶标进行定位2.4

免疫荧光

免疫荧光是通过抗原抗体特

的免疫染色技术。免疫荧光可以观察到目标分子或结构在样品中的分布，并进行半定量分析。通过与具有不同功能的显微镜结合，可以达到超高分辨率成像、实时跟踪、分层扫描等效果。Zhou等［41］在研究MMP-1在大鼠脊髓损伤模型中的表达时，使用了免疫荧光染色对MMP-1进行了免疫反应性和共定位研究。2.测定2.（5

magnetic电化学磁免疫传感器

affinityimmunoassay磁分离酶联免疫

，MAIA）是一种

使用磁珠代替传统的固相载体对样品中抗原进行分离的免疫测定方法。通过使用抗体标记的磁珠与目标抗原结合，利用磁力分离代测样品中的目标抗原。blotMAIA的方法和原理与ELISA有高灵敏度、非常相似，高特异性、但可以在液体介质中进行检测，和Western操作简便、样品用量少等具特点。将MAIA与电化学检测技术相结合可以用来开发电化学磁免疫传感器neto量，-简化检测步骤。immunosensors），大幅度提高检测灵敏度和通（electrochemicalmag⁃2018年，Ruiz-Vega等［42］使用辣根过氧化物酶聚合共轭物（Poly-HRP）作为信号放大器，开发了单步仅需5min的MMP-9磁免疫测定法，并生产了一种简单便宜的磁性固定器用于多重电化学检测。该检测法可以使用现成的商用底物溶液，并且足够简便快速，可以应用于现场护理或由非专业人员进行检测。2.3

MMPsMMPs是一种锌依赖型的内切酶。根据酶对的水解酶活性

底物的特异性，可以使用MMPs的底物（通常是明

胶）或特定的氨基酸序列对MMPs进行识别，并使用不同方式产生可检测的信号。这些方法可以只检测具有活性的MMPsMMPs的水平，直接反应样品中2.的活性变化。物，3.对明胶敏感的1

明胶酶谱

MMPs明胶酶谱法是以明胶作为底

（MMP-2和MMP-9）进行测

定的一种酶谱检测。根据检测部位不同可以分为凝胶酶谱、MMP灵敏度、-9对明胶的特异性，原位酶谱和体内酶谱。由于低成本的检测方法被广泛应用于明胶酶谱法作为一种高MMP-2和MMP-2

和MMP-9的检测中。Fietz等［43］使用明胶酶谱法对马关节中的MMP-2和MMP-9进行检测，发现疾病关节中2.敏感肽与不同检测基团结合可以制备3.2

MMP敏感肽

-2和MMP使用可以被-9的活性均有所升高。MMPs特异性切割的

MMPs特异

性探针。由于MMPs敏感肽连接方便、特异性高，可以作为一种通用的MMPs识别方式与多种不同的信号检测方式进行组合，得到广泛应用。

（1）荧光成像

MMPs敏感肽最常见的应用方

式是与各种荧光基团连接，利用荧光成像进行检测和定位。例如在荧光探针中，可以通过荧光共振FRET能量转移（Försterresonanceenergytransfer，性切割时，）使荧光基团淬灭。当敏感肽被荧光基团释放恢复荧光，产生可检测的

MMPs特异荧光信号。

Li等［44］使用从量子点（供体）到有机染料（受

体）的荧光共振能量转移，结合MMP-2特异性肽底物制备MMP-2时，MMP多肽的选择性切割导致量子点荧光恢-2特异性荧光探针。当探针暴露于复。该探针可以应用于肿瘤部位MMP-2的监测

中。2016年，Han等［45］报道了一种基于聚二甲基硅氧烷（PDMS）的微流体装置，其中固定了水凝胶构架的纳米纤维基质。FITC荧光标记的MMP-9特异性肽被固定到纳米纤维基质上。当敏感肽在反应室中与含MMP-9的溶液反应时，FITC被释放，在检测区产生荧光流。该检测方式相应快速，检测限低，并且微流体系统可以重复使用。

（2）化学交换饱和转移

化学交换饱和转移

chemicalexchangesaturationtransfer，CEST）是一种核磁共振成像新方法。它是通过使用特定脉冲对特定物质（比如蛋白质、葡萄糖、黏多糖等生物大分子）中的氢质子进行饱和，饱和氢质子通过化学交换，影响水分子信号的变化，通过检测水的信号，可以间接反应目标物质的含量。使用镧系金属螯合物可以制成顺磁性CEST效应。2017年，FerrautoCEST等对比剂，以加强［46］报道了一种脂质体CEST检测剂，使用MMP-2敏感肽在脂质体表面连接生物素和亲和素分子。通过MMP-2切割后

