川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质Bcl-2表达的影响

ＣＨＩＮＥｓＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＡＮＡＴＯＭＹ　Ｖｏ１．３３　Ｎｏ．１　２０１０　解剖学杂志２０１０年第３３卷第１期　川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质Ｂｃｌ一２表达的影响　李庚华　杨迎春　任占川　△　（山西医科大学汾阳学院解剖学教研室，汾阳０３２２００）　摘要　目的：研究川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后Ｂｃｌ一２表达的影响。方法：以线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞的　局灶性脑缺血再灌注模型，采用免疫印迹、２，３，５－氯化三苯四氮唑（ＴＴＣ）、Ｈ—Ｅ染色和神经行为相结合的方法，观　测缺血再灌注侧大脑皮质内Ｂｃｌ～２的表达、脑梗塞体积、脑组织结构及神经功能的变化。结果：与缺血再灌注组（Ｉ　２　ｈ／Ｒ２４　ｈ）比较，川Ｉ芎嗪组的Ｂｃｌ一２表达明显增高，脑梗塞体明显缩小，脑组织的病理损伤和神经异常行为明显减轻。　结论：川芎嗪可通过上调Ｂｃｌ一２的表达，缩小脑梗塞的体积和减轻脑缺血区组织结构的损伤以及明显改善神经症状，　对脑缺血再灌注损伤有保护作用。　关键词脑缺血再灌注；川芎嗪；Ｂｃｌ一２；大脑皮质；大鼠　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｅｙｒａｚｉｎｅ　ｏｎ　Ｂｃｌ一２　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｃｏｒｔｅｘ　ａｆｔｅｒ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｊｕｒｙ　Ｌｉ　Ｇｅｎｇｈｕａ　，Ｙａｎｇ　Ｙｉｎｇｃｈｕｎ　，Ｒｅｎ　Ｚｈａｎｃｈｕａｎ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｎａｔｏｍｙ，Ｆｅｎｙａｎｇ　Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｎｙａｎｇ　０３２２００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｉｎｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｋ２　ａｆｔｅｒ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ－ｒｅｐｅｒ—　ｆｕｓｉｏｎ　ｉｎ　ｊｕｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｆｏｃａ１　ｃｅｒｅｂｒａ１　ｉｓｃｈｅｍｉｅ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｍｏｔ［Ｌ、１　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｒｅａｄ　ｅｍｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｄｄｌｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ａｒｔｅｒｙ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＴＴＣ　ｓｔａｉｎｉｎｇ，Ｈ—Ｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｅａ１　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｘａｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｅ１—２　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｃｏｒｔｅｘ，ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ　ｖｏｌｕｍｅ，ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄａｍａｇｅ　ｏｆ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｉ２　ｈ／Ｒ２４　ｈ），ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２　