不同性别及去花对穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量的影响

时珍国医国药２０１０年第２１卷第１１期ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２０１０　ＶＯＬ２１　ＮＯ．１１　．酸的含量为指标，以单因素各影响因子为研究对象，进行Ｌ。（３　）　３次，结果见表７：从表７可以看出，２次提取就可将大部分迷迭　正交实验。结果见表６。　香酸提出，提取率达９２．３８％，再增加提取次数，提取率提高不明　表６的结果说明，各因素对迷迭香酸提取效果的影响程度依　显？从经济角度考虑，本实验采用２次提取。　次为Ｂ＞Ａ＞Ｄ＞Ｃ，因素ｃ、Ｄ无显著性差异，这说明提取温度和　提取时间在正交设计的４水平内对迷迭香酸的含量无显著性影　表７浸提次数对提取率的影响　响，而提取时间太长会延长操作周期，对生产不利：因素Ａ、Ｂ有　显著性差异，说明料液比和乙醇浓度对迷迭香酸的含量有很大的　影响，综合各因素的ｋ值和直接比较，Ａ　Ｂ　Ｃ　Ｄ　为最佳提取条　件。即料液比１：２０，溶剂比为９０％的乙醇溶液，提取温度８０％，　提取时间３ｈ　表６　正交实验结果　提取次数　提取率（％）　９０．１２　９２．３８　９４．５４　９４．９６　４结论　结合单因素和正交实验的结果，得出迷迭香中熊果酸酸的最　佳提取工艺是：料液比１：２０，溶剂比为９０％的乙醇溶液，提取温　度８０￣Ｃ，提取时间３　ｈ，浸提两次。在最佳条件下熊果酸的提取　率为９２．３８％～　参考文献：　［１　刘士德，余玉雯，张建华，等．迷迭香抗氧化提取物的应用研究［Ｊ］．　食品科技，２００３．２：５９　３．３提取次数的选择通过正交实验得到一个最佳提取工艺条　件的组合，按此组合，分别提取１，２，３，４次，以迷迭香酸的提取率　为检测指标，考察提取次数对提取工艺的影响，每个实验重复做　～２一叭　ＬⅢ＿一兽∞　一迭飞屠宏一ｒ３　Ｌ一＿一４ｒ．罢　三Ｌ一蛳融　一ｍ一阳乱吴５ｌ　¨一　一　一～　汹　１５００４０）　不同性别及去花对穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量的影响　孟祥才，杨国辉，于冬梅，孙　晖，王喜军　（黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨摘要：目的探讨不同性别及去花对薯蓣皂苷元含量的影响：方法采用高效液相色谱法测定不同时期穿龙薯蓣根茎中　薯蓣皂苷元的含量。结果与结论雌性植株薯蓣皂苷元的含量显著高于雄性，雌性去花后含量明显降低，与雄性植株接　近。雌性、雌性去花和雄性三者具有相似的季节积累规律：　关键词：穿龙薯蓣；性３１ｊ；　薯蓣皂苷元　Ｄ０Ｉ标识：ｄｏｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１００８－０８０５．２０１０．１１．０３９　中图分类号：１１２８２．２　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００８４）８０５（２０１０）ｌｌ一２８０８－０２　穿龙薯蓣为薯蓣科植物穿龙薯蓣（穿山龙）Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ｎｉｐｐｏｎｉ—　激素类药物大部分是以薯蓣皂苷元为原料的，而我国几乎全部是　石刁柏、银杏等许多　ｃａ　Ｍａｋｉｎｏ的干燥根茎，分布于东北、华北、西北（除新疆）及河南、　以其为原料。穿龙薯蓣为雄雌异株，对板栗、湖北、山东、江苏、安徽、浙江、江西、四川等地　穿山龙的根状茎　雌雄异株植物研究表明其生理代谢表现出明显的差异，以致影响　含有薯蓣皂苷元，其结构与甾体激素类药物相近，为合成各种类　体内的化学成分含量和质量　，植物性别可采用激素进行调　在生产中也有一定的应用　一。另外，疏花、打顶等阻断植物　型的避孕药品和甾体激素类药物的重要原料。