第2章 植物组织培养设备及其使用

［目的要求］

认识各类植物组织培养设备，掌握其使用方法 ［知识模块］

设备使用 ［教学重点］

各类植物组织培养设备 ［教学难点］

灭菌设备的使用［教学方法］

借助组织培养中心现有设备，讲授边操作

一、植物组织培养室基本设备（一）灭菌设备工作原理：沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在121℃。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。1．便携式灭菌器（1）构造便携式灭菌器主要由锅体、内胆、电热管、帘子、锅盖、气压表、放气阀、安全阀、紧定丝母等零部件构成。（2）使用①打开锅盖，加入清水，至接近帘子的程度，然后装入培养物，盖上盖，对角线拧紧丝母；②接通电源，使灭菌器开始工作。当压力表指针升到阀放出冷气，直至回零，关闭放气阀，使灭菌器继续工作。③当压力达到维持一定灭菌时间，不同消毒物品所需时间不同，一般灭菌④放气取物。当灭菌到所需时间时，断开电源，让压力自然下降。当达到0.05MPa时可放出蒸气，至零时，打开锅取出物品。2．立式灭菌器（l）构造：水碗、进水阀、水位线标志、排水阀、夹层压力表等零部件构成。（2）使用①加水：打开进水阀，向水碗注入清水直至水位到标志线为止，然后关闭进水阀；

②移开上盖装入物品；顺时针方向旋动丝杠扳手使上盖离开上口后，推动横

可先利用多媒体进行讲授再现场操作，

：用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。

0.10MPa时，开始计算时间，

气压表、也可直接在现场边

0.1MPa的压力下，锅内温度达

0.05MPa时，打开放气

0.10~0.15的范围，20～30min。

放气阀、丝杠扳手、紧定丝母、

在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢，压力不断上升，使水的

使压力表保持立式灭菌器主要由总阀、 梁移开上盖，装入灭菌物品，注意留有空隙以利消毒彻底；

③关闭上盖；逆时针转动丝杠扳手直至紧到不能转为止； ④以下过程同便携式灭菌器。 注意事项

①对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间；

②对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌③高压灭菌前后的培养基，其可适当调高0.2(二)接种设备：使用前，将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启，灭菌杀菌按钮，打开照明按钮，即可在上面进行操作。(三)培养设备：1.带日光灯的培养架2.恒温箱：又称培养箱，可用于原生质体和酶制剂的保温，也可用于组织培养材料的保存及暗培养。3.摇床与转床：在液体培养基中，可改善培养基中的培养材料的通气状况。如从疏松的愈伤组织中获得单个细胞。但注意要设定适合的温度及转速。(四)训化设备及其它辅助设备1.培养架：用于试管苗的训化。2.空调机：用于接种室和培养室温度的控制。3.除湿机：使培养室的湿度保持在定的范围内。因为温度过高易滋长杂菌，过低培养皿内的培养基会失水变干，从而影响外植体的正常生长。4.烘箱：用于干燥洗净后的玻璃器皿，以测定干物质。5.冰箱：用于在常温下易变性或失效的试剂和母液的储藏，细胞组织和试验材料的冷冻保藏，以及某些材料的预处理。6.蒸馏水发生器构造：蒸馏水器主要由冷凝器、回水管、进水阀、蒸馏水出口管、水位表、蒸发锅、水碗、放水阀、电源指示灯等零部件构成。原理：蒸发锅加热后向上产生水蒸气，滴从蒸馏水出口管流出。使用 ①加水：打开水源阀，使自来水通过冷凝器回水管进入蒸发锅，直至水位达水位表可见处；20-30min；

pH0.3个单位。

(用于培养材料的消毒及接种，主要用于接种后材料的培养。

还可用

0.2-0.3单位。因此，调

80℃的温度烘干组织培养植物材料

PH值时，)

15min后，关闭

值下降－无菌超净工作台

：是实验室必备的仪器。

当水蒸气遇到凉的冷凝器便凝结成水②加热：接通电源，加热到有热气从水碗冒出时，重新开启水源阀，并且调到水流合适为止，约离水碗上边缘1cm；

③关阀：当蒸馏水烧完时，先关闭水源再关闭电源。 注意：通电时一定要有水通过。

7.天平和显微镜：天平包括分析天平，电子天平，药物天平等，用于制备母液时培养基组成成分的称取。如一些需要量少的激素和微生素类物质，天平的精确度要到0.0001g，这就要求精确度更高的分析天平。显微镜包括解剖镜，生物显微镜，倒置显微镜等。如茎尖的分离则需要解借助解剖镜。

岛津进口电子分析天平的构造及使用 构造：

岛津进口电子分析天平主要由：天平机体、称重舱、天平盘、键板（包括4个键）、液晶显示屏等构成。

使用：

①调平 天平放稳后，转动脚螺旋，使水平气泡在水平指示的红环内； ②自检 在空载下，天平内部进行自检，显示屏上相继显示CHE3→0，CAL4→0，CAL，END，CAL，OFF；

③全显示 按“ON／OFF”键，液晶屏进入全显示态；

④这时再按“ON／OFF’键，液晶屏进入预热状态，有绿色指示灯显示。平时可放置在这个状态。当再启动“ON／OFF”键，又进入全显示状态；

⑤清零按Tare键，液晶屏显示“0”进入待测状态； ⑥去皮重清零 将硫酸纸放在天平盘上，再按Tare键清零，液晶屏再显示“0”状态；

⑦称样品 将药品放在硫酸纸上，至液晶屏左侧稳定标志“→”出现，读数即为样品重量。小数点前为克单位。如1．234即为1．234克。

注意

①本天平为精密仪器。使用时手要洁净干燥。使用的样品、容器及硫酸纸一定要洁净干燥，切勿将药品直接放到天平盘上；

②不要把水，金属弄到天平盘上； ③天平严禁靠近磁性物体；

④天平使用时，不要撞击天平所在桌面，要关上附近的窗户，以防气流影响称重。

⑤无平必须进入预热态方可断电。

8.酸度计：用于校正培养基和酶制剂的PH。

使用

①用标准pH值溶液标定pH值：取随机器带来的药品袋按要求配成已知pH值溶液，将连好的甘汞电极头插入溶液中，旋转定位钮，使荧屏显示值和已知pH值相同，然后固定住定位纽；

②测定待测液：将甘汞电极头用蒸馏水洗净。插入待测液中，液晶屏的读数即为溶液pH值。若溶液有一定温度，应取温度计测量出温度，旋转pH值计的温度调节钮，使之与测量液体温度相当，再读数即可。