气相色谱-质谱法测定盐酸克伦特罗

２００８年第２１期　盐酸克伦特罗又称咳喘素、　瘦肉精，属１３一兴奋剂类药物。　当其使用超过治疗剂量几倍的量　用于家畜饲养时，可以产生瘦肉　含量更高的胴体，从而加快肉用　家畜的生长速度。自１９９０年欧　洲发生食用残留兴奋剂牛肝而引　起的食物中毒事件后，欧盟颁布　法规禁止了Ｂ一兴奋剂作为生长　促进剂使用。我国农业部第１７６　号公告规定，禁止在饲料和动物　笺祖色谱．质谱法测定盐酸克伦特罗　饮用水中使用盐酸克伦特罗。　饲料中盐酸克伦特罗的检验　方法较多。其中，农业行业标准　ＮＹ／Ｔ４３８—２００　１规定了以高效液相　色谱（ＨＰＬＣ）法和气相色谱一质　谱（ＧＣ—ＭＳ）法测定饲料中的盐　酸克伦特罗，此标准适用于配合　饲料、浓缩饲料和预混合饲料中　盐酸克伦特罗的测定。而在实际工　作中时常遇见未知屙Ｉ生的样品，无　法用现行的标准进行测定，本试验　旨在为检测未知样品中盐酸克伦　特罗的含量提供参考。　１材料与方法　１．１仪器和设备Ａｇｉｌｅｎｔ　５９７３ｉ　型气相色谱一质谱仪、振荡器、　同相萃取装置、氮气吹干仪。　１．２试剂和材料ＭＣＸ固相萃　取柱（３　ｃｃ／６０　ｍｇ，Ｗａｔｅｒｓ产　品）。乙酸钠缓冲液：称取３１．６３　ｇ三水合乙酸　钠，溶解于水中，加入１　１．６　ｍＬ冰乙酸，用水稀　释至１　Ｌ。乙酸溶液：移取５．７　ｍＬ冰乙酸于１００　ｍＬ　容量瓶中，用水定容至刻度。洗脱液：取３．５　ｍＬ　氨水于１００　ｍＬ容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻　度。Ｎ，Ｏ一衍生剂：双三甲基硅烷三氟乙酰胺　（ＢＳＴＦＡ）。盐酸克伦特罗标准溶液：准确称取盐　酸克伦特罗标准品适量，用甲醇溶解，配制成浓　度为１００　ｇ／ｍＬ的标准贮备液，一２Ｏ℃冰箱中保　存。Ｉ临用前，取此贮备液用甲醇稀释成浓度分　中圈技　别为０．０２５、０．０５０、０．１００、　０．５００、１．００　ｇ／ｍＬ的盐酸克伦　特罗标准工作液。　ｌ－３样品某饲料添加物样　品，成分未知，为灰色粉末，　不溶于水，易溶于酸，无臭，　无味。　１．４测定步骤　１．４．１　提取。称取饲料０．５　ｇ　（精确至０．０００　ｌ　ｇ），置于２５０ｍＬ　菩　三角瓶中，加入乙酸钠缓冲液　省　５０　ｍＬ，振摇使试样润湿，盖紧　姜　塞子，在旋转振荡器上振荡提　取３０　ｍｉｎ，溶液用定性滤纸过　料　滤，备用。　坚　１．４．２净化。ＭＣＸ固相萃取柱　蒹　先用３　ｍＬ甲醇、３　ｍＬ水活化。　取２　ｍＬ过滤液（若提取液中盐　杨　酸克伦特罗含量过高，可先用　乙酸钠缓冲液适当稀释）过　。　柱，过柱速度不超过ｌ　ｍＥ／ｍｉｎ，　分别用３　ｍＬ乙酸溶液和３　ｍＬ甲　醇淋洗固相萃取柱，抽干。用　３ｍＬ洗脱液洗脱。洗脱液在　４０℃水浴中氮气吹干。同时，　取２００　Ｌ不同浓度的盐酸克伦　特罗标准工作液吹干。　１．４＿３衍生。取上述氮气吹干残　留物，￣ｕＡ．１ｏｏ　Ｌ甲苯和１００　ｔｚＬ　衍生剂，充分混合均匀，置　７０　烘箱中反应ｌ　ｈ。冷却至室温后上机测定。　１．４．４检测。　１．４．４．１　气相色谱一质谱条件。色谱柱：　ＨＰ一５ＭＳ，长３０　ｍ，内径０．２５　ｍｍ，膜厚０．２５　ｍ；　载气：氦气（纯度９９．９９９％）；流速：１．０　ｍＥ／　ｍｉｎ。进样口温度：２６０　ｏＣ；进样方式：不分流；　进样量：１．