急慢性白血病患者骨髓微血管密度变化及临床意义

２００６年第１０卷第５期　实用临床医药杂志　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ１ｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｉｎ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　・６１・　急慢性白血病患者骨髓微血管　密度变化及Ｉ临床意义　王敏．顾健　（江苏省苏北人民医院血液科，江苏扬州，２２５００１）　摘要：目的探讨急慢性白血病患者骨髓血管新生情况与临床病情的关系。方法应用免疫组化染色（ＳＰ二步法）检　测３２例初诊白血病患者治疗前后骨髓活检标本微血管密度（＾　，［））变化。结果初诊急慢性白血病患者骨髓Ｍｖ１）［（２１　４８±　８　５０）／ｈｐ｛］明显高于对照组［（９．２９±３．５３）／ｈｐｆ］（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）；化疗后缓解者骨髓ＭＶＤ［（１３．０９±６．８４）／ｈｐｆ］较治疗前明显降低　（Ｐ＜Ｏ．０１），与ｘ寸照组相比无显著差异（Ｐ＝０．０６７）。结论有关，观察骨髓ＭＶＤ有助于判断疗效和评估预后。　关键词：白血病；血管新生；骨髓微血管密度　中图分类号：Ｒ　７３３．７　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—２３５３（２ｏ０６）０５＿０Ｏ６１－０３　初诊白血病患者骨髓存在血管新生，骨髓ＭＶＤ变化与临床病情　ＡＢＮｏＲＭＡＬＩＴＹ　ＡＮＤ　ＣＬＩＮＩＣＡＬ　ＳＩＧＮＩＦＩＣＡＮＣＥ　ｏＦ　ＢｏＮＥ　ＭＡＲＲｏＷ　ＭＩＣＲｏＶＥＳＳＥＬ　ＤＥＮＳＩＴＹ　ＩＮ　ＡＣＵＴＥ　ＡＮＤ　ＣＨＲｏＮＩＣ　ＬＥＵＫＥＭＩＡ　Ｗａｎｇ　Ｍｉｎ，Ｇｕ　Ｊｉｎ　ａ（ＴｈｅＮｏｒｔｈｅｒｎ　ＪｉａｎｇｓｕＰｅｏｐｌｅ　ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ，２２５００１）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ａｃｕｔｅ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｗｅ　ａｓｓａｙｅｄ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｂｉｏｐｓｉｅｓ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏ—　ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉａｌｃ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｆｏｒ　３２　ｎｅｗｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｅｄ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｏｓｅ　ｗｈｏ　ｒｅｃｅｉｖｅｄ　ｉｉｉｄｕｃｔｉｏｎ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ＭＶＤ［（２１．４８±８．５０）／ｈｐｆ］ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｅｗｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｅｄ　ａ—　ｃｕｔｅ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ［（９．２９±　３．５３）／ｈｐｆ］（Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅ　ｏｎｅ　ｂｍａｒｒｏｗ　ＭＶＤ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｍｉ￣ｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ［（１３．０９±６．８４）／ｈｐｆ］ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｎｅｗｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｅｄ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０　１）．Ａｎｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ：０．