上皮细胞转化序列2诱导肝癌细胞上皮-间充质转化促进侵袭转移要点

・２１４４・主堡塞墼处整鍪蠢；Ｑ！！生全旦箜！！鲞箜！塑垡！垫』垦翌！坚垡：！！Ｐ堡垂竺垫！！，！！！：！！：№：！・实验研究・上皮细胞转化序列２诱导肝癌细胞上皮一间充质转化促进侵袭转移袁媛周闯翟文龙作者单位：４５００５２郑州大学第一附属医院肝胆外科通信作者：周闯，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｉｎａｙｕａｎ２００８＠１２６．ＣＯＢＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１６．０９．０２５【摘要】目的观察上皮细胞转化序列２（ＥＣＴ２）对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力及其对肝癌细胞上皮一间充质转化（ＥＭＴ）的影响。方法应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测５例肝细胞癌标本及其配对癌旁组织ＥＣＴ２的表达；通过慢病毒介导的方法构建过表达ＥＣＴ２肝癌细胞，采用克隆形成实验和Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室等方法观察其与对照组比较增殖、迁移及侵袭能力的变化，分析ＥＣＴ２诱导肝癌细胞上皮一间充质转化进而促进转移复发的相关机制。结果ＥＣＴ２在肝癌组织中的表达较其在癌旁组织中明显升高；体外实验结果显示慢病毒转染的高表达ＥＣＴ２的ＨＥＰ３Ｂ细胞增殖较其对照组明显增高［（８４．２４－１２．３）个比（２６．７４－５．７）个，Ｐ＜０．０５］，对照组及过表达组发生迁移的细胞数分别为［（３８．６４－１５．６）个比（１０３．９４－２１．２）个，Ｐ＜０．０５］。通过上调肝癌细胞ＥＣＴ２蛋白的表达能够诱导肝癌细胞发生ＥＭＴ，其上皮化表型Ｅ一钙黏蛋白（Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ）、紧密连接蛋白一ｌ（ＺＯ－１）的表达下调，间质化表型Ｎ一钙黏蛋白（Ｎ．ｅａｄｈｅｒｉｎ）和纤维连接蛋白（Ｆｉｂｍｎｅｅｔｉｎ）上调。结论ＥＣＴ２可能通过诱导肝癌细胞发生ＥＭＴ进而参与调控其侵袭转移的进程。【关键词】癌，肝细胞；上皮一间充质转化；上皮细胞转化序列２；侵袭基金项目：河南省高校科技创新人才支持计划（１４ＨＡＳＴＩｑＤ３０）Ｅｐｉｔｈｄｉａｌｃｅｌｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅ２ｍｅｄｉａｔｅｓｈｅｐａｔｏｃｅＨｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｅｐｉｔｈｅｆｉ柚－—ｍｅｓｅｎ－ＹｕａｎＹｕａｎ，ＺｈｏｕＣｈｕａｎｇ，ＺｈａｉＷｅｎｌｏｎｇｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｓｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００５２．ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＹｕａｎＹｕａｎ，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｉｎａｙｕａｒｔ２００８＠１２６．ｃｏｒｎ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅｎｏｍａＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｈｅｐａｔｏｃｅｎｕｌａｒｃａｒｃｉ－ｃａｓｅｓｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅ２（ＥＣＴ２）ａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ—ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ）ｉｎｃｅｌｌｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＣＴ２ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｉｎ５ｔｈｅＨＣＣｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕ—ｉｎＨＥＰ３Ｂｃｅｌｌｓｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）ａｎｄａｄｊａｃｅｎｔｔｉｓｓｕｅ；ＡｆｔｅｒｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＥＣ他ｅｐｐｒｅｓｓｉｏｎｕｓｉｎｇ１ｅｎｔｉｖｉｒｕｓｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ．ｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎＷａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｔｒａｎｓｗｅｌｌａｎｄｃｏｌｏｎｙＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＣＴ２ｗａｓｈｉｇｈｅｒｉｎＨＣＣｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅｔｌｌａｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｓｓａｙ．