辣椒子叶不定芽的诱导与伸长研究

黑龙江农业科学２０１３（１０）：１２～１５　Ｈｅｉｌｏｎｇｊ　ｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　强　辣椒子叶不定芽的诱导与伸长研究　谢礼洋，匡华琴，赖钟雄，刘生财　（福建农林大学园艺植物生物工程研究所，福建福州３５０００２）　摘要：为了进一步研究辣椒子叶再生体系的影响因素，以辣椒王种子为试材，诱导无菌苗，取子叶作为外植　体，探讨了不同浓度６－ＢＡ对辣椒子叶诱导不定芽的影响，并进行了不同浓度ＧＡ　与６一ＢＡ组合对不定芽伸长　效果的研究。结果表明：辣椒子叶在ＭＢ５＋０．８　ｍｇ・Ｌ　ＩＡＡ＋８．０　ｍｇ・Ｌ　６－ＢＡ＋４．０　ｍｇ・Ｌ　ＡｇＮＯ　培养基　上诱导不定芽效果最好；ＭＢ５＋０．８　ｍｇ・Ｌ。ＩＡＡ＋５．０　ｍｇ・Ｌ。６－ＢＡ＋２．０　ｍｇ・Ｌ～ＧＡ３＋４．０　ｍｇ・Ｌ　ＡｇＮＯ３培　养基有利于不定芽的伸长。　关键词：辣椒；子叶；不定芽诱导；伸长　中图分类号：￥６４１．３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００２—２７６７（２０１３）１０—００１２－０４　辣椒（Ｃａｐｓｉｃｕｍ　Ｃｌｌｌ＇ｎｕｌＡｍ　Ｌ．）属于一年生或　多年生的重要蔬菜作物，现在是我国五大蔬菜作　物之一，具有重要的营养价值和药用价值［１］。许　多研究表明，辣椒幼苗的子叶再生能力较强，在组　消毒６　ｍｉｎ，无菌水反复冲洗５次，无菌滤纸吸干　水分待用。　将已消毒的种子接种于附加３０　ｇ・Ｌ－　蔗糖和　６　ｇ・Ｌ。琼脂的ＭＳ培养基（ｐＨ５．８）中，每瓶接１５　粒，接４Ｏ瓶，进行无菌萌发，获得长势一致的　幼苗。　１．２．２　不同浓度６一ＢＡ对辣椒子叶诱导不定芽　织培养过程中常作为外植体进行诱导分化的研　究　］。关于辣椒子叶离体培养技术国内外也有　研究报道＿７。　ｌ，但是由于辣椒组织培养具有很强　的基因型特异性，从而导致研究结果有很大差异，　的影响　将苗龄１６　ｄ的子叶接种于诱导不定芽　的培养基ＭＢ５＋０．８　ｍｇ・Ｌ　ＩＡＡ＋ＡｇＮＯ。　４．０　ｍｇ・Ｌ～，并附加不同浓度６一ＢＡ（２。０、４．０、　６．０、８．０、１０．０和１２．０　ｍｇ・Ｌ　）中进行诱导，比较　限制了辣椒快繁和基因转化工作。为了进一步研　究辣椒子叶再生体系的影响因素，以辣椒王种子　为材料诱导无菌苗，通过研究不同浓度６一ＢＡ对　辣椒子叶诱导不定芽的影响，进行了不同浓度　ＧＡ。与６一ＢＡ组合对不定芽伸长效果的研究，为　今后辣椒离体培养及遗传转化的研究奠定基础。　不同浓度６一ＢＡ对辣椒子叶诱导不定芽的影响。　在培养３０　ｄ时观察统计不定芽诱导率及生长状　况。每种处理接种３０个外植体，３次重复。　１．２．３不同浓度Ｇ　及６一ＢＡ对辣椒不定芽伸长　１材料与方法　１．１　材料　的影响　以子叶诱导出的不定芽，接种于伸长培养　基ＭＢ５＋０．８　ｍｇ・Ｌ　ＩＡＡ＋ＡｇＮＯａ　４．０　ｍｇ・Ｌ　，并　供试材料为四川Ｉ省产的辣椒品种辣椒王　种子。　１．２　方法　附加不同浓度的ＧＡ３（２．０、３．０、４．０　ｍｇ・Ｌ－　）和　６一ＢＡ（５．０、８．０　ｍｇ・Ｌ。），比较不同浓度ＧＡ。和　６一ＢＡ对辣椒不定芽伸长的影响。在培养２０　ｄ观　察不定芽伸长状况。每种处理接种３０个外植体，　３次重复。　１．２．１　无菌苗的获得　选取饱满的辣椒种子用　滤纸包裹，先用５０～５５℃的水浸泡１０～１５　ｍｉｎ，　再用流水冲洗２０　ｍｉｎ，然后在无菌条件下，用　７５　的酒精消毒６０　Ｓ，再用０．１　９／６的ＨｇＣ１。表面　所有处理的培养基中均附加３０　ｇ・Ｌ　蔗糖及　６　ｇ・Ｌ　琼脂，ｐＨ　５．８。　１．２．４培养条件　将培养材料放在光照强度为　收稿日期：２０１３－０４—０８　基金项目：福建农林大学本科教学改革资助项目（Ｎｏ．