()JournalofXi'anJiaotonniversitMedicalSciencesgUy
Vol.25No.1
Feb.2004
结肠癌中h（WA／）的TERT、F1CIP121p
表达及二者相关性研究
李 路,罗金燕,程 晋,董 蕾
(西安交通大学第二医院消化内科,陕西西安 7)10004
摘要:目的 探讨h(/)(以下简称p)在结肠癌发病中的作用及其相互关系。方法 采用TERT和p21WAF1CIP121原位杂交和S分别检测4ABC免疫组化技术,5例结肠癌、10例结肠腺瘤及10例正常结肠组织中hTERT和p21的表达。结果 h阳性率分别为8,而且也见于结肠腺瘤(阳性率分21阳性反应不仅见于结肠癌(TERT、8.9%、46.7%)p;结肠癌中h病例中增高(),而p别为50.0%、10.0%)TERT阳性率在晚临床分期(C+D)P<0.0521阳性率在低分化癌及晚临床分期(病例中降低(;结肠癌中h。结论 C+D)P<0.05)TERT表达与pP<0.05)21表达有相关性(其表达变化可用于评估结肠癌的生物学行为和判定预后,且hhTERT表达和pTERT21缺乏均与结肠癌发生有关,较p21更具参考价值。
关键词:结肠癌;(/)hTERT;WAF1CIP121p
中图分类号:()R735.35 文献标识码:A 文章编号:1671-8259200401-0091-03
(/)ExressionandcorrelationofhTERTandp21WAF1CIP1p
incoloniccarcinoma
LiLu,LuoJinan,Chenin,DoneiygJgL
(,,,)DeartmentofGastroenteroloSecondHositalofXi'anJiaotonniversitXi'an710004ChinapgypgUy
(/)ABSTRACT:ObectiveoevaluatetheexressionandcorrelationofhTERTandp21WAF1CIP1incolonic Tjp,Methodscarcinoma.otalof45casesofnormalcoloniccarcinoma10casesofcolonicadenomasand10cases Atofnormalcolonictissueswerestudiedusin-s/t7hbridization(ISH)andimmunohistochemicaltechniues.g/yq
ResuItsTERTandp21werefoundnotonlncoloniccarcinoma(thepositiveratebein8.9%and46.7%, hyig8
,)resectivelbutalsoincolonicadenomas(thepositiveratebein0.0%and10.0%,resectivel.Thepositivepy)g5py;rateofhTERTexressionincreasedsinificantlinadvancedstae(C+D)ofcoloniccarcinoma(P<0.05)butpgyg21exressiondecreasedinlow-differentiatedcarcinomasandadvancedstae(C+D)ofcoloniccarcinoma(P 录酶,由模板R其活性被NA及催化蛋白亚基组成,认为与癌细胞永生化有关。作为端粒酶的重要蛋白组分,具有逆转录活性的hTERT(humantelomer-)与端粒酶活性高度相关,是asereversetranscritasep 1]端粒酶活性的重要限速因子[。hTERT的转录激 2] 衰老及永生化进展中的重要事件[。本文采用原位 杂交法和免疫组化法技术检测了6结5例正常结肠、并对肠良性病变及结肠癌中的hTERT、21的表达,p二者进行了比较分析,旨在探讨结肠癌的发生发展与研究其对结肠癌诊断、预后的hTERT表达的关系,临床意义。1 材料和方法 1.1 临床资料 选取本院1995年至2000年间有完 并行手术切除的结肠癌石整临床和病理学诊断资料, 蜡包埋标本4女性1年龄5例。其中男性27例,8例; 活严格控制端粒酶活性的表达,从而成为克服复制性 收稿日期:2003-03-20 修回日期:2003-07-12 基金项目:国家自然科学基金资助()No.39800061作者简介:李路(),男(汉族),硕士,主治医师胃肠1972-.研究方向: 系恶性肿瘤癌基因的表达及治疗. 92 西安交通大学学报(医学版) 第25卷 按33～76岁。所有病例术前均无放疗或化疗史,Dukes分期:A、B期共13例,C、D期共32例。取结肠腺瘤1正常结肠组织10例,0例作为试验对照。