ＲｅｓｕｌＩｓａｄｊａｃｅｎｔｔｉｓｓｕｅＥＣＴ２ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｌｅｖａｔｅｄｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆＨＥＰ３Ｂｃｅｌｌｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎ—ｖａｓｉｏｎ．ＣｌｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄＥＣ７Ｉ＿２ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｅｌｌｃｌｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｎｕｍｂｅｒｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ８４．２４－１２．３ＶＳ．２６．７４－５．７（Ｐ＜０．０５）．１＇ＩｌｅｎｕｍｂｅｒｏｆｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｃｃｕｒｒｅｄｏｆｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＣｒｌ２ｇｒｏｕｐａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅ１０３．９４－２１．２ＶＳ．３８．６４－１５．６ｆＰ＜０．０５）．’ｒｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＥＭＴｗｅｒｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｌｅｎｔｉｖｉｍｓｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｏｆＥＣ『１２ｉｎｔｏＨＥＰ３Ｂｃｅｌｌｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＥ—ｃａｄｈｅｆｉｎ，ａｎｄＺＯ—ｌ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＥＣＴ２ｃｏｕｌｄｍｅｄｉａｔｅｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌＥＭＴａｎｄＮ—ｃａｄｈｅｒｉｎａｎｄＦｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｐｒｏｍｏｔｅ（Ｐ＜０．０５），Ｔｈｅｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ；ＩｎｖａｓｉｏｎＥｐｉｔｈｅｌｉａｌ—ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ；Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅ２；上皮细胞转化序列２（ＥＣＴ２）基因１９９３年由Ｍｉｋｉ恶性肿瘤中高表达，并且ＥＣＴ２的表达水平与非小细胞肺癌‘５｜、胃癌‘６１和胶质母细胞瘤‘７１患者预后相关，但目前在肝细胞癌中研究报道尚少。本研究旨在探讨ＥＣＴ２在肝细胞癌中表达的临床意义及其相关的作用机制。等…发现。它是一种鸟苷酸交换因子（ＧＥＦｓ），通过作用于ＲｈｏＧＴＰ酶对小Ｇ蛋白家族成员进行上游调控，参与细胞周期的调控。目前国内外关于ＥＣＴ２的研究结果显示其在结肠癌‘２。、胃癌‘３１和胰腺癌‘４１等多种万方数据主堡塞堕处型苤鲞；旦！！生！旦箜！！鲞箜！塑业也』垦！Ｐ！！垡：！！Ｐ！！堂竺！Ｑ！！：！！！：！！：盟！：！・２１４５・材料与方法上加入２００）ｘｌ此细胞悬液；下室加入５００Ｉｘｌ含有２０％胎牛血清（ＦＢＳ）的培养基；将其置入孵育箱１２—４８Ｍａｔｒｉｇｅｌ，洗涤数次；固定１５ｒａｉｎ，染液染色１０ｈ；１．一般资料：５例新鲜肝癌标本取自本院肝胆外科２０１４年１月至２０１５年１月肝细胞癌患者手术切除标本；全部患者术前均未接受针对肝癌的放化疗及介入治疗。人Ｈｅｐ３Ｂ肝癌细胞株购自中国生命科学院上海细胞库；兔抗人ＥＣＴ２抗体、兔抗人多克隆抗体Ｂ．肌动蛋白（１３－ａｃｔｉｎ）及上皮一间充质转化（ＥＭＴ）相关抗体购自Ｓｉｇｍａ公司。所有标本的使用均符合郑州大学第一附属医院伦理委员会的伦理要求。所有人组本实验的患者均在标本采取之前签署同意标本捐赠的知取出小室用棉签擦净微孑Ｌ滤膜上室面未侵袭的细胞及ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤３次，干燥后切下膜同封于载玻片上。倒置显微镜下进行计数５次，取其平均值。６．统计学方法：结果用均数±标准差（ｘ±Ｓ）表示。应用ＳＰＳＳ１３．０统计软件分析，组间比较采用配对ｔ检验或单因素方差分析，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。情同意书。．２．Ｗｅｓｔｅｒｎ结１．Ｗｅｓｔｅｒｎ果ｂｌｏｔ：收集转染后及对照的肝癌细胞，提ｂｌｏｔ检测ＥＣ他在肝癌组织标本中的表取细胞总蛋白，采用二喹啉甲酸（ＢＣＡ）法对其进行定量；５０Ｉｘｇ总蛋白上样于１０％十二烷基硫酸钠．