０６７）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ａｎ—　ｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｐｌａｙｅｄ　ａ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｏｆ　ｎｅｗｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｅｄ　ａｃｕｔｅ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ａｂｎｏｒ—　ｍａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ｎｌｓｒｒｏｗ　ＭＶＤ　ｗａｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｌｉｎｉａｌｃ　ｆｅａｔｕｒｅｓ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ＭＶＤ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｄｉａｔｏｒｃｓ　ｆｏｒ　ｒｅｃｕｐｅｒａｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｐａｔｉｅｎｔｓ．　ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｌｅｕｋｅｍｉａ；ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ；ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ　血管新生是指在原有血管的基础上形成新的　微小血管，与实体瘤的生长、增殖和恶化有关。作　者采用免疫组化染色技术检测急慢性白血病患者　１临床资料与方法　１．１一般资料　骨髓微血管密度（ＭＶＤ），探讨其在白血病发生、　发展中的作用，及其与临床病情的关系，为制定新　的白血病治疗方案提供理论依据。　收稿日期：２ｏｏ６一Ｏ５—１６　病例组３２例，均为初诊白血病患者，经ＭＩＣ　分型确诊。男１９例，女１３例，中位年龄４１．５岁　（１４～８０岁）；急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）２３例、急　基金项目：江苏省科技厅指导性计划项目（Ｂｓ　２００３６３５）　作者简介：王敏（１９７９一），女，江苏宿迁人，硕士研究生，住院医师。　维普资讯 http://www.cqvip.com

・６２・　实用临床医药杂志　第ｌ０卷　性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）３例、淋巴瘤细胞白血　病１例、慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）５例。　初诊ＡＭＬ患者予以蒽环类药物（柔红霉素、　米托蒽醌、高三尖杉酯碱）加阿糖胞苷为主联合化　疗方案；Ｍ３患者予全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）或三　氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导缓解；ＡＬＬ患者予以ＤＶＰ　（柔红霉素、长春新碱、强的松）为主方案治疗。２　个疗程达完全缓解者列入统计，疗效评估符合国　内标准…。　２７例ＡＬ患者中１２例接受２个疗程联合化　疗，其中完全缓解１０例，未缓解者２例；５例　ＣＭＬ－ＣＰ患者经羟基脲或干扰素治疗，外周血　ＷＢＣ＜１０×１０　／Ｌ，无发热、出血和肝脾肿大，均　达临床部分缓解…。取患者治疗前后骨髓活检　组织制备标本。　对照组共１５例，为本院骨科需手术治疗的骨　盆骨折和需髂骨为植骨标本的骨折患者，取髂骨　制备标本。均排除恶性肿瘤、血液系统疾病及结　缔组织病，中位年龄４０岁（２１～５２岁）。　１．２免疫组化染色（ＳＰ二步法）　骨髓活检标本常规制备石蜡包埋切片４　ｍ　厚。使用兔抗人ｖｗＦ多克隆抗体（北京中山生物　技术有限公司）标记内皮细胞。二抗采用抗兔　ＩｇＧ－ＨＲＰ多聚体（北京中山生物技术有限公司），　常规显色、苏木素复染，脱水、透明、封片。　１．３骨髓ＭＶＤ计数　首先在低倍镜（×４０倍）视野中选出血管最　丰富的区域，调至高倍镜（×４００倍）视野，记数３　个热点（微血管密集区，ｈｏｔ　ｓｐｏｔ）的微血管数，取　其平均值来表示ＭＶＤ。巨核细胞也被染色，但　从形态上可与内皮细胞鉴别，不作计数　２　Ｊ。　２结果　２．１初诊未治急慢性白血病患者组与对照组骨　髓ＭＶＤ检测　３２例初诊未治急慢性白血病患者骨髓ＭＶＤ　较对照明显增高，分别为（２１．４８±８．５０）Ａｎｐｆ和　（９，２９±３，５３）／ｈｐｆ，２者相比有显著性差异（Ｐ＜　０．