ｗａｓ　ｉｎ—　ｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ，ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ　ｖｏｌｕｍｅ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｄｉｓｏＭｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄａｍａｇｅ　ｏｆ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗａｓ　ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ　ｉｎ　ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｅｙｒａｚｉｎｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｅｙｒａｚｉｎｅ　ｈａｓ　ａ　ｎｅｕｒｏｐｒｅｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｂｙ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ一２，ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ　ｖｏｌｕｍｅ，ａｔｔｅｎｕａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄａｍａｇｅ　ｏｆ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ　ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｙｍｐｔｏｍｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ；ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｉｎｅ；Ｂｃｌ－２；ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｃｏｒｔｅｘ；ｒａｔ　缺血性脑血管病严重影响着人类的健康，研究脑　作用，报道甚少。本实验对脑缺血再灌注损伤后脑梗　缺血损伤的病理机制和防治措施，成为研究热点＿１｛］。　塞体积、神经表现和Ｂｃｌ一２的表达以及川芎嗪的干预作　脑缺血再灌注损伤的机制十分复杂，与细胞凋亡、钙离　用进行了研究，旨在探讨川芎嗪对脑缺血再灌注损伤　子稳态的失衡以及自由基的形成等有关。其中细胞凋　的保护机制，为有效治疗脑缺血再灌注损伤提供实验　亡是脑缺血再灌注损伤的重要形式之一ｌ＿４　。脑缺血后　依据。　的凋亡细胞主要出现在半暗带，因此尽早挽救半暗带　内凋亡的神经元，阻止神经元向坏死方向发展，具有重　１材料和方法　要的意义［５］。原癌基因Ｂｃｌ一２可特异性地抑制细胞凋　１．１　药物、仪器和实验动物　亡，对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。川Ｉ芎嗪（ｔｅｔｒａ—　川芎嗪注射液（４０　ｒａｇ／２　ｍｌ，北京市永康药业有限　ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｉｎｅ）为中药川芎的提取成分，具有抗脂质　公司）；山羊抗Ｂｃｌ一２多克隆抗体为Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ产品；　过氧化、保护血管内皮和改善微循环以及降低钙蛋白　ＳＰ试剂盒购自北京中杉；形态图像采集及分析系统为　酶（ｃａｌｐａｉｎ）活性，起到对脑的保护作用等Ｉ６。　。但川芎　江苏捷达产品。健康雄性ＳＤ大鼠（２８０　ｇ－－＋２０　ｇ）３０只　嗪是否可通过上调Ｂｃｌ一２，对脑缺血再灌注损伤有保护　（购自山西医科大学实验动物中心），随机分为假手术　组（１０只）、川Ｉ芎嗪组（１０只）和缺血再灌注（１２　ｈ／Ｒ２４　山西省高校科技研究开发项目（２００６１３０４９）　第１作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｇｅｎｇｈｕａ８Ｏ０９２４＠１２６．ｅｏｍ　ｈ）组（１０只）３组。　△通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｒ８８００１＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ　１．