P13K抑制剂对转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞Smad泛素化调节因子2表达的影响

维普资讯 http://www.cqvip.com 第１７卷第２１期　２００７年１１月　中国现代医学杂志　Ｃｈｉｎａ　Ｊｏｕｍａｌ　ｏｆ　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｖ　．１７　Ｎｏ．２１　ＮＯＶ．２ＯＯ７　文章编号：　１００５—８９８２（２００７）２１—２５７９—０４　・论著・　ＰＩ３Ｋ抑制剂对转化生长因子１３　１诱导人肾小管　上皮细胞Ｓｍａｄ泛素化调节因子２表达的影响　马立彬　，邓　刚２，刘晓城　（华中科技大学同济医学院附属同济医院　１．肾内科，２．泌尿外科，湖北武汉４３００３０）　摘要：目的探讨体外条件下转化生长因子１３　１（ＴＧＦ—Ｂ　１）对人近端肾小管上皮细胞系（ＨＫ一２）表达　应用　ＨＫ一２细胞　Ｓｍａｄ泛素化调节因子２（Ｓｍｕｒｆ　２）的诱导情况，以及ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２对其的影响。方法ＲＴ—ＰＣＲ法检测Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ的表达，应用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测Ｓｍｕｒｆ　２蛋白的表达。结果有基础量的Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ和蛋白的表达，ＴＧＦ—Ｂ　１呈时间和弃１量依赖性增加ＨＫ一２细胞Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ　和蛋白的表达（Ｐ＜０．０１）。ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２呈剂量依赖性抑制ＴＧＦ－Ｂ　１（１００　ｐＭ）所诱导的ＨＩ（一２细　胞Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ和蛋白的表达（Ｐ＜Ｏ．０１）。结论在体外，ＴＧＦ—Ｂ　１可能通过ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ通路诱导ＨＫ一２　细胞Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ和蛋白的表达。ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２可抑制Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ和蛋白的表达。　关键词：Ｓｍｕｒｆ　２；ＰＩ３Ｋ抑制剂；肾小管；上皮细胞　中图分类号：Ｒ３３４．１　文献标识码：Ａ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＬＹ２９４００２　ｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｓｍａｄ　ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　２　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＴＧＦ－１３　１　ｉｎ　ＨＫ－—・２　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ＭＡ　Ｌｉ—ｂｉｎ　，ＤＥＮＧ　Ｇａｎｇａ，ＬＩＵ　Ｘｉａｏ—ｃｈｅｎｇ　《１．Ｄｉｖｉｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，２．Ｔｏｎｇｉ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｏｎｇｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ，Ｈｕｂｅｉ　４３００３￣Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ＰＩ３Ｋ－ＬＹ２９４００２　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｍｕｆｆ　２　ｉｎ　ｃｕｈｕｒｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｘｉｍａｌ　ｔｕｂｕｌａｒ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ＨＫ一２　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＴＧＦ—Ｂ１．