１１１４　１２０９９）　１　５００　Ｉｘ，光照时间１２　ｈ・　，培养温度为（２５±　１）℃的培养室中培养。　１．２．５　数据处理与分析　试验数据采用Ｅｘｃｅｌ　第一作者简介：谢礼洋（１９９０一），女，福建省南平市人，学士，　从事园艺植物生物技术研究。Ｅ－ｍａｉｌ：２６０７２１５６０９＠　ｑｑ．ｅｏｍ　ｏ　通讯作者：刘生财（１９８０一），男，黑龙江省密山市人，博士，讲　师，从事园艺植物生物技术与遗传资源研究　】２　和ＤＰＳ等软件进行处理与分析。不定芽诱导　率（％）一诱导出不定芽的子叶数／接种的子叶　１０期　谢礼洋等：辣椒子叶不定芽诱导与伸长的研究　罐　度在６．０　ｍｇ・Ｌ。以上时开始出现了褐变，说明高　浓度的６一ＢＡ是导致外植出现褐变的一个原因。　３．２　一定浓度ＧＡ。与６一ＢＡ配比对不定芽伸长　有促进作用　Ｅ３］董兆龙，陈沁，刘文轩，等．辣椒子叶和下胚轴离体培养再　生［Ｊ］．上海大学学报：自然科学版，２００３（２）：１４９—１５２．　［４］龙凤，张金文．辣椒子叶和下胚轴的离本培养及高效再生体　系的建立［Ｊ］．甘肃农业学报，２００５（２）：３１－３７．　Ｉｓ３　张茹，王兰兰，陈灵芝，等．辣椒组培外值体及不定芽诱导培　养基的筛选［Ｊ］．甘肃农业科技，２０１２（１）：１１—１３．　芽的伸长一般采用分化培养基，但有时芽却　不能在分化培养基中良好生长，在培养基中添加　一Ｅ６］张春芬，孟玉平，曹秋芬，等．辣椒的离体培养及再生体系研　究［Ｊ］．山西农业科学，２００８（１１）：３４—３７．　［７］姚明华，王飞，陆秀英，等．辣椒子叶离体培养及植株再生体　系建立［Ｊ３．华中学业大学学报，２００７（６）：８５０—８５３．　Ｅ８］Ｄｅｎｇ　Ｍｉｎｇｈｕａ，Ｗｅｎ　Ｊｉｎｆｅｎ，Ｚｏｕ　Ｘｕｅｘｉａｏ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｐｌａｎｔ　ｒｅ—　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅｐｐｅｒ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｍａｌｅ　ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ（ＣＭＳ）ｌｉｎｅｓ　定浓度的ＧＡ。能够使芽伸长，过高的浓度抑制　不定芽的分化，芽的伸长率效果不显著。张金文　等　研究表明，ＧＡ。浓度为２．０　ｍｇ・Ｌ　有利于辣　椒芽的伸长，这与该研究结果相似，但是有关　ＧＡ。最佳浓度还有待于进一步确认。　在使用一定浓度的ＧＡ。中，添加不同浓度的　ｕｓｉｎｇ　ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ　ｃｕｈｕｒｅｊ，Ｊ３．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈ—　ｎｏｌｏｇｙ，２００９，ｉｏ（１）：３９—４２．　６－ＢＡ对不定芽的伸长产生较大影响，张金文等人　研究表明，在一定浓度范围内，低浓度的６－ＢＡ与　［９］刘卫东，崔群香，夏维东，等．彩色辣椒子叶离体培养技术的　研究［Ｊ］．扬州大学学报：农业与生命科学版，２００３，２４（１）：　６３－６６．　ＧＡ。配合使用有利于芽的伸长，这与该文研究结　果相似，伸长培养基中６－ＢＡ　５．０　ｍｇ・Ｌ　时不定　芽伸长效果要好于６一ＢＡ　８．０　ｍｇ・Ｌ。因此，为　［１０］宋利娜，康德贤，王红梅，等．辣椒三系子叶愈伤组织诱导　及植株再生［Ｊ］．北方园艺，２０１２（９）：１０９一ｌ１２．　［１１］张金文，范兴中，王莹，等．辣椒离体培养及再生体系的研　究ｊ－ｊ］．西北植物学报，２００６，２６（９）：１８９３—１８９９．　