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聊城大学生命科学学院09—10学年第一学期期末考试 2009级《分子生物学》试题（闭卷及B卷） 题号 得分
一、翻译并解释名词（每题2分，共20分）：
得分 一 二 三 四 五 六 七 …… 总分 复核人 阅卷人 1、Exon：外显子。（1分）为基因中在成熟mRNA存在的DNA片断。（1分）
2、Restriction Endonucleases：限制性内切核酸酶。（1分）可特异性的切割RNA或双链DNA。（1分）
3、ORF（open reading frame）:开放读码框。（1分）即有可能编码特定蛋白质的一段DNA，通常以ATG起始，以任一TAA、TAG、 TGA
中指。（1分） 4、Yeast two hybrid：酵母双杂交。（1分）由含有激活和DNA结合结构域的二个质粒分别克隆二个基因并同时转化酵母细胞，二蛋白的相互作用引起下游报告基因的表达，用于鉴定蛋白质间的相互作用。（1分） 5、Tag protein：标签蛋白。（1分）通常为已知功能的多肽，用于分离、鉴定未知功能的蛋白。（1分） 6、Ligase：连接酶。（1分）可催化2个DNA片段末端形成3－5磷酸二酯键反应的酶。（1分）
7、cDNA：与RNA链互补的单链DNA。（1分）以其RNA为模板，在适当引物的存在下，由依赖RNA的DNA聚合酶（ 反转录酶）的作用而合成。（1分） 8、 Northern blot：Northern 印迹杂交。（1分）RNA片段经电泳分离后，经变性、转膜和与核酸探针杂交，用于检测目的DNA的方法。（1分） 9、 Proteomics：蛋白质组学。（1分）以研究一种细胞、组织或完整生物体所拥有的全套蛋白质的特征。（1分） 10、 Start codon：起始密码。（1分）所有基因翻译的起始密码，一般位ATG。（1分）
二、选择题（每题2分，共20分）：
得分 阅卷人 1、1、用于鉴定核酸与蛋白质相互作用的实验是（D） A．Western blot； B. Northern blot； C. Co-IP； D. Gel shift
2、什么是核糖体？ （A）
A. 一种大分子复合物，两亚基包含蛋白质和rRNA； B. 一种有利于内含子的核蛋白复合物； C. 一种包含rDNA的细胞器； D. 一种含DNA的分子。
3、可用于标记蛋白质的放射性同位素是：（A）
A. 35S； B. 132I； C. 60Co D. 32P 4、凝胶阻滞实验（Gel Mobility Shift）可用来研究（B ）
A.蛋白质-蛋白质相互作用； B.蛋白质-核酸相互作用； C.核酸-核酸相互作用； D.噬菌体外壳蛋白性质 5、以下那种分子属于反式作用（cis-acting）分子？（A）
A. 转录因子； B. 启动子； C. TATA box； D. repeat DNA 6、有关反转录的正确描述是：（B）
A. 反应不需要引物； B. 产物是cDNA； C. 模板可以是RNA或DNA； D. 合成链的方向是：3’ 5’ 7、以下有关限制性内切酶的作用叙述哪个不正确？（B）
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A. 识别序列长度一般为4－6个bp; B. 只能识别和切割原核生物DNA; C. 识别序列一般具有回文结构； D. 切割原核生物DNA。
8、以下哪种载体最适于构建植物表达载体？（C）
A. pBR322; B. pBluescript vector； C. Ti plasmid； D. Cosmids 9、以下哪种蛋白或多肽通常不作为融合蛋白的组成成分？（C） A. GFP； B. GST C. Amp+ D. 6ΧHis 10、与克隆的基因是顺式作用原件的是：（B） A. 阻遏蛋白； B. 启动子； C. 转录因子； D. 终止蛋白因子。
三、问答题（每题12分，共60分）：
得分 阅卷人 1、 简要叙述将一外源基因克隆入载体的过程（可用箭头图显示），并举出至少一种方法筛选阳性克隆的简要步骤。 答：1）基因克隆过程：
PCR扩增外源基因（两引物两端分别含有KpnI和SacI酶切位点） ＋pBS→KpnI和SacI酶切→＋连接酶，连接反应→
pBS－X（X表示外源基因）→转化细菌,再含氨苄青霉素的培养基上筛选 阳性克隆。（8分） 2）阳性克隆的筛选（以下方法任选一种）：
a.PCR方法：以外源基因或载体上KpnI和SacI二位点以外的DNA序 列设计引物，进行菌落或以质粒为模板的PCR。以得到预期PCR带为阳性克隆；（4分）
b．酶切法：以上转化菌提取质粒，经KpnI和SacI双酶切，电泳后得到预期大小的DNA带为阳性克隆。（或4分） 1、 如已知一基因的序列，试述用RT-PCR的方法克隆该基因的过程。
→加热变性，加DNA 聚合酶，合成cDNA第二链（1.5分）→ 继续PCR反应25－30个循环（1.5分）→PCR产物纯化并双酶切（1.5分）→加经同样双酶切的载体和连接酶（1.5分）→转化大肠杆菌（1.5分）→检测外源阳性克隆。（1.5分）
2、 请简要叙述蛋白质双向电泳技术分离多蛋白质的原理和步骤。
答：1）蛋白质双向电泳：其原理是分别依据蛋白质所带电荷和分子量的大小不同而达到将多种蛋白质分离的目的。（3分）其步骤
为：首先将蛋白质在pH梯度凝胶中进行等电点聚焦电泳。（3分）将第一相等电点聚焦电泳的胶条与SDS-PAGE胶负极密接，进行变性蛋白质电泳。（3分）考马斯亮蓝染色，分析蛋白条带。（3分）
3、 现有一克隆了外源基因的植物表达载体，简要叙述转基因植物的过程。
答：克隆了外源基因的植物表达载体转化农杆菌（2分）→ 转化菌培养扩增（2分）→侵染植物叶片碎片（叶盘）（2分）→诱导
生根培养基中培养，诱导生根（2分）→ 在诱导出芽培养基中培养，诱导出芽（2分）→培养的植株移栽至盆中，并检测转基因（如Southern,Northwen等）。（2分）
4、 简要解释顺式作用元件与反式作用因子，并各举一例说明他们的相互作用方式和功能。
答：顺式作用元件是指与一基因处在同一DNA链上的DNA片断，（3分）如启动子，它可与转录因子结合，从而起始特异基因的转
录。（3分）反式作用因子是指与一DNA片断或基因不在同一DNA链上的分子，它与DNA作用后可调节特异基因的活性。（3分）如转录因子，它与启动子结合后可起始特异基因的转录和表达。（3分）
答：提取细胞总RNA（1.5分）→加外源基因的2个特异引物（含特定酶切位点）和反转录酶，合成cDNA第一链（1.5分）
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