北京医科大1.2RNA探针( 主要试剂 生物素标记c学病理学系);小鼠抗人p美国S21单克隆抗体(anta ;链霉亲和素生物素过氧化物酶免疫Cruz公司产品)--组化染色试剂盒(北京中山生物技术有限公司)。脱蜡,水化后用1.3 原位杂交 常规石蜡切片, 0.1mo1·L-1HCl处0.088mo1·L-1H2O2封闭,理,·L-1蛋白酶消化,0.04mo1·L-1多聚甲100µg 醛固定,每片组织滴加20.095mo1·L-1乙醇脱水,0含1µ·µL杂交液(L-1cRNA探针,200µL-1gg·µµ 鲑精DNA,1mL-1DTT,0.5mo1·L-1甲酰g·m胺,,2×denhardt液,1mL-1葡聚糖,6×SSC)g·m放入含0.2j杂交16～5mo1·L-1甲酰胺湿盒中4于2×S20h,SC洗3次,1:100马血清封闭后用Av-最后Didin+Bioitn-HRP孵育,NA显色。常规设立阴性对照。 乙醇梯度水化,90～1.4 免疫组化染色 二甲苯、100j15min抗原修复,1:20滴加鼠抗人p21单克隆抗体;生物素标记山羊抗鼠二抗,滴加ABC-过氧化物酶复合物,DAB-H2O2显色。常规设立阴性对照。1.5 结果判定 hTERT主要以细胞质及核出现棕 褐色颗粒。p21蛋白以细胞核呈棕褐色染色。染色强度分级为:阴性(:肿瘤细胞不显色或背景深,染-)色不清晰;弱阳性(:中度阳性+)25%肿瘤细胞显色;(:强阳性(:50%肿瘤细胞显色;75%肿瘤细胞3)2) 显色。 1.6 统计学处理 用x检验和技术相关分析进行统计学分析。2 结 果 2.1 端粒酶hTERT原位杂交 45例结肠癌组织中4阳性率为80例hTERT表达阳性,8.9%。大多数杂交信号位于细胞质,部分以细胞核着色为主,且大多为中度～强阳性表达(图1)。h中、TERT在高、低分化癌中的表达分别为8/、7.5%(1416)91.7%(/)及8/。肿瘤旁组织h1118.2%(215)TERT活性表达部分为弱阳性。结肠腺瘤hTERT阳性率为/),大多为弱阳性表达。150.0%(5100例正常结肠组织中均为阴性。 2.2 p21免疫组化结果 癌组织标本中p21蛋白阳性表达率为4其中高分化癌6/,6.7%,8.8%(1116)中分化癌5/),低分化癌1/)(图6.3%(7127.6%(317)。正常结肠组织及腺瘤均为阴性。2 2 图1 结肠低分化癌hTERTmRNA(+)i.1Low-differentiationcancerofcolonhTERTmRNA(+)ISH ×400 F g图2 结肠高分化癌p(21+) (Fi.2Hih-differentiationcancerofcolonp21+)ABC×200 Sgg 2.3 hTERT、21与肿瘤良恶性的关系 本组结肠p 腺瘤中h/)的阳性表达,且多TERT仅有50.0%(510为弱阳性;而p与结肠癌组织中21蛋白阳性率为0,。h的阳性表达率相比差异显著(05)TERT活P<0.性表达在DukesA+B期与C+D期病例中的阳性率分别为6/)和9/),二者比较9.2%(9136.9%(3132有显著性差异(;05)21蛋白表达在DukesAP<0.p+B期与C+D期病例中的阳性率分别为76.9%(/)和3/,二者比较有显著性差异10134.4%(1132))。(05P<0. 2.4 结肠癌中h21表达的相关性 TERT与p hTERT与p21在结肠癌中的表达复合率为40%(/),其中阳性复合率3/,阴性复合率18457.8(1718) /。统计学处理有一定差异性(2.2%(118)P<)。0.053 讨 论 关于端粒酶表达与肿瘤的发生发展的研究国外 [] 已做了大量报道。K2种不同im等人3发现在来源1 组织中的4端粒酶活性高达800多例肿瘤中,4.8%, 1期李 路,罗金燕,程 晋,等.结肠癌中h(/)的表达及二者相关性研究TERT、21WAF1CIP1p 93 而肿瘤周围正常组织中端粒酶活性表达率仅为 [4] 4.2%。Shay等检测了胃癌等8种癌肿的端粒酶 认为端粒酶是目前最特异和最具有普遍性的肿活性, 综上所述,恶性hTERT活性表达在结肠的良、肿瘤中具有明显差异,在结肠的癌前疾病组织内也已提示h具有hTERT活性表达的细胞群,TERT在结肠癌的发生发展中起重要作用,也提示hTERT是一个比p21更好的肿瘤标志物。同时检测hTERT和 可互补不足之处,能更好地描述结肠21蛋白表达,p 从而为结肠癌的发病机癌的生物学行为及判断预后,制和生物治疗提供一些新的线索。 参考文献: 瘤标志物,推测其可能在肿瘤的诊断和治疗方面具有良好的临床应用价值。hTERT作为端粒酶的逆转录酶组分,与端粒酶活性的表达具有密切相关性,且多种肿瘤调控因子均通过对hTERT的调节来影响 5,6] 端粒酶活性的表达[。本实验对结肠癌中hTERT 的表达进行检测,旨在间接反映端粒酶活性的表达状况。 