纳豆激酶对动脉粥样硬化模型大鼠血脂及血液流变学影响

中国实验诊断学２０１３年９月　第ｌ７卷第９期　１５６７一　文章编号：１００７—４２８７（２０１３）０９—１５６７—０３　纳豆激酶对动脉粥样硬化模型大鼠　血脂及血液流变学影响　孟繁宇　，薛　菲　，施　慧。　（１．吉林省人民医院心血管内科，吉林长春１３００２１；２．吉林省人民医院神经内科；３．吉林大学中日联谊医院）　摘要：目的　研究纳豆激酶对动脉粥样硬化模型大鼠血脂及血液流变学的影响。方法　选取健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠５Ｏ　只，随机均分为５组：正常对照组、动脉粥样硬化模型组、辛伐他汀组、低剂量ＮＫ组、高剂量ＮＫ组。高脂饲料复制动　脉粥样硬化大鼠模型，药物组每天灌胃给药１次，连续４周。正常组和模型组每天等体积蒸馏水灌胃，辛伐他汀组按　４　ｍｇ／ｋｇ体重，纳豆激酶低、高组（５６　ＦＵ、２８０　ＦＵ／ｋｇ体重），每天灌胃给药１次，自由进食与进水，连续４周。５组动　物分别测定：总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬ—Ｃ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ　ｃ）、全血低切、中　切及高切黏度，血浆黏度，血浆纤维蛋白原浓度（Ｆｉｂ）；红细胞压积（Ｈｃｔ）；红细胞电泳时间（ＲＣＥＴ）；测血沉（ＥＳＲ）。结　果纳豆激酶可显著降低动脉硬化模型大鼠血脂水平，使全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、血沉、红细胞电泳时间、血　浆纤维蛋白原浓度都显著降低。结论纳豆激酶可改善动脉粥样硬化模型大鼠血脂水平和血液流变学，对动脉粥样　硬化具有防治作用。　关键词：纳豆激酶；动脉硬化模型大鼠；血脂；血液流变学　中图分类号：Ｒ５４３．５　文献标识码：Ａ　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｎａｔｔｏ　ｋｉｎａｓｅ　ｏｎ　ｂｌｏｏｄ　ｌｉｐｉｄ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ｒｈｅｏｌｏｇｙ　ｉｎ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｒａｔｓ　ＭＥＮＧ　Ｆａｎ　ｙｕ，ＸＵＥ　Ｆｅｉ，ＳＨＩ　Ｈｕｉ．（Ｔｈｅ　Ｐｅｏｐｌｅ３　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００２１，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｎａｔｔｏ　ｋｉｎａｓｅ　ｔｏ　ａｔｈｅｒ０ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｒａｔｓ　ｂｌｏｏｄ　ｌｉｐｉｄ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ｒｈｅｏｌｏ—　ｇＹ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｅｌｅｃｔ　５０　ｈｅａｌｔｈｙ　Ｗｉｓｔａｒ　ｒａｔｓ，ｒａｎｄｏｍ　ｉｓ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　５　ｇｒｏｕｐｓ：ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ，ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ　ｇｒｏｕｐ，ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＮＫ　ｇｒｏｕｐ，ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＮＫ．Ｈｉｇｈ　ｆａｔ　ｆｅｅｄｓｔｕｆｆ　ｔｏ　ｃｏｐｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ｄｒｕｇ　ｇｒｏｕｐ　ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ　ｔｏ　１　ｔｉｍｅｓ　ａ　ｄａｙ，ｆｏｒ　ｆｏｕｒ　ｗｅｅｋｓ．Ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｅｖｅｒｙ　ｄａｙ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｗａｔｅｒ　ｔｏ　ｆｉｌｌ　ｔｈｅ　ｓｔｏｍａｃｈ，ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ　ｇｒｏｕｐ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　４　ｍｇ／ｋｇ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ，ｎａｔｔｏ　ｋｉｎａｓｅ　（１ｏｗ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｇｒｏｕｐｓ（５４　ｆｕ，ｆｕ　２８０／ｋｇ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ），ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ　ｔｏ　１　ｔｉｍｅｓ　ａ　ｄａｙ，ｆｒｅｅ　ｆｏｏｄ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ，ｆｏｒ　ｆｏｕｒ　ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅ　ｆｉｖｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｏｆ　ａｎｉｍａｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ：ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ（ＴＣ），ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ（ＴＧ），ｌｏｗ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ｌｉｐｏ—　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＤＬ—Ｃ），ｈｉｇｈ－ｄｅｎｓｉｔｙ　ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ（ＨＤＩ　一Ｃ），ｗｈｏｌｅ　ｂｌｏｏｄ　ｌｏｗ　ｃｕｔｔｉｎｇ，ｔｈｅ　ｃｕｔｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｓｈｅａｒ　ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ，ｐｌａｓｍａ　ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ，ｂｌｏｏｄ　ｐｌａｓｍａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ（Ｆｉｂ）；Ｒｅｄ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌｓ　ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ（Ｈｃｔ）；Ｔｈｅ　ｅ—　ｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ　ｅ１ｅｃｔｒｏｐｈ。ｒｅｓｉｓ　ｔｉｍｅ（ＲＣＥＴ）；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ（ＥＳＲ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｎａｔｔｏ　ｋｉｎａｓｅ　ｃａｎ　ｓｉｇ—　ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅ　ａｔｈｅｒｏｓｃ１ｅｒｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｒａｔｓ　ｂｌｏｏｄ　ｌｉｐｉｄ　ｌｅｖｅｌｓ，ｍａｋｅ　ｔｈｅ　ｗｈｏｌｅ　ｂｌｏｏｄ　ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ。ｐｌａｓｍａ　ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ．ｅｒｙｔｈ—　ｒｏｃｙｔｅ　ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ，ｂｌｏｏｄ　ｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｔｉｍｅ，ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｓｍａ　ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇ—　ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｎａｔｔｏ　ｋｉｎａｓｅ　ｃａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ａｔｈｅｒｏｓｃ１ｅｒｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｒａｔｓ　ｂｌｏｏｄ　ｌｉｐｉｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ｒｈｅｏｌｏ—　ｇＹ，ｈａｖｅ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｕｒｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｎａｔｔｏ　ｋｉｎａｓｅ；ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｉｎ　ｒａｔｓ；ｂｌｏｏｄ　ｌｉｐｉｄ；ｂｌｏｏｄ　ｒｈｅｏｌｏｇｙ　（Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｄｉａｇｎ，２０１３，１７：１５６７）　纳豆激酶（ｎａｔｔｏ　ｋｉｎａｓｅ，ＮＫ）是一种枯草杆　１．