聚丙烯达：在５例肝细胞癌（ＨＣＣ）组织及癌旁组织中ＥＣＴ２在两种组织中前者蛋白表达明显高于后者。２．过表达ＥＣＴ２对肝癌增殖及克隆形成的影响：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，转染后ＨＥＰ３Ｂ细胞中ＥＣＴ２的酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ．ＰＡＧＥ），至目的条带在分离胶中分离开来，将目的蛋白转移到聚偏二氟乙烯（ＰＶＤＦ）膜上，室温封闭１ｈ后分别用一抗４℃孵育过夜，磷酸盐吐温缓冲液（ＰＢＳＴ）洗涤后进行二抗孵育１ｈ。采用电化学发光（ＥＣＬ）法检测蛋白的表达，以Ｂ—ａｃｔｉｎ为内表达明显上调。克隆形成实验结果显示，ＥＣＴ２过表达后肝癌细胞的克隆形成能力明显上升［（８４．２±１２．３）个比（２６．７±５．７）个Ｉ。参蛋白。３．构建人ＥＣＴ２慢病毒介导的表达载体：ＥＣＴ２正向引物：５’．ＧＣＣＴＹＧＣＴＹＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＣＡＡ．３’，反向弓Ｉ物：５’一ＴＣＣＡＣＴＧＡＧＣＣＧＴＧＧＧＡＴＧＴＣＡ一３’，扩增３．过表达ＥＣＴ２对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响：Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ检测结果表明，过表达细胞的迁移数目为（１０３．９±２１．２）个，明显高于对照组的（３８．６±１５．６）个，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；体外侵袭实验结果表明，ＥＣＴ２上调表达可明显增加细胞的侵袭能力。４．过表达ＥＣＴ２对ＨＣＣＥＭＴ相关生物学特性的ｃＤＮＡ文库，然后将收获的ＤＮＡ插入表达载体ｐＷＰＩ．绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）。ｐＷＰＩ．ＥＣＴ２一ＧＦＰ、空载体和包装载体（ｐＭＤ２．ＧａｎｄｐＳＰＡＸ２）以Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅｍ２０００影响：体外实验结果显示慢病毒转染肝癌细胞株Ｈｅｐ３Ｂ后表现为间质表型Ｎ一钙黏蛋白（Ｎ—ｃａｄｈｅｒｉｎ）和为介导转染入Ｈｅｐ３Ｂ肝癌细胞（具体操作详见试剂盒说明书）。转染６ｈ后，更换完全培养基４８ｈ后在荧光显微镜下观察其荧光效率后进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ等相关实验。纤维连接蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）表达上调和上皮表型Ｅ一钙黏蛋白（Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ）、紧密连接蛋白一ｌ（ＺＯ一１）表达下调，ＥＭＴ重要的转录因子Ｔｗｉｓｔ表达上调（图１）。４．克隆形成实验：取对数生长期的Ｈｅｐ３Ｂ细胞，使用０．２５％胰蛋白酶消化将其配成单个细胞悬液，以每孑Ｌ５００个细胞接种至６孑Ｌ板培养皿中。在３７℃、５％ＣＯ：的条件下于ＣＯ：孵箱中培养ｌ一２周，定期观察记录。当培养皿中出现肉眼可见的克隆时遂终止培养；弃上清，使用磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）浸洗２次；加纯甲醇５ＩＩｌｌ固定１０ｍｉｎ；去固定液后加Ｏ．１％结晶紫液染２０ｍｉｎ；干燥后将平皿倒置并叠加ｌ张带网格的透卜Ｃ。儿卜ＥＣ耐№川●●●－●－◆●—，●—Ｉ烈卜划№ⅢＦ＂伽∽…№幅－—一－●・＿－●—■Ｉ明胶片，低倍显微镜下计数＞１０个细胞克隆数。５．Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测肝癌细胞迁移、侵袭能力：用卜－……—●●■■●■■Ｉ———■■—■＿ｌ：对照组；２：ＥＣ’１２过表达组；ＥＣ‘１２：上皮细胞转化序列２；ＥＭＴ：上皮．间充质转化；Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ：Ｅ－钙黏蛋白；ＺＯ—ｌ：紧密连接蛋白一ｌ；Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ：Ｎ．钙黏蛋白；Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ：纤维连接蛋白；Ｂ—ａｃｔｉｎ：３－肌动蛋白图ｌ无血清预冷的杜尔伯科改良伊格尔培养基（ＤＭＥＭ）按８：ｌ的比例稀释Ｍａｔｒｉｇｅｌ；取稀释过的Ｍａｔｒｉｇｅｌ８０斗ｌ加入Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室底部膜的上室面；用不含血清的培养液ＤＭＥＭ重悬细胞，使其浓度为ｌ×１０６／ｍｌ；在Ｍａｔｒｉｇｅｌ过表达ＥＣＴ２后ＥＭＴ相关标志物及诱导叫子的变化万方数据・２１４６・虫堡塞验窆Ｅ整盘查呈！！！笙！旦筮塑鲞筮！塑垦垡！』垦望墅强：墅耻！堡垒笪！Ｑ！！：ｙ尘：塑：盟！：！ｔｏｒｓｏｆｓｍａｌｌＧＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９３，３６２（６４１９）：讨论４６２－４６５．ＤＯＩ：１０．１０３８／３６２４６２ａ０．ＨＣＣ是消化系统中最常见的恶性肿瘤之一，在中［２］ＬｕｏＹ，ＱｉｎＳＬ，ＭｕＹＦ，ｅｔａ１．ＥｌｅｖａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＣＴ２ｐｒｅｄｉｃｔｓｕｎｆａｖｏｒａｂｌｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｏｌｏｒｅｃｔａｌＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．２０１５，７３：１３５．１３９．ｅａＪｌｅｅｒ【Ｊ１．Ｂｉｏｍｅｄ国肿瘤发病率居第３位，而其死亡率为第２位。肝癌的转移和复发依然是患者死亡的最主要原因，也治疗和预防的最大瓶颈伸Ｊ。［３］ＤＯＩ：ｌＯ．１０１６／ｊ．ｂｉｏｐｈａ．２０１５．０６．００７．ＷａｎｇＨＢ，ＹａｎＨＣ，ＬｉｕＹ．ＣｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＥＣＴ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｉｓｓｕｅａｎｄｓｅｒｕｍｏｆｇａｓｔｒｉｃｅａｎｅｅｒｐａｔｉｅｎｔｓＪ１．ＣｌｉｎＴｒａｎｓｌＯｎｃ０１，２０１６，１８（７）：７３５－７４２．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１２０９４－０１５—１４２８－２．ＥＣＴ２基因定位于人染色体３ｑ２６，具有高度的进化保守性，编码由８８３个氨基酸构成的蛋白质，相对分子质量约为１０４０００。关于ＥＣＴ２基因在肿瘤中的作［４］ＺｈａｎｇＭＬ，ＬｕＳ，ＺｈｏｕＬ，ｅｔａ１．ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＥＣＴ２ｇｅｎｅｅｘ－ｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｃｈａｎｇｅｏｆＥＣＴ２ｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎｉｎｐａｎｅｒｅａｔ－用机制的研究结果显示它可以通过作用于ＲｈｏＡ、Ｒａｃｌ和细胞分裂周期蛋白４２（Ｃｄｃ４２）等来促进肿瘤的发生和转移；也可以通过调节细胞极性来增强肿瘤的侵袭力Ｌ９ｊ。Ｙｅｎ等¨叫研究结果显示ＥＣＴ２在食管鳞状细胞癌中表达明显升高，参与细胞质分裂，从而激活Ｐ信号通路导致恶性转化。研究结果表明在骨肉瘤中发现ＥＣＴ２ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＰａｎｃｒｅａｔＤｉｓＩｎｔ，２００８，７（５）：５３３－５３８．【５］ＨｉｒａｔａＤ，ＹａｍａｂｕｋｉＴ，ＭｉｋｉＤ，ｅｔａ１．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅ－２ｏｎｃｏａｎｔｉｇｅｎｉｎｌｕｎｇａｎｄｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ［６］ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００９，１５（１）：２５６－２６６．ＤＯＩ：１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－０８—１６７２．ＪｉｎＹ，ＹｕＹ，ＳｈａｏＱ，ｅｔａ１．Ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＥＣＴ２ｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＩｎｔＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ，２０１４，７（１２）：８７２４－８７３１．ＤＯＩ：１０．１１５８／１０７８川３２．ＣＣＲ鹏一１６７２．ＭＪ，ＳｃｈｕｍａｃｈｅｒＣＡ，ｅｔａ１．Ｃｄｃ４２ａｎｄｔｈｅｇｕａｎｉｎｅ７］ＦｏｒｔｉｎＳＰ，ＥｎｎｉｓｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｅｘｃｈａｎｇｅｆａｃｔｏｒｓＥｃｔ２ａｎｄｔｒｉｏｍｅｄｉａｔｅＦｎｌ４．．ｉｎｄｕｃｅｄｍｉ．．ｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｍＲＮＡ高表达，从而促进骨肉瘤细胞增殖，与骨肉［８］ｃｅｉｌｓ［Ｊ］．ＭｏｌＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２０１２，瘤的复发、转移密切相关。ＥＭＴ是指在特定的生理或病理条件下，上皮细胞向间质细胞发生转化的现象。发生ＥＭＴ的细胞更容易迁移和侵袭，ＥＭＴ在多种恶性肿瘤侵袭转移中的作用已成为相关领域的研究热点¨１１。我们应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法证实ＥＣＴ２在肝细胞癌组织及其配对癌旁组织中的表达，结果显示前者明显高于后者。克隆形成实验结果表明ＥＣＴ２过表达后肝癌细胞的克隆形成能力明显上升，这与以往的其他种类肿瘤的研究结果一致。Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室实验结果过表达细胞的迁移数目为（１０３．９±２１．２）个明显高于对照组的（３８．６±１５．６）个，这提示ＥＣＴ２不仅能促进ＨＣＣ细胞的生长，还能增强其侵袭转移的能力。我们通过对ＥＣＴ２在肝癌组织中表达的研究及相关功能的实验研究可见它与肝细胞癌的发生发展密切相关。