本实验结果表明,hTERT在正常结肠组织细胞及坏死区呈阴性表达,在结肠腺瘤中呈一定程度的弱阳性表达,而在结肠癌中的阳性表达率则高达8.9%,与文献中80%～90%恶性肿瘤具有端粒酶 活性的报道相一致[7] 。且在肿瘤血管区周围、细胞密集的区域及恶性程度高者呈明显的强阳性表达。这对于鉴别肿瘤的良、恶性具有重要意义,且为结肠癌的演进发展模式提供了良好的检测指标,而对TERT阳性表达的良性病变进行追踪则有可能有助于癌变的早期发现及术后复发的早期诊断。 Monika等[8] 对结肠癌进行端粒酶定量发现其活性与肿瘤浸润、转移、分化和预后关系密切。我们的 实验亦证实了这一点。在淋巴结发生转移的晚临床分期结肠癌中,hTERT的表达明显高于早期未浸润病灶,且随着癌症进展,癌灶中hTERT呈阳性的细胞数量亦呈逐步增高趋势。但hTERT的活性与结肠癌各病理分级之间无显著相关性。这可能与 TERT转录体的表达具有不同的剪接方式有关[9]。 实验表明p21蛋白的阳性表达与癌的分化、 浸润及淋巴结转移呈负相关。提示p21在结肠癌的恶性转化中起抑制作用, 其表达的下调可导致肿瘤细胞的恶性表型增加。本研究还发现,结肠癌中hTERT基因的阳性表达率高于p21蛋白的表达( P<0.05),而且TERT与p21的表达关系密切:抑癌基因p21的存在足以抑制hTERT的表达,p21的突变和hTRET的表达的积加作用更可促进肿瘤的增殖与转移。 [1]ItoH,TakakuraM,InoueM,etal.Expressionofhumante-lomerasesubunitsandcorrelationwithtelomeraseactivityinurothelialcancer[J].ClinCancerRes,1998,4:1603-1608.[2]KebinLiu,SchoonmakerMM,LevineBL,etal.Constitutiveandregulatedexpressionoftelomerasereversetranscriptase(hTERT)inhumanlymphocytes[J].ProcNat1AcadSciUSA,1999,96:5147-5152. [3]KimNW,PiatyszekMA,ProwerKR,etal.Specificassociationofhumantelomeraseactivitywithimmortalcellsandcancer[J].Science,1994,266:2011-2015. [4]ShayJw,BacchettiS,WatneyE,etal.Asurveyoftelomeraseactivityinhumancancer[J].EurJCancer,1997,33:787-791.[5]KiyonoT,FosterSA,KoopJI,etal.BothRb/p16NK4ainac-tivitionandtelomeraseactivityarerequiredtoimmortalizehu-manepithelialcells[J].Nature,1998,396(5):84-88.[6]KangS S,KwonT,DoSI,etal.Aktproteinkinaseenhancehu-mantelomeraseactivitythroughphosphorylationoftelomerasereversetranscriptasesubunit[J].BiolChem,1999,274(19):13085-13090. [7]BodnorAG,OuelletteM,FrolkisM,etal.Extensionoflife-spanbyintroductionoftelomeraseintonormalhumancells[J].Science ,1998,279:349-352.[8]MonikaEngelhardt,KangSS,GreebergRA,etal.Telomeraseandtelomerelengthinthedevelopmentandprogressionofpre-malignantlesionstocolorectalcancer[J].ClinCancerRes,1997,3:1931-1941. [9]GaryA,KilianA,UlanerT,etal.Telomeraseactivityi nhu-mandevelopmentisregulatedbyhumanreversetranscriptase(hTERT)transcriptionandbyalternateplicingofhTERTtran-scrip ts[J].CancerRes,1998,58:4168-4172.(编辑 卓选鹏) 8hhh 因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容