１实验动物　菌蛋白激酶，是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌　Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体重１８０—２００　ｇ，雌雄兼用，由白求　产生的一种丝氨酸蛋白酶。多项研究证实　］，ＮＫ　恩医学部实验动物中心供给，合格证号：２０１０００３。　具有降低血脂、溶解血栓、改善血液循环、软化和增　１．２药品与试剂　加血管弹性等作用。本文通过观察不同剂量ＮＫ对　１．２．１纳豆激酶样品活力３５０　ｍｇ一５　０００　ＦＵ，浙江　动脉粥样硬化模型大鼠血脂水平、血液流变学的影　中奇生物药业股份有限公司。　响，评价其抗动脉粥样硬化作用。　１．２．２辛伐他汀片（舒降之）生产企业：杭州默沙　１材料与方法　东公司，批号：２０１２０６１６。　ｌ５６８　１．３主要仪器　１．４．２给药正常对照组、模型组，每天等体积蒸　１．３．１　ＬＢＹ—Ｎ６Ａ旋转式血液黏度计　北京普利　馏水灌胃１次；辛伐他汀组（４　ｍｇ／ｋｇ体重），纳豆激　生医疗器械厂。　酶低、高组（５６　ＦＵ、２８０　ＦＵ／ｋｇ体重），每天灌胃给　１．３．２　ｓＤｚ—Ｉ型细胞电泳自动计时器无锡电子　药１次，连续４周。　仪器二厂。　１．４．３观测指标　第２８　ｄ给药后，禁食不禁水，　１．３．３　７０２０型全自动生化分析仪日本日立公司。　次日清晨以戊巴比妥钠３０　ｍｇ／ｋｇ腹腔注射麻醉，　１．４实验方法　腹主动脉取血，取血５　ｍｌ，分离血清，用全自动生化　１．４．１　动物分组及模型建立　取Ｗｉｓｔａｒ大鼠５０　分析仪测定血脂各项指标　，包括ＴＧ、ＴＣ、Ｉ　ＤＩ　一ｃ、　只，随机分为５组：正常组１０只，喂以基础饲料。模　ＨＤＩ，Ｃ。以ＬＢＹ—Ｎ６Ａ旋转式血液黏度计，分别测　型组、辛伐他汀组、纳豆激酶低、高剂量组各ｌＯ只，　定全血低切、中切及高切黏度，血浆黏度；通过ｓＤｚ—Ｉ　按文献　方法建立动脉粥样硬化模型，每只大鼠每　型细胞电泳自动计时器测定红细胞电泳时问　天给予腹腔注射ＶＤ３　２５万Ｕ／ｋｇ连续３天，给予高　（ＲｃＥＴ）；测血沉（ＥｓＲ）；测定血浆纤维蛋白原浓度　脂饲料灌胃（高脂饲料配方：基础饲料，３．５　胆固　（Ｆｉｂ）；测定红细胞压积（Ｈｃｔ）。　醇，ｌ０　猪油，０．２　丙基硫氧嘧啶、０．５　胆酸钠，　２　实验结果　５　白糖）。喂养４周。所有实验动物均为单笼饲　纳豆激酶对动脉硬化模型大鼠血脂、血液流变学，　养，自由饮水。　Ｆｉｂ、ＥＳＲ、Ｈｃｔ及红细胞电泳时间的影响，见表１—３。　表ｌ　纳豆激酶对动脉硬化模型大鼠血脂的影响（，ｌ＝１０，　土Ｓ）　与正常对照组比较‘”Ｐ％０．０５，‘　Ｐ％０．０１；与模型组比较‘。　Ｐ＜Ｏ．０５，“　Ｐ＜Ｏ．０１　表２纳豆激酶对动脉硬化模型大鼠全血黏度、血浆黏度的影响（ｎ＝１０，Ｘ－４－ｓ）　与正常对照组比较‘”Ｐ％０．０５，　”Ｐ％０．０１；与模型组比较　。　Ｐ＜Ｏ．０５，‘”Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ　表３纳豆激酶对动脉硬化模型大鼠纤维蛋白原浓度、血沉、红细胞压积、红细胞电泳时间的影响（，ｌ＝１０，　士ｓ）　与正常对照组比较…１　Ｐ％０．０５，‘　Ｐ％０．Ｏ１；与模型组比较‘。　Ｐ＜Ｏ．０５，‘　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１　３讨论　中附着的胆固醇、三酰甘油的含量较正常增加，从而　随着生活水平逐年增高，我国人群中高脂血症　使红细胞硬化趋势增加，红细胞的变形能力受到了　患病率明显升高。血脂增高导致血液黏度增高，血　影响，血流的黏稠性因缓慢的红细胞带氧及释放速　管内皮细胞损伤，泡沫细胞形成，平滑肌细胞由中层　度而增加，细胞膜流动性因而下降，血液流变学指标　向内膜移行、增殖，导致动脉粥样硬化斑块形成。同　出现明显异常。同时血浆纤维蛋白原浓度增高，易　时研究指出［　高脂血症患者血液中由于在红细胞膜　形成血．栓。　中国实验诊断学２０１３年９月　第ｉ７卷第９期　纳豆激酶最早由Ｈ本学者从纳豆中分离出的丝　氨酸蛋白酶，是目前发现口服纤溶作用最强的纤溶　生化药物杂志，２００４，２５（５）：２７６　２７８．　