０１）（见表１）。白血病患者骨髓微血管较正常　对照骨髓数量多，管腔小，细小分支多见，形态较　幼稚。见图２、３。　２．２白血病患者治疗前后骨髓ＭＶＤ变化　治疗后缓解者ＭＶＤ为（１３．０９±６．８４）Ａｎｐｆ，　较治疗前明显降低（尸＜０．０１），与对照组相比无　表１骨髓ＭＶＤ检测结果　注：与对照组相比，　Ｐ＜０　０５，有显著性差异；　ＣＭＬ治疗后达』临床部分缓解　显著差异（Ｐ＝０．０６７）。并且治疗后获缓解者微　血管形态也发生改变，与对照组骨髓相近似，可见　血管管腔较大，分支少，形态较成熟（见图４）。　２．３白血病骨髓ＭＶＤ与其它临床参数相关性　骨髓ＭＶＤ与血红蛋白、外周血白细胞总数、　血小板、骨髓及外周血幼稚细胞百分数、以及年龄　均无相关性（Ｐ＞０．０５）。　３讨论　血管新生是指在原有血管的基础上形成新的　微小血管，可为实体肿瘤的迅速生长提供氧气和　养料，并运走代谢产物。血管新生在实体肿瘤中　的作用已得到广泛确认。其在血液系统恶性肿瘤　中的作用以多发性骨髓瘤（ＭＭ）研究最早。Ｖａｃ—　ｃａ等　３Ｊ３首次提出ＭＭ患者骨髓血管新生程度明　显高于单克隆丙种球蛋白病患者。反应停用于治　疗ＭＭ，其抗血管新生作用已被证实。儿童ＡＬＬ　患者的骨髓研究亦得到相似结论　Ｊ。　本研究结果表明，初诊未治的急慢性白血病　患者骨髓ＭＶＤ明显高于正常水平，化疗后缓解　者ＭＶＤ较治疗前明显降低，并与对照组相比无　统计学差异。并且白血病患者骨髓微血管管腔很　小，甚至无管腔，可见许多细小分支，血管形态幼　稚；而正常骨髓组织的微血管管腔大，分支少见，　形态较成熟。化疗后缓解者血管管腔增大，分支　少见，与对照组骨髓相近似。说明血管新生在急　慢性白血病的发病机理中有重要作用。治疗后　ＭＶＤ减少的原因考虑主要由于化疗药对内皮细　胞的直接和间接的细胞毒作用有关。一方面，化　疗药直接作用于内皮细胞，产生的细胞毒作用导　致内皮细胞调亡增加；另一方面，化疗药通过杀伤　白血病细胞，减少促血管形成的细胞因子分泌，间　接抑制内皮细胞增殖。选择完成２个疗程化疗、　度过骨髓抑制期、骨髓象呈有核细胞增生活跃时　的骨髓活检标本作治疗后复查的研究对象，主要　由于此时增殖的内皮细胞可从化疗的细胞毒反应　维普资讯 http://www.cqvip.com

第５期　王敏等：急慢性白血病患者骨髓微血管密度变化及临床意义　・６３・　图１初诊白血病患者骨髓活检标本（ｔｉｅ染色ｌ　×４００　。　．一　图３初诊白血病患者骨髓活检标本（ＦⅧ标记）　ｘ４００　季　一中恢复过来，较骨髓抑制期的标本能更真实的反　∥　映骨髓ＭＶＤ。　．　．　＃　＃　本组ＡＬ患者骨髓ＭＶＤ与骨髓及外周血原　誊　始细胞百分数、白细胞总数、血小板、血红蛋白、以　．　簿　＿　ｌ蘧　爹．多　　黪　及年龄等多种临床参数均无相关性。与Ｐａｄｒｏ　等［　】的结果相一致。而Ｈｕｓｓｏｎｇ等ｌ　】认为骨髓微　血管数与原始细胞百分数呈正相关，且ＡＭＬ细　胞表达ＶＥＧＦ蛋白，考虑骨髓ＭＶＤ增加与白血　病原始细胞分泌Ⅵ　ＧＦ等因子促进血管形成有　关。本研究ＡＬ患者ＭＶＤ与骨髓原始细胞比例　无关，考虑可能由于研究的患者初诊时幼稚细胞　百分数较高，多集中于７０％以上，变异度较小，不　能完全反映骨髓ＭＶＤ与原始细胞含量之间的关　系。或是由于个体间自血病细胞释放的正负调控　因子比例有差异所致。　许多研究表明，ＭＶＤ增高与多种实体瘤预　后差有关ｌ６－７　Ｊ。在ＭＭ，骨髓ＭＶＤ亦可作为１　个新的预后指标ｌＬ３。ＭＤＳ患者的ＭＶＤ水平较　３Ｊ正常增高，但低于ＡＭＬ患者，且随着其亚型转化　为ＡＭＬ趋势增强，ＭＶＤ水平随之增高，说明　ＭＶＤ与疾病进展有关ｌ８　Ｊ。但有研究认为在儿童　ＡＬＬ及成人ＡＭＬ，骨髓ＭＶＤ与疾病复发和长　期缓解无关ｌ２，　。由于本课题观察的病例随访时　间较短，骨髓ＭＶＤ对白血病长期生存或复发的　预后价值有待进一步研究。　图２正常对照患者骨髓活检标本（ＦⅧ标记ｌ　＜４００　．．　＿　锈≯　锻　辨　ｗ　；　；　多　囊　．　遂　赢　番　ｔ　。＿　帮　。簟　　。。≯　ｉ酶　图４治疗后缓解者骨髓活检标本（ＦⅧ标记）　ｘ４００　ｌ一　针对内皮细胞的抗血管新生制剂较传统化疗　药物毒性小，副反应少，而且不会导致耐药［　。　与传统化疗药物结合使用，可提高化疗缓解率，减　少复发。本研究提示血管新生在白血病发展过程　中有重要作用，为制定新的抗白血病治疗方案提　供了理论依据［加】。　参考文献　［１］　张之南，沈梯．血液病诊断及疗效标准［Ｍ］．第２版　北京：北京科学出版社，１９９８　１６８．　１２］Ｐａ＆ｏ　Ｔ，Ｒｕｉｚ　Ｓ，Ｂｉｅｋｅｒ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｃｕｔｅ　ｍｙｅｌｏｉｄ　ｌｅｕｋｅｍｉａｌ　Ｊ．　Ｂｌｏｏｄ，２０００，９５（８）：２６３７．　１３］　Ｖａｃｃａ　Ａ，Ｒｉｂａｔｔｉ　Ｄ，Ｒｏｎｃａｌｉ，ｅｔ　ａ１．