２动物模型的制作及取材　收稿Ｅｔ期：２００９　０５～２６；修回日期：２００９一ｌＯ一２３　参照Ｚｅａ　Ｌｏｎｇａ等的方法［１　，沿颈部正中切开皮　８２一　肤，分离出右侧颈总动脉（ＣＣＡ）、颈外动脉（ＥＣＡ）、颈　２４　ｈ，数码相机拍摄，用ＪＤ－８０１形态学图像分析系统测　量其梗死面积，并按如下公式计算缺血侧脑组织的梗　死体积以及其所占的百分比。　内动脉（ＩＣＡ）。在ＥＣＡ游离段剪一小口，将尼龙线插　入，经ＣＣＡ分权处进入ＩＣＡ而入颅，栓线插入的深度　约为１８～２０　ｍｍ。扎紧，外留１　ｃｍ长线头。缺血２　ｈ　＝＝＝１　后，抽出尼龙线使其头端沿ＩＣＡ回到ＥＣＡ中，即可恢　复ＭＣＡ血供，实现再灌注；假手术组尼龙线插入长度　小于１０　ｍｍ，不阻塞ＭＣＡ；川Ｉ芎嗪组大鼠分别在术前　和术后１２　ｈ于腹腔内注射川芎嗪（４０　ｍｇ／ｋｇ）。上述３　组，均于再灌注２４　ｈ后断头处死，迅速取缺血侧脑组　织，（视交叉前、后２　ｍｍ之间的冠状脑片），将脑片放人　∑（Ａ＋Ａ　）／２Ｘｈ　一１　（Ｖ：脑梗死体积；Ａ＿：第ｉ个脑片的梗死面积；ｈ：切　片厚度）　１．６神经功能评分　采用５分制评分标准ＥｌｚＪ，０分：正常，无神经损伤　症状；１分：对侧前爪部分屈曲或全部屈曲；２分：向偏　预冷的生理盐水中洗去血液，滤纸拭干，一８０℃保存　备用。　１．３　Ｈ—Ｅ染色　染色步骤：二甲苯Ｉ、ＩＩ各２０　ｍｉｎ－－￣１００　乙醇Ｉ、ＩＩ　各１５　ｍｉｎ－－￣９５　乙醇，８０　９／６乙醇，７０　乙醇，各１０　ｍｉｎ—　蒸馏水５　ｍｉｎ一苏木精染色１５　ｍｉｎ，摇床轻摇一自来水　冲洗一８０　乙醇３Ｏ　ｓ一９５　乙醇Ｉ、ＩＩ各２　ｍｉｎ－－－￣１００　乙醇Ｉ、ＩＩ各５　ｍｉｎ－￣甲苯Ｉ、ＩＩ各５　ｍｉｎ，中性树胶封　片一显微摄影。　１．４免疫印迹法检测Ｂｃｌ－２表达　１．４．１蛋白提取取冻存脑组织（大脑皮层），按每　０．１　ｇ组织加入ｌ　ｍｌ裂解液，在玻璃匀浆器中充分匀浆　（冰上进行）后，超声细胞粉碎仪粉碎，４℃低温离心机　１５　０００　ｒ／ｒａｉｎ离心２０　ｍｉｎ，取上清，将制备好的蛋白样　品置－－８０℃保存备用。　１．４．２蛋白含量的测定以０．００１　ｇ／０．００１　Ｌ的牛血　清白蛋白（ＢＳＡ）为标准蛋白，按考马斯亮蓝法测定蛋　白含量。　１．４．３电泳和转膜按上样量１００　ｇ决定上样体积，　向计算好上样量的每份标本中加入等体积的２×ＳＤＳ　上样缓冲液，１００℃煮沸变性５　ｍｉｎ，取出标本冷却至室　温后上样，经１２　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后转移到硝酸纤维素滤　膜（ＮＣ膜）上。　１．４．４免疫印迹将硝酸纤维素滤膜放人加有５　蛋　白干粉的ＰＢＳＴ中，室温封闭２　ｈ后，加入１：１００的　Ｂｃｌ一２抗体，４℃孵育过夜。而后加入辣根酶标记的山　羊抗兔ＩｇＧ（１：ｌ　０００），室温３　ｈ。２次抗体孵育后，均　用ＰＢＳＴ液洗膜，１０　ｍｉｎ×４次。化学发光、显影、定　影。采用捷达ＪＤ８０１图像分析软件对目的条带光密度　进行半定量、根据目的条带的值与内参照　ａｃｔｉｎ的值　之比行半定量分析。　１．５　２，３，５一氯化三苯四氮唑（ＴＴＣ）染色　各组大鼠按规定时间点进行神经病学评分后断头　处死，迅速取脑，生理盐水漂洗后置一２０℃冷冻１０　ｍｉｎ，　切除嗅球、小脑和低位脑干，从前向后连续做２　ｍｍ厚　的冠状切片，置２　ＴＴＣ磷酸盐缓冲液中３７℃避光孵　浴３０　ｍｉｎ，其间每隔１０　ｍｉｎ翻动１次脑片使脑片染色　均匀，经染色后，将脑组织置１０　多聚甲醛液中固定　瘫侧转圈；３分；向偏瘫侧倾倒；４分；不能自发行走，意　识丧失。　１．７统计学处理　数据统计采用ＳＰＳＳ１１．５统计软件包进行单因素　方差分析（Ｏｎｅ—ｗａｙ　ＡＮＯＶＹ），ＳＮＫ（ｇ检验）进行两　两比较，Ｓｐｅａｒｍａｎ相关分析，数据皆以　±Ｓ，方差不齐　时用Ｄｕｎｎｅｔ’Ｓ　Ｔ３法。　２结果　２．１神经功能评定　假手术组大鼠均无异常行为，行为评分为０分；　Ｉ２　ｈ／Ｒ２４　ｈ大鼠均不同程度地出现左侧前肢不能伸展，　向偏瘫侧转圈或倾倒等神经症状，行为评分为１．７±　０．６７；川芎嗪组大鼠神经损伤症状较Ｉ２　ｈ／Ｒ２４　ｈ组明　显减轻，仅有左侧前肢不能完全伸展，行为评分为０．７±　０．４５（Ｐ＜Ｏ．０５）。　２．２脑组织病理变化的影响　Ｈ—Ｅ染色可见，假手术组脑组织形态结构正常，皮　层神经细胞密集，排列整齐。神经元胞质丰富，淡染，　核圆居中，核仁清楚。血管内皮细胞完整、连接紧密，　管周致密（图１Ａ）；与假手术组相比，Ｉ２　ｈ／Ｒ２４　ｈ大鼠大　脑组织可见明显梗死灶，大部分神经元变性，细胞周围　间隙明显增宽，损伤严重的细胞呈空泡状，残存有核细　胞数目明显减少，细胞呈皱缩状，胞质浓染，细胞核固　缩成三角形或破碎消失（图１Ｂ）；川芎嗪组大鼠梗死侧　脑组织损伤明显减轻，可见许多正常神经元（图１Ｃ）。　２．３脑梗死体积与梗死百分比　ＴＴＣ染色结果（图２），白色区域代表缺血梗死部　位。