高效氯氰菊酯的微核试验及精子畸形试验

一：实验材料

1 .实验动物 选择健康且符合相关要求的小鼠 105 只，体重 25～30 g，由贵州医科大学合作实验动物技术有限公司提供。

温度：20～25 ℃，湿度：40～70 %RH，每日光照 12 h（7∶00~19∶00）。饲料贵州医科大学生物科技有限公司提供。

2 .主要仪器与试剂 赛多利斯电子天平（BS224S），梅特勒电子天平（PB8100 -S），Olympus 生物显微镜（BX51T-32E01）。以及注射器、量杯、玻璃皿、载玻片，眼科剪、擦镜纸、SPSS 11.5 软件等其他相关实验课配套仪器。 试剂主要有高效氯氟氰菊酯（纯度 98.0%）甲醇、环磷酰胺、生理盐水、玉米油，Giemsa 液，伊红染色液等。

二：实验方法

1. 实验动物分组与剂量选择

根据 GB 2763-2012《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中规定的每日允许摄入量（ADI），高效氯氟氰菊酯每日允许摄入量为0.02 mg/kg·BW。

将 只健60只健康小鼠随机分为 3组，每组20只，雌10只（5只进行小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验5只进行小鼠精子畸形试验），雄10只（5只进行小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，5只进行小鼠精子畸形试验）。

3组分别为溶剂（玉米油）对照组，40 mg/kg·BW 环磷酰胺阳性对照组， 0.02 mg/kg·BW 高效氯氟氰菊酯染毒组。

2．小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

将受试农药用玉米油配至所需浓度，充分混匀。实验小鼠每天同一时间经口染毒 1 次，连续 4 天。各组小鼠灌胃量均为 0.1 ml/10 g·BW，溶剂对照组经口给予等量玉米油，阳性对照组于第 3、4 天经腹腔注射给予环磷酰胺（40 mg/kg·BW），给药量为 0.1 ml/10 g·BW。 染毒结束次日，处死小鼠，取出小鼠胸骨骨髓于载玻片上，以 1 滴小牛血清混匀后推片，甲醇固定，Giemsa 染色。采用双盲法，每只小鼠在油镜下观察计数 1 000 个嗜多染红细胞（polychromatic erythrocyte, PCE），记录有微核的 PCE 数，计算微核率 [微核率＝〔含微核的 PCE数/嗜多染红细胞数〕×1 000‰]。并且计数 200 个红细胞（red blood cell, RBC）中 PCE 与正染红细胞（normochro－matic erythrocyte, NCE）的比值。

3．小鼠精子畸形试验 受试农药配制方法同上。

实验小鼠每天同一时间经口染毒 1 次，连续 5 d。各组小鼠灌胃量均为 0.1 ml/10 g·BW。 溶剂对照组经口给予等量玉米油。阳性对照组连续5天经腹腔注射给予环磷酰胺（40 mg/kg·BW），给药量为0.1 ml/10 g·BW。于首日染毒后第 35 天处死小鼠，取出两侧附睾置于盛有约 2.0 ml 生理盐水的玻璃平皿中，用眼科剪纵向剪 1～2 刀，静置 3～5 min，轻轻摇动。用4 层擦镜纸滤除组织碎片，取滤液涂片，室温干燥，甲醇固定，伊红染色。精子畸形主要表现在头部，其次为尾部。畸形类型可分为无钩，香蕉形，胖头，无定形，尾折叠，双头，双尾等。每只小鼠用高倍镜计数 1 000 个结构完整精子，计算精子畸形率[畸形率＝〔总畸形数/1 000〕×100%]。

郭爱国

三：统计学分析 实验数据以表示。采用 SPSS 11.5 软件进行统计学分析。多组间比较采用方差齐性检验和单因素方差分析（One-Way ANOVA）。进一步进行组间两两比较，若方差齐时，采用 SNK 检验（Student-NewmanKeuls 法）；若方差不齐时，采用 Games-Howell 检验；率间比较采用 χ2 检验。以 P<0.05 为差异有统计学意义。