Ｂｏｎｅ　ｍａ￣ｏｗ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅ—　ｓｉｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｍｙｅｌｏｍａ　ｌ　Ｊ　ｊ．Ｂｒ　Ｊ　Ｈａｅｍａｔｏｌ，　１９９４，８７（３）：５０３．　１４］　Ａｇｕａｙｏ　Ａ，Ｋａｎｔａｒｊ　Ｊｎａ　Ｈ，Ｍａｎｓｈｏｕｒｉ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ　Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ａｃｕｔｅ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ａｎｄ　ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｅ　ｓｙｎｄｒｏｍｓ　ｌＪ　Ｊ．Ｂｌｏｏｄ，２０００，９６（６）：２２４０　ｌ５　Ｊ　Ｈｕｓｓｏｎｇ　Ｊ　Ｗ，Ｒｏｄｇｅｒｓ　Ｇ　Ｍ，Ｓｈａｍｉ　Ｐ　Ｊ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｉｎ—　ｃｒｅａｓｅｄ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｃｕｔｅ　ｍｙｅｌｏｉｄ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　［Ｊ　Ｊ．Ｂｌｏｏｄ，２０００，９５（１）：３０９．　［６］　Ｆｏｎｔｎａｉｎｉ　Ｇ，Ｌｕｃｃｈｉ　Ｍ，Ｖｉｇｎａｔｉ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ａｓ　ａ　ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒ　ｏｆ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｉｎ　ｎｏｎｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃ￣ｋｒｃｉｎｏ—　ｎｍ：ａ　ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｎａｔｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ，１９９７，８９：　８８１．　１７　Ｊ　Ｆｅｍａｎｄｅｚ　Ａｅｅｎｅｒｏ　Ｍ　Ｊ，Ｆａｒｉｎａ　Ｇｏｎｚａｌｅｚ　Ｊ，Ｇａｌｉｎｄｏ　Ｇａｌｌｅｇｏ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ　ａｓ　ａ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃａｔｏｒ　ｆｏｒ　ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｒｃｉｎｏｍａｌＪ　Ｊ．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｏｎｃｏ１，１９９８，１６：　１６３４．　１８］Ｌｅｅ　Ｓ　Ｈ，ＳｃｈｌＯＳＳ　Ｄ　Ｊ，Ｓｗａｉｎ　Ｇ　Ｌ．Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ　ｏｆ　ｖａｓｃｕｌｒａ　ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｎ１ｂｒｙｏ　ｒｅｑｕｉｒｅｓ　ｓｉｎｇａｌｉｇｎ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｆｉｈｒｏｂ一　１＆Ｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏ１　Ｃｈｅｍ，２０００，２７５　（４３）：３３６７９．　［９］　Ｋｅｒｂｅｌ　Ｒ　Ｓ．Ａ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｔｏ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．Ｎａ　ｔｕｒｅ，１９９７，３９０（６６５８）：３３５．　［１Ｏ］Ｆｉｅｄｌｅｒ　Ｗ，Ｓｔａｉｂ　Ｐ，Ｋｕｓｅ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ—　ｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｉｎ　ａｃｕｔｅ　ｍｙｅｌｏｉｄ　１ｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｊ，２００１，７　（Ｓｕｐｐｌ　３）：Ｓ１２９．　一　Ｉ