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｖ　ＲＴ—ＰＣＲ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｂｙ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｔｈｅ　ｂａｓｉｃ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ＨＫ一２　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ａｎｄ　ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ＴＧＦ－１３１　ｉｎ　ｄｏｓｅ—ａｎｄ　ｔｉｍｅ—　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ　ｆＰ＜０．Ｏ１）．Ｔｈｅ　ＬＹ２９４００２　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘ—　ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ＨＫ一２　ｃｅ１１　ｌｉｎｅ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ＴＧＦ—ｐ１　ｉｎ　ｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ（Ｐ＜０．ｏ１）．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】ＴＧＦ－１３１　ｃｏｕｌｄ　ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅ　ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｔｒａｎｓｄｕｃｆｉｏｎ　Ｄａｔｈｗａｖ　ｉｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ．ＬＹ２９４００２　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ＨＫ一２　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ＴＧＦ一１３　１．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｓｍｕｒｆ　２：ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ＰＩ３Ｋ；ｋｉｄｎｅｙ　ｔｕｂｕｌｅｓ；ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｅｅｌｓ　转化生长因子Ｂ（ＴＧＦ—ｐ）在肾纤维化中起　ｇｏｕｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　Ｅ６一ＡＰ　ｃａｒｂｏｘｙ　ｔｅｒｍｉｎｕｓ）家族成员。该　家族包括Ｓｍｕｒｆ　１、Ｓｍｕｒｆ　２，可以通过Ｒ－Ｓｍａｄｓ相　重要作用，在ＴＧＦ—Ｂ信号通路中，Ｓｍａｄｓ起关键作　用。然而，近来的研究表明：还存在Ｓｍａｄｓ以外的信　号传导通路【ｌＪ，也可激活ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ通路【２Ｊ。Ｓｍｕｒｆ　２　全称Ｓｍａｄ泛素化调节因子２（Ｓｍａｄ　ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ　ｒｅｇ—　ｕｌａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　２），是泛素连接酶Ｅ３　ＨＥＣＴ（ｈｏｍｏｌｏ一　收稿日期：２００７—０３—２４　・互作用并使其降解而拮抗ＴＧＦ—ｐ家族信号翻。　Ｓｍｕｒｆ　２在肿瘤的发生、发展和转移过程中起重要作　用【４Ｊ，近来发现在一些肾脏病模型中Ｓｍｕｒｆ　２表达增　强，可以使Ｓｍａｄ　２、Ｓｍａｄ　７的泛素化降解增加【５．６３。　２５７９・　维普资讯 http://www.cqvip.com 中国现代医学杂志　第ｌ７卷　然而Ｓｍｕｇ　２高表达的机制仍然不很清楚。　