假手术组未见梗死苍白区，Ｉ２　ｈ／Ｒ２４　ｈ组均有明显　的梗死苍白区。与１２　ｈ／Ｒ２４　ｈ组比较，川芎嗪组的脑　梗死白色区明显减小（Ｐ＜Ｏ．０１）（表１）。　２．４脑组织Ｂｃｌ一２含量的变化　免疫印迹结果显示，假手术组Ｂｃｌ一２特异性蛋白条　带不明显，川Ｉ芎嗪组大鼠蛋白含量明显高于Ｉ２　ｈ／Ｒ２４　ｈ　（Ｐ＜０．０１）（表１，图３）。　３讨论　缺血脑组织中Ｂｃｌ一２蛋白的表达，是抑制细胞凋亡　８３—　鼠的脑缺血区，组织排列紧密，神经细胞轮廓清楚，胞　［４］　程倚萌，娄季宇，王金兰，等．大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Ｂｃｌ一　核圆，核仁明显。在神经功能方面，Ｉ２　ｈ／Ｒ２４　ｈ组大鼠　２、Ｂａｘ蛋白的表达［Ｊ］．中国实用神经疾病杂志，２００７，１０（３）：　９５—９７．　均不同程度地出现左侧前肢不能伸展，向偏瘫侧转圈　［５］　Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａ　Ｋ，Ｍａｔｓｕｙａｍａ　Ｔ，Ｋｉｔａｇａｗａ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ，Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　或倾倒等神经症状，而ＴＭＰ鼠神经损伤症状较模型组　Ｂｃｌ——２　ｆａｍｉｌｙ　ｐｒｏｔｅｉｎｓｐｒｅｃｅｄｅ　ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ　ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｅ—　明显减轻，仅有左侧前肢不能完全伸展。上述表明川Ｉ　ｎｕｍｂｒａ，ｂｕｔ　ｎｏｔ　ｉｎ　ｉｎｆａｒｃｔ　ｃｅｎｔｒｅｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｌｏｃａｌ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅ—　芎嗪可明显减轻缺血再灌注引起的脑组织结构方面的　ｍｉａ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ＦＪ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，８３（２）：４３９—４４８．　损伤和改善脑缺血再灌注损伤所致的神经损伤表现，　［６］　陈可冀．川芎嗪的化学、药理与临床应用［Ｍ］．北京：人民卫生出　可能是通过上调Ｂｃｌ一２的表达而实现的。　版社，１９９９：５５—５８．　［７］　王艳萍，李文兰，范玉奇．ＪＩｌ芎嗪药理作用的研究进展ｌＪ］．药品评　另外Ｂｃｌ一２蛋白的表达可以减少脑梗塞的体积。　价，２００６，３（２）：１４４—１４７．　Ｈａｔａ等在Ｂｃｌ一２基因敲除的大鼠局灶性脑缺血后显　［８］　舒冰，周重建，马迎辉，等．中药川芎嗪有效成分的药理作用研究　示，Ｂｃｌ一２蛋白的缺如不影响脑血流，而脑梗塞体积显　进展［Ｊ］．中国药理学通报，２００６，２２（９）：１０４３—１０４７．　著增加。本实验结果显示，Ｉ２　ｈ／Ｒ２４　ｈ组脑梗塞体积占　［９］　李静，马兰，潘悦．川Ｉ芎嗪对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护　全脑的４１．３４　，而川芎嗪组梗塞体积仅占全脑的２０．　作用＿Ｊ］．中药新药与Ｉ临床药理，２００８，１９（６）：４４５　４４６．　［１Ｏ］　６ｌ　。差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），这与任守忠　徐芝秀．Ｊ＇１３嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用口］．实用中　医药杂志，２００７，２３（７）：４１１　４１３．　等＿１　５＿报道一致。　，１１１］　任占川，郭俊仙，杨迎春，等．脑缺血再灌注后ＣＯＸ－２的表达及川　总之，尽管近年来对脑缺血损伤进行了大量的研　芎嗪的干预作用口］．解剖学杂志，２００８，３１（６）：８３１　８３３．　究，但其确切的发生机制尚不清楚，缺乏有效的干预手　［１２］　Ｚｅａ　Ｌｏｎｇａ　Ｅ　Ｌ，Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ　Ｐ　Ｒ，Ｃａｒｌｓｏｎ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ　ｍｉｄ　段。