絮状单位法和中和试验法在破伤风抗毒素效价测定中的评价及应用

絮状单位法和中和试验法在破伤风抗毒素效价测定中的评价及应用

破伤风抗毒素(简称TAT)的中和能力是其作为特异性抗体以及评价产品质量的重要指标,也称为抗体效价,效价的高低决定了制品的质量及使用效果。截止目前,破伤风抗毒素效价检测方法仍然按照《中华人民共和国兽药典》(2015版三部)的规定,采用小鼠中和试验法进行测定。

因药典规定的中和试验法有其自身缺陷,需要动物量多,检测时间长,饲养要求高,所耗成本高,而且因实验动物的自身差异,导致结果往往不尽人意。因此,探索一种快速、简便的体外检测方法,用于破伤风抗毒素原料血浆及中间品效价检测是十分必要的。

絮状单位法是依据抗毒素与预先标定的类毒素在反应器里进行抗原和抗体的免疫学反应,产生肉眼可视的絮状物,是体外进行的一种依赖类毒素的絮状单位数来体现抗毒素效价的快捷方法,但是,该方法能否替代药典规定的中和试验法,还缺少系统的分析。本研究对破伤风抗毒素絮状单位法进行了统计学验证,准确度检测结果显示,破伤风抗毒素国家标准品6次絮状测定结果均为950 Lf/mL,平均值为950Lf/mL,回收率均为100%,在90%-110%范围内,符合标准要求,表明絮状单位测定法具有良好的准确度;重复性检测结果显示,6次絮状测定结果分别为2000、1 950、2 000、2 000、1 950、2 000 Lf/mL,均值为1 983.33 Lf/mL,S为25.82 Lf/mL,CV为1.30%,低于2%,符合标准规定的要求,表明该方法有良好重复性;中间精密度检测结果显示,两名实验人员分别于3 d对供试品絮状测定结果的均值为1 987.50 Lf/mL,S为22.61 Lf/mL,CV为1.13%,低于2%,符合标准规定的要求,表明该方法的中间精密度良好。

以上结果显示该方法符合效价测定要求,对供试样品具有准确而专属的测定能力。实验选取2014~2016年间企业生产的30批次破伤风抗毒素原料血浆、30批次原液及31批

次成品,共计91个检样,经无菌检验合格后,作为被检样本。

采用絮状单位法和中和试验法对所选样品进行了效价测定,统计分析二者的相关性。结果表明,絮状单位测定法和中和试验法测定原料血浆、原液及成品相关系数分别为R=0.825、P<0.001,R=0.937、P<0.001和R=0.945、P<0.001,均呈显著性正相关,可用于破伤风抗毒素效价的测定。

在此基础上,我们各选取了20批次的2017年不同月份不同批量的原料血浆和原液进行效价测定,结果显示,絮状单位法在中间半成品的效价检测上的适用性良好。综上所述,絮状单位法操作简便易行、省时省力、可控性好,可作为企业内控的一种辅助快速检测方法,是一种良好的抗毒素效价测定方法,对降低成本、方便使用以及规范操作等都有重要意义。