本试验主要研究ＴＧＦ—Ｂ　１刺激人肾小管上皮　细胞Ｓｍｕｇ　２的表达及其可能的通路，为肾间质纤　测目的基因与ＧＡＰＤＨ吸光度Ａ比值，设正常对照　组为１，每组４个样本，试验重复４次。　１．２．３　Ｗｅｓｔｅｍ印迹检测Ｓｍｕｆｆ　２蛋白的表达用　维化的防治提供理论依据。　４ｃＣ预冷的ＰＢＳ洗细胞３次，加入５０　Ｌ含有蛋白　酶抑制剂的细胞裂解缓冲液，置冰上１５　ｍｉｎ，刮下细　胞，４ｃＣ　１２　０００　Ｘ　ｇ离心１５　ｍｉｎ，取上清，ＢＣＡ法测　蛋白质的浓度。各组取６０　ｇ待测蛋白质样本，与蛋　白质分子量标准品共同进行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳，聚丙　酰胺的积层胶浓度为５％，Ｓｍｕｆｆ　２的分离胶浓度为　１材料和方法　１．１材料　ＤＭＥＭ／ＤＦ１２培养液、胎牛血清（ＦＣＳ）、胰蛋白　酶一ＥＤＴＡ（美国Ｇｉｂｃｏ），ｒｈ　ＴＧＦ－　１（美国Ｒ＆Ｄ），　ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２（美国Ｓｉｇｍａ），兔抗人Ｓｍｕｇ　２抗体（美国ｓａｎｔａ　Ｃｍｚ公司），Ｍ—ＭＵＬＶ逆转录试　剂盒和ＴａｑＤＮＡ酶（美国Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ），ＴＲＩｚｏｌ（上海　８％，将蛋白质转移至ＰＶＤＦ膜上，置５％脱脂奶粉　封闭缓冲液中４℃过夜，分别加入兔抗人Ｓｍｕｇ　２　抗体（１：４００）３７％６０ｍｉｎ孵育杂交，充分洗膜后　与碱性磷酸酶标记的二抗（１：１０００）３７　ｃ【＝孵育６０　ｍｌｎ，用碱性磷酸酶标记的显色液进行显色。试验重　复３次。　华舜），Ｓｍｕｆｆ　２引物由上海博亚公司合成。　１．２方法　１．２．１　细胞培养人近端肾小管上皮细胞株ＨＫ一２　（由本实验室冻存），在含１０％胎牛血清的　ＤＭＥＭ／Ｉ）Ｆ１２培养液，３７ｃ【＝，５％二氧化碳恒温条件　下培养。１　Ｘ　１０ｓ细胞悬液３　ｍＬ接种于５０　ｅｍ　的培　养瓶中，待细胞生长达６０％～８０％时，换含０．５％　ＦＣＳ的ＤＭＥＭ￣Ｆ１２培养液，静止２４　ｈ，以使细胞生　长同步化。随机分为：正常对照组（不含干预因素的　正常培养的细胞）、ＴＧＦ一８　１（１００ｐｍｏｌ／Ｌ）分别刺激　６、１２和２４　ｈ组；ＴＧＦ～８　１（２５、１００和４００　ｐｍｏｌ／Ｌ）３　１．３统计学分析　上述结果用（　±ｓ）表示，采用ＳＰＳＳ１２．０统计　软件处理数据，采用单因素方差分析进行多组间分　析。　２结果　２．１　ＬＹ２９４００２、ＴＧＦ—Ｂ　１对肾小管上皮细胞　Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ表达的影响　种浓度分别刺激２４　ｈ；ＴＧＦ一８　１（１００　ｐｍｏｌ／Ｌ）＋　ＬＹ２９４００２（５、１５和２５　ｍｏｌ／Ｌ）刺激２４　ｈ，以不加阻　断剂为对照，ＬＹ２９４００２预先孵育３０ｍｉｎ。共１１组，　每组均为４瓶细胞。　１．２．２　ＨＫ一２细胞中Ｓｍｕｆｆ　２　ｒｎｌＬＮＡ的检测　用　正常对照组有基础量的Ｓｍｕｆｆ　２　ｍＲＮＡ分泌，　用１００　ｐｍｏｌ／Ｌ　ＴＧＦ～Ｂ　１分别刺激６、１２和２４　ｈ后，　肾小管上皮细胞Ｓｍｕｇ　２　ｍＲＮＡ的表达明显增强，　分别是正常对照组的１．４６８、２．８７２和３．９５８倍，且呈　时间依赖性，与正常对照组比较，有统计学意义（Ｐ＜　维普资讯 http://www.cqvip.com

第２１期　马立彬，等：ＰＩ３Ｋ抑制剂对转化生长因子ｐ１诱导人　肾小管上皮细胞Ｓｍａｄ泛素化调节因子２表达的影响　暑羞　《ｚ　口｝Ｉ（Ｉ（Ｉ　ｌ／　ｆ１山∽　１　１　１　１　Ｏ　Ｏ　Ｏ　Ｏ　６００ｂｐ　Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ　６００ｂｐ　Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ　２００ｂｐ　２００ｂｐ　ＧＡＰＤＨ　５　ｐＭ０ｐＭ　４０ｏｐＭ　对照￣．２ＴＧＦ　１３　１　１０浓度浓度　—一　．ｘ３　　１．６－ｒ　Ｏ　Ｍ　５１ｘＭ　１５１浓ｘ度Ｍ２５　Ｍ　ＬＹ２９４００２　浓度　一注：￥与正常对照组相比，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１　　图２　ＴＧＦ—ｐ　１诱导ＨＫ一２细胞上调Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ表达　的剂量效应　。　＇ｌ＿●　疆　串　誊氍毒　毒每：　拄毪。　强基誊　。｛　—　诵　Ｓｍｕｒｆ　２　８６０００　１　２　羞茛　皿　｝Ｉ（Ｉｄｖ０　§Ｅ∽　１　Ｏ　Ｏ　８　Ｏ　６　Ｏ　４　Ｏ　２　Ｏ　对照组　６ｈ　１２　ｈ　２４　ｈ　ｐ－ａｃｆｉｎ　４３０００　Ｂ—ａｃｔｉｎ　４３０００　羞　‘＝囊　睾　－皿　醐　点　１．