本实验结果表明，川Ｉ芎嗪可通过上调Ｂｃｌ一２的表　ｄｌｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ａｒｔｅｒｙ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｃａｒａｎｉｅｃｔｏｍｙ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．　Ｓｔｒｏｋｅ，１９８９，２Ｏ（１）：８４　９１．　达，抑制细胞凋亡，对脑缺血再灌注损伤具有保护作　［１３］　Ｇａｏ　Ｇ，Ｐｅｉ　Ｗ，Ｇｅ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ｏｆ　Ｂｃｌ—ＸＬ　ｆｕｓｉｏｎ　用，这为充实相关资料，有效治疗缺血性脑病提供了又　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ＴＡＴ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ　ｄｏｍａｉｎ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　一实验依据，至于川芎嗪上调Ｂｃｌ一２的机制，还有待于　ａｇａｉｎｓｔ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｎａｌ　ａｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓ—　进一步的研究。　ｃｉ，２００２，２２（１３）：５４２３—５４３１．　［１４］　吕少平，孙锋，王春霞．ＪＩＩ芎嗪对脑缺血再灌注时细胞凋亡的影响　参考文献　＿ｌＪ］．河北医学，２０００，６（８）：６７３—６７６．　＇ｌ１５］　王春霞，包仕尧，刘春风，等．尼莫通和川芎嗪对脑缺血一再灌注时　颜建云，吴伟康．脑缺血损伤的分子机制研究进展［Ｊ］．中国病理　ｃ＿ｌｏｓ和ｂｃｌ一２蛋白表达的影响口］．中国危重病急救医学，１９９９，１１　生理杂志，２００３，１９（３）：４２３—４２６．　（１０）：６０９—６１ｌ＿　［２］　杨佳丹，董志．脑缺血再灌注损伤的病因学研究进展［Ｊ］．中国康　［１６］　任守忠，石志勇，王幼奇，等．脑梗饮对局灶性脑缺血再灌注损伤　复医学杂志，２００６，２１（１０）：９３５—９３７．　保护作用的实验研究［Ｊ］．时珍国医国药，２００７，１８（６）：１３９９　１４０２．　［３］　孙成栋，刘黎清，卢岩，等．大鼠局灶性脑缺血实验指标及评价　［Ｊ］．山东生物医学工程，２００２，２１（３）：５８—６１．　（编辑：王栋）　（上－ｔｇ　６４页）　［６］　吴静，张素华，倪银星．２型糖尿病大鼠肝脏肝细胞核因子（ＨＮＦ）一　参考文献　４＆、ＨＮＦ－１＆基因表达研究［Ｊ］．中华内分泌代谢杂志，２００５，２１　［１］Ｗｅｓｔ　Ｎ　Ｅ，Ｒｕｙｇｒｏｋ　Ｐ　Ｎ，Ｄｉｓｃｏ　Ｃ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｎｄ　ａｎｇｉｏ—　（４）：３２５—３２６．　ｇｒａｐｈｉｃ　ｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓ　ｏｆ　ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ　ａｆｔｅｒ　ｓｔｅｎｔ　ｄｅｐｌｏｙｍｅｎｔ　ｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　［７］　Ｋｒｕｇｅｒ　Ａ　Ｌ，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ　Ｓ，Ｔｕｒｋｓｅｖｅｎ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｄ－４Ｆ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｈｅｍｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００４，１０９（７）：８６７—８７３．　ｏｘｙｇｅｎａｓｅ－１　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ｄｅｃｒｅａｓｅｓ　ｅｎ—　［２］Ｓｈｅｕ　Ｊ　Ｊ，Ｃｈａｎｇ　Ｌ　Ｔ，Ｃｈｉａｎｇ　Ｃ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｉｍｐａｃｔ　ｏｆ　ｄｉａｂｅｔｅｓ　ｏｎ　ｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｓｌｏｕｇｈｉｎｇ，ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｅｓ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｒａｔ　ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｎｅｘｉｎ　４３　ｇａｐ　ｊｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ：　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｄｉａｂｅｔｅｓ　ＥＪ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００５，１１１（２３）：３１２６　３１３４．　