０　ＩｘＬ；柱温程序：初始温度为７０　ｃｃ，　保持ｌ　ｍｉｎ，以２５￣／ｍｉｎ升温速率升温至２００℃，　保持６　ｍｉｎ，再以２５￣Ｃ／ａｒｉｎ升温至２８０　ｃＣ并保持　２　ｍｉｎ；ＥＩ源电子轰击能量：７０　ｅＶ；离子源温　３７　．｛ｒ圆杈　度：２３０　ｏＣ；四极杆温度：１６０　ｏＣ；　ＧＣ／ＭＳ传输线温度：２８０　ｏＣ；ＥＭ电压：　高于调谐电压２００　Ｖ；溶剂延迟：７　ｍｉｎ；选择监测离子（ｍ／ｚ）：８６，１８７，　２００８年第２１期　２４３，２６２，其中，８６为定量离子。　１．４．４．２定性定量方法。定性方法：样　品峰与标准品峰保留时间的相对偏差　不大于０．５％，且选择离子相对强度　（以ｍ／ｚ８６为基峰）与标准品相差不大　于±２０％。定量方法：选择离子监测　ｌｌ　８．００　９．００　１０．Ｏ０　ｌ１．００　１２．ｏｏ　１３．００　１４．Ｏ０　１５．００　１６．００　１７．００　图１　０．１￣ｇ／ｍＬ盐酸克伦特罗标准溶液色谱图　Ｏ　９　８　７　６　５　４　３　２１　Ｏ　９　８　７　６　５　４　３　２１　（ＳＩＭ）法计算峰面积，在仪器检测线　勰拍　加　８　６　４　２　渡　咖　咖　咖　咖　咖咖　咖咖　咖　。　性范围内进行单点校准定量。渡　咖　咖　咖咖　咖　　２结果与讨论　２．１　盐酸克伦特罗的色谱图与质谱图　车　度善｜　黜黜黜　舳　∞　∞　∞　∞　如标准溶液色谱图、标准溶液质谱图和饲　料样品色谱图分别见图１，图２，图３。　从图中可以看出，盐酸克伦特罗得到了　很好的基线分离，峰形对称，无杂质峰　干扰。　２．２标准曲线线性范围　盐酸克伦特　罗对照品浓度为０．０２５、０．０５０、０．１００、　质核比／ｍ／ｚ　８０　９ｏ　１００　１１０　１２０　１３０　１４０　１５０　１６０　１７０　１８０　１９０　２００　２１０　２２０　２３０　２４０　２５０　２６０　０．５００、１．０００　Ｉｘｇ／ｍＬ时，在上述检测　条件下，将标准工作液依次从低浓　度到高浓度进样，以定量离子峰面　积与标准溶液浓度（Ｉｘｇ／ｍＬ）作标准　曲线，并计算标准曲线的回归方程　和相关系数。盐酸克伦特罗标准溶　液浓度在０．０２５一１．０００　咖Ｌ，相关系　数ｒ＝０．９９９　２，具有良好的线性范围。　２．３样品的提取盐酸克伦特罗易溶　图２　０．１￣．ｇ／ｍＬ盐酸克伦特罗标准溶液质谱图　于酸性溶液中，比较了甲醇－水溶液　（９：１，含０．２％盐酸）、０．５％偏磷酸－甲　醇（８：２）和乙酸钠缓冲液对该样品的　提取效果。结果显示，用乙酸钠缓冲　液提取，操作简单，杂质相对较少，　不影响检测。　２．４样品的净化８．００　９．Ｏ０　ｌ０．００　Ｉ１．００　ｌ２．００　ｌ３．００　ｌ４．Ｏ０　１５．００　１６００　１７．００　图３饲料样品色谱图　在酸性条件下，盐酸克伦特罗　Ｔ４３８—２００１中规定的质谱条件进行测定，该条件　能较好地分离上述提取液，无杂质干扰。　３结论　呈正离子态，能被阳离子交换剂吸附，而在碱性　溶液中又可与阳离子交换剂脱附，因此，以离子　交换为主的混合型阳离子固相萃取柱对盐酸克伦　特罗的乙酸钠缓冲液提取物具有较好的净化效果。　２．５质谱条件的确定参考农业行业标准ＮＹ／　本检测方法可测定未知饲料添加物中盐酸　克伦特罗的含量，具有良好的相关系数，样品的　提取和净化操作简单，条件易于掌握。口