Ｏ　Ｏ．５　Ｏ　窜　蕃　正常对照组　６ｈ　１２　ｈ　２４　ｈ　ＴＧＦ—ｐ　１浓度１００　０　Ｍ　５　Ｍ　１５　Ｍ　２５　Ｍ　注：　与正常对照组相比，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１　注：　与单纯刺激组相比，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１　图４　ＴＧＦ—Ｂ　１诱导ＨＫ一２细胞增加Ｓｍｕｒｆ　２蛋白表达的　时间效应　图５　ＬＹ２９４００２阻断ＴＧＦ—Ｂ　１诱导ＨＫ一２细胞Ｓｍｕｒｆ　２　蛋白表达　０．０１），见图１；分别用２５、１００和４００　ｐｍｏｌ／Ｌ　Ｓｍｕｒｆ　２蛋白表达的影响　正常对照组有基础量的Ｓｍｕｒｆ　２蛋白分泌，用　ＴＧＦ—Ｂ　１刺激人。肾小管上皮细胞２４　ｈ后，Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ呈剂量依赖性增强，分别是正常对照组的　１．８６８、２．７５９和２．８９３倍，与正常对照组相比，差异有　显著性（Ｐ＜０．０１），４００　ｐＭ组与１００　ｐＭ组相比无统　１００　ｐＭ　ＴＧＦ一１３　１刺激６、１２和２４　ｈ后，。肾小管上皮　细胞Ｓｍｕｒｆ　２蛋白的表达均明显增强，与正常对照　组比，分别增加了１．２９０、１．４８１和１．６７８倍，且呈时　间依赖性（Ｐ＜０．０１），见图４；用１００　ｐｍｏｌ／Ｌ　ＴＧＦ—Ｂ　１作为刺激量，分别加用ＰＩ３Ｋ抑制剂　ＬＹ２９４００２（５、１５和２５　ｍｏｌ／Ｌ）作用２４　ｈ，与单纯　ＴＧＦ—Ｂ　１刺激组相比，Ｓｍｕｒｆ　２蛋白的表达明显受　到抑制，分别下降了１．６６０、１．９７９和２．１５０倍，差异具　计学意义，见图２；用１００　ｐｍｏｌ／Ｌ　ＴＧＦ—Ｂ　１作为刺　激量，分别加用ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２（浓度分别　为５、１５和２５　ｍｏｌ／Ｌ）作用２４　ｈ，以不加抑制剂组　作对照，Ｓｍｕｒｆ　２　ｍＲＮＡ的表达明显受到抑制，与不　加抑制剂组相比，分别下降了１．８４５、４．９８３和５．２３８　倍，差异有显著性（Ｐ＜０．０１），呈剂量依赖性，２５　Ｍ　组与ｌ５　Ｍ组相比无统计学意义，见图３。　２．２　ＬＹ２９４００２、ＴＧＦ—ｐ　１对肾小管上皮细胞　・有显著性（Ｐ＜０．０１），加用２５　Ｍ　ＬＹ２９４００２组与　ｌ５　Ｍ组相比，亦有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），见图５。　３讨论　２５８１・　维普资讯 http://www.cqvip.com 中国现代医学杂志　第１７卷　近来研究发现ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路在各种致纤　维化的细胞因子如转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，ＴＧＦ—Ｂ）、结缔组织生长因子（Ｃｏｎ—　ｎｅｃｔｉｖｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｆａｃｔ０ｒ，ＣＴＧＦ）、纤溶酶原激活物抑制　物（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ一１，ＰＡＩ—１）等致　肾脏　纤维化的过程中起了重要作用。比如：ＲＵＮＹＡＮ等　可能为治疗肾纤维化提供新的依据。泛素连接酶Ｅ３　通过调控调节蛋白的泛素化过程参与细胞内的多种　生理过程。Ｅ３决定了泛素途径底物的特异性。制药　行业利用泛素连接酶Ｅ３的这些性质选择Ｅ３作为　药物靶点，希望能够通过调控泛素途径对某些疾病　进行治疗。随着生物技术的不断发展，泛素连接酶　Ｅ３的作用机制将逐步阐明，某些顽疾从分子水平上　得到治疗将不再是梦想。　参考文献：　研究发现在ＴＧＦ—Ｂ　１作用于肾小球系膜细胞后１　ｍｉｎ可见ＰＩ３Ｋ的下游分子ＰＤＫ１活化，５　ｍｉｎ后可　见ＰＫＢ磷酸化且聚集于胞膜上，给予ＰＩ３Ｋ抑制剂　ＬＹ２９４００２或Ａｋｔ显性失活突变体可减少ＴＧＦ—Ｂ　诱导的１（Ｉ）、（Ｉ）胶原的表达。进一步研究发现，　ＴＧＦ—Ｂ　１诱导的ＰＩ３Ｋ／ＰＫＢ活化可磷酸化Ｓｍａｄ　３　的丝氨酸位点，从而增强Ｓｍａｄ　３的转录活性，但对　其ＤＮＡ结合活性并无影响。而单独活化ＰＩ３Ｋ（如　给予ＰＤＧＦ刺激细胞）并不能引起Ｉ型胶原的增加。　［１］ＤＥＲＹＮＣＫ　Ｒ，ＺＨＡＮＧ　ＹＥ．