（第51卷第5期吴玉冰，等：基质金属蛋白酶在疾病诊断中的应用及其检测方法

619脂质体内水共振的化学位移来定量检测MMP-2的水平。

（3）电化学生物传感器

使用电化学传感器

检测MMPs除了使用特异性抗体修饰的免疫传感器，还可以使用可被酶降解的天然或合成底物包被在电极表面，制成活性传感器。通过电极将目标分子的浓度信息转换成电势、电流、电阻或电容等可测量的响应信号，从而进行定性或定量检测，该方法具有灵敏度高、易微型化等特点。Biela等

［47］

使用氧化葡聚糖包被电极，并与含有MMP-9

特定切割位点的肽交联来生产生物传感器。薄膜暴露于酶后导致薄膜降解，可以通过测量阻抗来进5行检测。传感器响应迅速，在添加MMP-9后2.min锌依赖型的内切酶，3.3

内即可观察到明显的阻抗变化。基于活性位点的荧光探针

通过检测MMPs催化活性区的由于MMPs是

锌离子，可以检测活性MMPs。Li等［48］报道了一种针对MMP活性位点中的Zn2+的DNA探针，MMPs的金属位点可以在紫外光下暴露，通过次氮基三乙酸FITC（NTA）修饰的核酸探针可以与其结合，现对活性和BHQ1MMP修饰的分子信标进行荧光成像，再通过-9的特异性检测。实3

结

语

随着对MMPs作为生物标志物的进一步研究，其检测技术也得到了快速发展。传统的实验室方法繁琐耗时，已经不能满足临床疾病诊断和跟踪评估的要求，人们对更加快速、灵敏、简单、高通量检测方法的需求日益增加。近年来，随着电化学检测技术、测流色谱技术

［49］

、生物芯片技术

［50］

等新

型检测技术的快速发展，已经有人尝试将这些检测技术与传统的MMP-2检测方法相结合，以开发可以满足临床检测需求的检测系统。可以期待特异性高、反应灵敏的快速检测方法成功完成开发并且进行产业化生产，从而为相关疾病的预防、诊断和治疗提供一种经济快速的辅助检测方案，并为相关药物的研发提供支持。

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第51卷第5期吴玉冰，等：基质金属蛋白酶在疾病诊断中的应用及其检测方法

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·校园信息·“创新药物发现与成药性评价研讨会”在中国药科大学召开召开。此次研讨会由中国药学会药物化学专业委员会和中国药学会应用药理专业委员会共同主办，中国药科大学承办，采用了现场研讨与线上直播相结合的形式。中国科学院院士陈凯先教授、中国工程院院士王广基教授和中国药科大学副校长郝海平教授分别代表中国药学会药物化学专业委员会、中国药学会应用药理专业委员会和中国药科大学致辞。会议由中国药科大学尚靖教授和徐云根教授主持。本次会议围绕“发扬抗击新冠肺炎精神，推动药学事业高质量发展”的主题，邀请了中国药科大学郝海平教授、浙江中医药大学陈忠教授、云南大学罗晓东教授、华东理工大学李洪林教授以及中山大学附属肿瘤医院李苏教授等专家进行了精彩的报告。郝海平教授的报告题目是“MASH药物的研究与思考”，他对脂肪肝的发病机制、研究进展、相关靶点的发现以及治疗对策进行了深入的解析，为抗脂肪肝药物的研发提出了新的思路。李洪林教授的报告题目是“抗RNA病毒候选药物的发现”，他分享了利用自行建立的药物靶标识别及药物发现方法及软件，发现了高效的抗新冠病毒（2019-nCoV）候选药物，并推向临床试验，部分研究成果获得了国际同行的高度关注和好评。陈忠教授的报告题目是“癫痫发病机制解析与治疗药物新靶点”，他针对癫痫的发病机制开展了大量扎实的基础研究工作，揭示了癫痫成因的一些新机制，并针对发病新机制和新靶标，开展创新药物研究，取得了阶段性成果。罗晓东教授的报告题目是“天然吲哚生物碱新药创制”，他领导的课题组通过对灯台叶总生物碱新药的长期研究，从药材质量控制、活性成分制备纯化及活性筛选，直至推向IIa期临床研究，基于该药物对肺炎和支气管炎的良好预后，被推荐用于新冠肺炎的治疗。李苏教授报告的题目为“精了一道精彩纷呈的学术大餐。本次会议除了60余位代表参加线下会议外，还吸引了来自全国各地共计1913位代表观看了线上直播。会议的成功召开，对于促进学科交叉融合、拓宽创新药物研究思路等方面起到积极的推动作用。（药学院、药物科学研究院）9月8日上午，2020年中国药学大会第四分会场“创新药物发现与成药性评价研讨会”在中国药科大学玄武门校区准医学、靶向时代、免疫热潮——化疗药物的发展与应用”。一个上午的时间虽然短暂，但专家的报告为与会代表奉上