［１２］｝好君，徐矿红．辣椒子叶离体培养及植株再生［３３．辽宁　农业科学，２００１（６）：４４—４５．　了能够显著促进不定芽的伸长，在芽伸长培养基　中，要使用低浓度６一ＢＡ，并进一步研究其最佳　浓度。　［１３］李英慧，李艳，杭晓明，等．细胞分裂索对辣椒子叶再生的　研究［Ｊ］．园艺学报，２００１，２８￣３）：２７０—２７２．　［１４３邱萃，何水林．辣椒组织培养再生体系的建立与应用ＥＪ］．　亚热带农业研究，２００６，２（４）：３０４—３０８．　参考文献：　［１］倪水员．辣椒营养价值及高产高效栽培技术［Ｊ］．现代农业　科技，２０１１（１７）：１９．　［２］成善汉，贺申魁，王红梅，等．辣椒子叶和下胚轴的离体培养　及高效再生体系的建立［Ｊ］．南方园艺，２００９，２０（３）：３－６．　［１５］黎定军，张宝玺，赵开军，等．辣椒子叶高效植株再生体系　的建立［Ｊ］．园艺学报，２００２，２９（１）：２５—２９．　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　Ｂｕｄｓ　Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃａｐｓｉｃｕｍ　ａｎｎｕｕｍ　Ｌ．Ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ　ＸＩＥ　Ｌｉ。ｙａｎｇ，ＫＵＡＮＧ　Ｈｕａ－ｑｉｎ，ＬＡＩ　Ｚｈｏｎｇ－ｘｉｏｎｇ，ＬＩＵ　Ｓｈｅｎｇ－ｃａｉ　（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｕｊ　ｉａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ　３５０００２）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔＯ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　Ｃａｐｓｉｃｕｍ　ａｎｎｕｕｍ　Ｌ．，‘Ｌａｊｉａｏｗａｎｇ’ｓｅｅｄｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ　ａＴｌｎｕｕｍ　Ｌ．）．Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　６－ＢＡ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＧＡ３　ａｎｄ　６－ＢＡ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅ—　ｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ　ｗａｓ　ＭＢ５＋Ｏ．８　ｍｇ・Ｌ　ｌＡＡ＋　８．０　ｍｇ・Ｌ　６－ＢＡ＋４．０　ｍｇ・Ｌ～ＡｇＮＯ３．Ｔｈｅ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＢＥ＋　０．８　ｍｇ・Ｌ　ＩＡＡ＋５．０　ｍｇ・Ｌ　６－ＢＡ＋２．０　ｍｇ・Ｌ　ＧＡ３＋４．０　ｍｇ・Ｌ－　ＡｇＮＯ３．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃａｐｓｉｃｕｍ　ｎ　乩缸ｍ　Ｌ．；ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ；ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ：ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