Ｓｍａｄ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｎｄ　Ｓｍａｄ－ｉｎｄｅ－　ｐｅｎｄｅｎｔ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ｉｎ　ＴＧＦ—Ｂ　ｆａｍｉｌｙ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００３，　４２５：５７７—５８４．　［２］ＳＨＩＮ　Ｉ，ＢＡＫＩＮ　ＡＶ，ＲＯＤＥＣＫ　Ｕ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ—Ｂ　ｅｎｈａｎｃｅｓ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｖｉａ　Ａｋｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＦＫＨＲＬＩ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　Ｃｅｌｌ，２００１，１２：３３２８—３３３９．　［３］ＡＲＯＲＡ　Ｋ，ＷＡＲＲＩＯＲ　Ｒ．Ａ　ｎｅｗ　ｓｍｕｒｆ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｖｉｌｌａｇｅ［Ｊ］．Ｄｅｖ　Ｃｅｌｌ，２００１，１：４４１—４４２．　这些结果提示，ＰＩ３Ｋ／ＰＫＢ通过增强ＴＧＦ—Ｂ　１诱导　的Ｓｍａｄ　３信号，来增强Ｉ型胶原的表达。另有研究　还发现ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路也参与了ＴＧＦ—Ｂ　１对问　充质细胞和成纤维细胞的促生存作用，从而引起细　胞间基质蛋白分泌增加嘲。从而说明ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号　通路参与肾脏固有细胞细胞外基质合成和胶原的分　泌，在肾间质纤维化中起重要作用。　本研究发现：１００　ｐＭ的ＴＧＦ—Ｂ　１能刺激人肾　小管上皮细胞Ｓｍｕｆｆ　２的基因和蛋白质的表达，且　［４】ＩＺＺＩ　Ｌ，Ａ＇ＩＴＩＳＡＮＯ　Ｌ．（２００４）Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＴＧＦ－Ｂ　ｓｉｎａｇｌ－　ｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ　ｂｙ　ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．　Ｏｎｅｏｇｅｎｅ，　２００４，２３：２０７１—２０７８．　［５］ＴＯＧＡＷＡ　Ａ，ＹＡＭＡＭＯＴＯ　Ｔ，ＳＵＺＵＫ１　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｄｅ－　ｐｅｎｄｅｎｔ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｍａｄ２　ｉｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｌｏｍｅｒｕｌｉ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉ—ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ　ｓｅｒｕｍ　ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ，２００３，　ｌ６３：１６４５—１６５２．　［６］ＦＵＫＡＳＡＷＡ　Ｈ，ＹＡＭＡＭＯＴＯ　Ｔ，ＴＯＧＡＷＡ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｄｏｗｎ－ｒｅｇ－　ｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｍａｄ７　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｕ　ｑ　ｕｊｔｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｌ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　呈时间和剂量依赖性；而这种高表达Ｓｍｕｒｆ　２可被　ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２所阻断，且呈剂量依赖性。　说明ＴＧＦ—Ｂ　１刺激肾小管上皮细胞Ｓｍｕｆｆ　２的表　达是通过ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ通路而发挥作用，而且ＰＩ３Ｋ抑　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ　ｔｏ　ｒｅｎａｌ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［］．