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｈｅａｒｔ　Ｊ，２００７，４８　［８］　梁自文，张忠辉，张平，等．糖尿病性心肌病大鼠的心肌结构、代谢　（２）：２３３　２４５．　和功能的变化［Ｊ］．第三军医大学学报，１９９６，１８（８）：３０６—３０８．　［３］Ｂｏｌｌａｎｏ　Ｅ，Ｏｍｅｒｏｖｉｃ　Ｅ，Ｓｖｅｎｓｓｏｎ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｃａｒｄｉａｃ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ　［９］　Ｙｏｏｎ　Ｙ　Ｓ，Ｕｃｈｉｄａ　Ｓ，Ｍａｓｕｏ　Ｏ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｔｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｄｉｓｔｕｒｂｅｄ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｅｎｅｒｇｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｓ　ａ　ｓｅｍｉ—　ｗｉｔｈ　ｃａｒｄｉａｃ　ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔｓ＿Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃａｒｄｉｏｌ，２００６，　ｎａｌ　ｅｖｅｎｔ　ｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ：ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ　１１４（２）：１９５—２Ｏ１．　ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ　ａｎｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｅａｒｄｉａｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｅａｒｄｉｏｍｙ—　［４］ＹｕｅＴＬ，ＢａｏＷ，Ｇｕ　Ｊ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｎ　ｚｕｃｋ—　ｏｐａｔｈｙ　ａｆｔｅｒ　ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｌｏｃａｌ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｅｒ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｆａｔｔｙ　ｒａｔｓ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｄ　ｃａｒｄｉａｃ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｆａｃｔｏｒ　Ｉ－Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００５，１１１（１６）：２０７３—２０８５．　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍｙｏ—　［１Ｏ］　丛丽，李益明，俞茂华，等．黄芪多糖对糖尿病心肌病变仓鼠心肌　ｃａｒｄｉａｌ　ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００５，５４（２）：５５４　５６２．　胶原表达的影ｕ￣ＥＪ］．中国临床康复杂志，２００６，１０（７）：６４—６６．　［５］周迎生，高妍，李斌，等．高脂喂养联合链脲佐菌素注射的糖尿病　（编辑：冀凯宏）　大鼠模型特征［Ｊ］．中国实验动物学报，２００５，１３（３）：１５４　１５８．　一８５～