Ｅ３］ＬＩＵ　ＪＸ，ＳＨＡＮＧ　ＸＨ，ＦＵ　ＪＨ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｓｔａｐｈ　ｙｌｏｋｉｎａｓｅ　ｏｎ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍｉｎｉａ—　蛋白酶。本实验结果从不同角度证明，纳豆激酶可　使动脉粥样硬化大鼠的ＨＤＬ水平升高，ＴＧ，ＴＣ，　ｔｕｒｅ　ｓｗｉｎｅ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｓｉｎ，２００２，２３（６）：５０９．　［４］段智变，江汉湖，张书霞等．纳豆激酶粗制液对家兔溶血栓作用及　其机制研究ＥＪ３．营养学报，２００３．２５（１）：４６．　［５］赵娟，李相军，孙波．维生素Ｄ３联合高脂饲料建立大鼠动脉　ＬＤＬ水平明显降低。使血浆纤维蛋白原浓度降低，　从而使动脉粥样硬化大鼠的血液流变学指标得以改　善。提示，纳豆激酶可改善血黏度及血液流变性、降　粥样硬化模型［Ｊ］．实用医学杂志，２００９，２５（２１）：３５６９．　低血脂、防止动脉管壁及细胞内的脂质沉积，阻断动　Ｅ６］关辉，张炜平．复方丹参滴丸对实验性高血脂大鼠血清中ＴＣ、　ＴＧ、ＬＤＬ的影响［Ｊ］．医学论坛，２００７，２：６．　脉粥样硬化及血栓形成的中心环节，预防心脑血管　ｆ７］Ｌｉ　Ｍ，Ｚｈａｎｇ　ｚ，Ｄｏｎａｌｄ　Ｉ　，ｅｔ　ａ１．Ｃｕｒｃｕｍｉｎ，ａ　ｄｉｅｔａｒｙ　ｔｏｍｐｏｎｅｎｔ．　疾病的发生和发展。　ｈａｓ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ．ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉ０ｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　参考文献：　ｂｙ　ｄｏｗｎｒｅｇｎｌａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ＭＤＭ２　ｏｎｃｏｇｅｎｅ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ＰＩ３Ｋ／　Ｅｌｉ袁淑云．纳豆激酶粗提液对小鼠实验性高脂血症的降脂作用［Ｊ］．　ｍＴＯＲ／ＥＴＳ２　ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００７．６７（５）：１９８８．　现代医院，２００５，５（５）：１０．　（收稿日期：２０１２—０４—１４）　ｒ２］王俊菊，李培锋，关　红．纳豆激酶抗凝血作用的研究ｒｌＩ＿．中国　文章编号：１００７—４２８７（２０１３）０９—１５６９—０２　干扰ＤＮＡ—ＰＫ和Ｃ　Ｈ　Ｋ１表达对卵巢癌细胞　辐射凋亡影响的研究　廖琪　，崔满华。　（１．大庆龙南医院，黑龙江大庆１６３４５３；２．吉林大学第二医院妇产科，吉林长春１３００４１）　卵巢癌是威胁女性健康最常见的恶性肿瘤之　测序鉴定，转染Ｓｋｏｖ３细胞筛选出有效ｓｈＲＮＡ载　＿ｌ】］一，由于发病隐匿，早期症状不明显而致诊断困　体，其靶向序歹０分别是ＧＧＡＡＴＡＧＴＡＣＴＴＡｃＴＧ—　难，发现时多已有广泛的盆腹腔转移。其病死率最　ＣＡＡＴＧ、ＧＣＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＴＣＴＣＡＡＡＧＣ。　将　高，且发病率呈逐年上升的趋势。本研究以ｓｈＲＮＡ　有效的ｓｈＲＮＡ载体以脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｍｉｎｅｓ　２０００　干扰ＤＮＡ—ＰＫ和ＣＨＫ１在卵巢癌Ｓｋｏｖ３细胞中的　介导转染细胞，质粒、脂质体的比例为２　ｇ：５　ｌ。　表达，观察给予辐射后细胞凋亡变化情况，探讨相关　１．３照射条件及流式检测　辐射损伤机制。　转染ｓｈＲＮＡ后２０　ｈ，Ｓｋｏｖ３细胞接受Ｘ一射线　１材料与方法　照射。照射采用飞利浦深部ｘ一线治疗机，电压２００　１．１　细胞培养　ｋＶ，电流１０　ｍＡ，过滤器铜０．５　ｍｍ，铝１．０　ｍｍ；剂　Ｓｋｏｖ３细胞用含１Ｏ　小牛血清的ＤＭＥＭ培养　量率０．２８７Ｇｙ／ｍｉｎ，总量为２　Ｇｙ。Ｘ一射线照射前用　基培养，青霉素１００　ｕ／ｍｌ，链霉素１００　Ｆｇ／ｍｌ，置于　ＰＢＳ洗细胞，加２　ｍｌ　ＰＢＳ后进行照射；照射后，立即　５　ＣＯ　培养箱中。转染前一天，以３×１０　个细　更换新鲜的完全培养基，即转染后２４　ｈ或４８　ｈ收　胞／孔接种于６孑Ｌ培养板。　集细胞，ＰＢＳ洗３次，每次离心８００　ｒｐｍ，５　ｍｉｎ。加　１．２载体构建和筛选　ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ染色１０　ｍｉｎ，ＰＢＳ洗３次。应用ＢＤ　根据ＤＮＡ—ＰＫ和ＣＨＫ１基因构建４个ｓｈＲＮＡ　ＦＡｃｓｃａ１ｉｂｕｒ流式细胞仪检测、分析细胞凋亡，应用　载体，并以无关序列ＧＴＴｃＴｃＣＧＡＡＣＧＴＧＴ—　Ｍｏｄｉｆｉｔ软件进行统计。　ＣＡＣＧＴ构建对照载体ｓｈＮＣ。经限制性内切酶和　１．４统计学方法　应用ＳＰＳＳ１４软件进行统计分析，平均值±标　＊通讯作者　准差（ｉ－－－＿　）的比较采用ｔ检验，以Ｐ＜０．０５为有统　Ｆ