Ｊ　Ｐｒｏｃ　Ｎａｄ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ．２ｏｏ４．１０１：８６８７—８６９２．　［７］ＲＵＮＹＡＮ　ＣＥ，ＳＣＨＮＡＰＥＲ　ＨＷ，ＰＯＮＣＥＬＥＴ　ＡＣ．Ｔｈｅ　ｐｈｏｓ—　ｐｈａｔｉｄｙｌｉｎ０ｓｉｔ０１３一ｋｉｎａｓｅ／Ａｋｔ　ｐａｔｈｗａｙ　ｅｎｈａｎｃｅｓ　Ｓｍａｄ３一ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　制剂ＬＹ２９４００２可抑制ＴＧＦ—Ｂ　１介导的Ｓｍｕｆｆ　２的　产生。国外ＯＨＡＳＨＩ　Ｎ等【９Ｊｉ丕对此做了进一步研究：　证明ＩＩ，＿ｌ　ｄ、ＰＤＧＦ、表皮生长因子不能刺激Ｓｍｕｆｆ　２的表达，ＴＧＦ—Ｂ介导Ｓｍｕｆｆ　２的表达可被Ｓｍａｄ　７　ｍｅｓａｎｇｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｃｏｌｌａｇｅｎ（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｒｏｗｔｇｈ　ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａｌ［］Ｊ．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２００４，２７９（４）：２６３２—２６３９．　［８］ＨＯＲＯＷＩ１Ｚ　ｊｃ，ＬＥＥ　ＤＹ，ＷＡＧＨＲＡＹ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　Ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏ—ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ　３－ｋｉｎａｓｅ／ＡＫＴ　ｐａｔｈｗａｙ　ｂｙ　ｒａｔｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ——ｂｅｔａｌ　ｉｎ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｉｓ　ｍｅｄｉａｔ—　ｅｄ　ｂｙ　ｐ３８　ＭＡＰＫ－－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　ａｕｔｃｒｉｏｎｅ　ｇｒｏｗｔｈ　或Ａｃｔｉｖｉｎ受体相关激酶５抑制剂所抑制，ＴＧＦ—Ｂ　刺激Ｓｍｕｆｆ　２的产生是ＴＧＦ—Ｂ受体介导的非Ｓｍａｄ　ｆａｃｔｏｒｆ］Ｊ．Ｊ　Ｂｉｄ　Ｃｈｅｍ，２００４，２７９（２）：１３５９—１３６７．　【９］ＯＨＡＳＨＩ　Ｎ，ＹＡＭＡＭＯＴＯ　Ｔ，ＵＣＨＩＤＡ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｍｕｔ／２　ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ　ｌｉｇａｓｅ　ｂｙ　ＴＧＦ－ｂｅｔａ［］Ｊ．ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ，　依赖的途径。在单侧梗阻性肾病大鼠模型（一种肾　纤维化模型）中发现：Ｓｍｕｆｆ　２和ＴＧＦ—Ｂ　１表达增　加有相关关系，二者表达增加在肾小管问质纤维化　２００５，５７９（１２１：２５５７—２５６３．　【】０］　ＷＲＩＧＨＴ　ＥＪ，　ＭＣＣＡＦＦＲＥＹ　Ｔ．Ａ，　ＲＯＢＥＲＴＳＯＮ　Ａ　Ｐ’　ｅｔ　ａ１．　Ｃｈｒｏｍｉｃ　ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ　ｕｒｅｔｅｒａｌ　ｏｂｓｔｕｃｔｒｉｏｎ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｈ　ｉｔｎｔｅｒ—　中起重要作用【】０１。目前对Ｓｍｕｒｆ　２的功能研究尚少，　要明确肾纤维化的发生、发展过程中Ｓｍｕｆｆ　２调控　所产生的影响，还需要更多的探索和研究。　ｓｔｉｔｉｌａ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｕｂｕｌａｒ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＴＧＦ－８【ＪＪ．Ｌａｂ　ｉｎｖｅｓｔ，　１９９６，７４：５２８—５３７．　研究非Ｓｍａｄ通路产生的Ｓｍｕｆｆ　２的抑制剂，有　（赖岩松编辑）　・２５８２・