但若要明确在肝癌发生中的确切机制，仍需进一步研究。参考文献［１］ＭｉｋｉＴ，ＳｍｉｔｈＣＬ，ＬｏｎｇｌＯ（７）：９５８＿９６８．ＤＯ［：１０．１１５８／１５４１－７７８６．ＭＣＲ一１１－０６１６．代智，樊嘉．肝癌转移复发的生物学研究进展［Ｊ］．中华实验外科杂志，２０１２，２９（１０）：１８８３．１８８５．ＤａｉＺ，ＦａｎＪ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｎｍｅｔａｓｔａｓｉｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｌｉｖｅｒｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＥｘｐＳｕｒｇ，２０１２，２９（１０）：１８８３—１８８５．ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１２．１０．００４．［９］ＬｉｕＸＦ，ＩｓｈｉｄａＨ，ＲａｚｉｕｄｄｉｎＲ，ｅｔａ１．ＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅｅｘｃｈａｎｇｅｆａｃｔｏｒＣｅｌｌＥＣＴ２ｉｎｔｅｒａｃｔｓｗｉｔｈｔｈｅｐｏｌａｒｉｔｙｐｒｏｔｅｉｎｃｏｍｐｌｅｘＰａｒ６／Ｐａｒ３／ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣｚｅｔａ（ＰＫＣｚｅｔａ）ａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｓＰＫＣｚｅｔａａｃｔｉｖｉｔｙ【ＪＩ．ＭｏｌＢｊｏＪ，２００４．２４（１５）：６６６５－６６７５，ＤＯＩ：１０．１１２８／ＭＣＢ．２４．１５．６６６５－６６７５．２００４．［１０］ＹｅｎＣＣ，ＣｈｅｎＹＪ，ＰａｎＣＣ，ｅｔａ１．Ｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒｃｈａｎｇｅｓｏｆｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｉｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ３ｑ２５．３－ｑｔｅｒｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉ—ａｓｎｏｍａ：ＴＰ６３ｉｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｉｎｅａｒｌｙｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓｂｕｔｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄｄｉｓｅａｓｅ１２７２．ｐｒｏｇｒｅｓｓｅｄ［Ｊ］．ＷｏｒｌｄＪＧａｓ慨ｎｔｅｒｏｌ，２００５，１ｌ（９）：ｉ２６７—ＤＯＩ：１０．３７４８／ｗｉｇ．ｖｌ１．ｉ９．１２６７．［１１］胡静雯，杨欣，王洁，等．微小ＲＮＡ一１４５通过调控上皮细胞问质化抑制肺腺癌起始细胞的发生［Ｊ］．中华实验外科杂志，２０１３，３０（３）：５４９－５５１．ＨｕＪＷ，ＹａｎｇＸ，ＷａｎｇＪ，ｅｔａ１．ＭｉＲ．１４５ｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｌｕｎｇａｄｅｎｏｅａｒｃｉ—ｉｎｉｔｉａｔｉｎｇｃｅｌｌｓｇｅｎｅｓｉｓｖｉａＥｘｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ—ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｎｏｍａｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｐｒｏｇｒｅｓｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＳｕｒｇ，２０１３，３０（３）：５４９－５５１．（收稿１３期：２０１６－０５—１０）ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｉ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１３．０３．０４３．ＪＥ，ｅｔａ１．Ｏｎｃｏｇｅｎｅｅｃｔ２ｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｒｅｇｕｌａ—・读者・作者・编者・本刊对论文中有关缩略语表达的要求本刊对已被公知公认的缩略语可以不加注释直接使用。例如：ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＨＢｓＡｇ、ＣＴ、ＷＢＣ等。不常用的、尚未被公知公认的缩略语以及原词过长在文中多次出现者，若为中文可用于中第１次出现时写出全称，在圆括号内写出缩略语；若为外文可于文中第１次出现时写出中文全称，在圃括号内写出外文缩略语。例如：支气管哮喘（哮喘），阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（ＯＳＡＨＳ）。不超过４个汉字的名词不宜使用缩略语，以免影响文章的可读性。不要使用临床１３头简称，例如将“胸腔积液”简称为“胸水”；将“纤维支气管镜”简称为“纤支镜”。西文缩略语不得拆开转行。本刊编辑部万方数据