世界上合成甾体　控，生殖生长的措施不仅会提高产量，也会改变活性成分积累　。　收稿日期：２００９—１２—２３；　修订日期：２０１０４）６—２６　基金项目：黑龙江省科技攻关项目（Ｎｏ．ＧＢ０７Ｃ３２２）　为此，本文以薯蓣皂苷元含量为指标，对不同性别穿龙薯蓣及雌　性去花的质量差异及其季节积累规律进行研究，为穿龙薯蓣的质　量控制及资源的合理利用提供依据。　１．１　材料２００７年春季将播种于铁力林业局宝马林场的二年生　作者简介：孟祥才（１９６８一），男（汉族），黑龙江林句人，现任黑龙江中医药　作．　大学教授，博士学位，主要从事药用植物生物学、栽培及质量评价研究工　１材料与仪器　通讯作者简介：王喜军（１９６ｌ一），男（汉族），黑龙江哈尔滨人，现任黑龙　药物化学研究工作．　・种苗移栽于黑龙江中医药大学药用植物园内，将雌性穿龙薯蓣分　隔２周分别对雄性穿龙薯蓣、去花雌性穿龙薯蓣和不去花的根茎　江中医药大学教授．博士研究生导师，博士学位，主要从事生药学及血清　为两部分，其中一部分随时摘除花蕾，从２００８年５月下旬起，每　２８０８・　ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲ１Ａ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２０１０　ＶＯＬ．２１　ＮＯ．１ｌ　进行取样，阴干。　时珍国医国药２０１０年第２１卷第１１期　１．２试药薯蓣皂苷对照品购自中国药品生物制品检定所；乙腈　（色谱级，美国迪马（ＤＩＫ—ＭＡ）公司）；娃哈哈纯净水（杭州娃哈　哈集团有限公司）；甲醇（分析级）。　１．３仪器ＬＣ一２０１０Ａ型自动进样高效液相色谱仪，ＫＤＣ一　１６０ＨＲ高速冷冻离心机，ＡＳ３１２０一Ｂ超声震荡仪？　２方法与结果　２．１　色谱条件色谱柱为Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　ｃｌ８（２００ｒａｍ　Ｘ４．６ｍｍ）；流动　相为甲醇一水（９４：６），流速为１．０　ｍｌ／ｍｉｎ，柱温４０ｏｃ，检测波长　２０３　ｒｉｍ，进样量１Ｏ　ｌ。　２．２对照品溶液的制备精密称取薯蓣皂苷元对照品约５　ｍｇ，　置１０　ｍｌ量瓶中，加甲醇溶解并制成每毫升含０．５　ｍｇ的溶液。　２．３供试品溶液的制备　精密称定穿山龙药材粉末约０．５　ｇ，　置５０　ｍｌ锥形瓶中，准确加入甲醇５　ｍｌ，超声提取３０　ｒａｉｎ，取上清　液离心１５　ｒａｉｎ（３　０００　ｒ・ｍｉｎ　）；再量取２　ｍｌ上清液于１０　ｍｌ试　管中，回收甲醇至干，加入２　ｍｏｌ／Ｌ盐酸０．６　ｍｌ，９０ｏＣ加热水解３　ｈ，放冷，向其中加７～８滴过饱和碳酸钠溶液；用氯仿萃取３次，　第１次加入氯仿５　ｍｌ，后两次加入３　ｍｌ，每次萃取２０　ｍｉｎ，合并３　次萃取液，蒸干氯仿，残渣加甲醇使溶解，定容于５　ｍｌ容量瓶中，　微孑Ｌ滤膜（０．４５“ｍ）滤过，即得供试品溶液。　２。４线性关系考察精密称取经干燥的对照品５．３１　ｍｇ，用色谱　甲醇溶解并定容至１０　ｍｌ，配制成浓度为０．５３ｌ　ｍｇ／ｍｌ的对照品　溶液，经０．４５　ｍ微孔滤膜滤过后，分别吸取２．０，４．０，８．０，　图１　雄、雌及去花雌株薯蓣皂苷元季节变化规律　穿龙薯蓣雌性、雌性去花和雄性三者具有相似的季节积累规　１０．０，１２．０，１６．０　Ｉｘ］，依次进样，测得薯蓣皂苷元的峰面积。以进　律，各生长发育含量变化不大。　样量（ｕｇ）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。结果表明，　薯蓣皂苷元在１．０２～８．１６　Ｉｘｇ范围内线性关系良好：回归方程：　Ｙ＝６２３　２７７Ｘ＋６５　３０４，ｒ＝０．９９９　７。　参考文献：　［１］　池静端，白秀峰，刘爱茹，等．ＨＰＬＣ法测定银杏叶中６种黄酮类成　分的含量［Ｊ］．药学学报，１９９７，３２（６）：６２５．　２．５精密度实验精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶液１０　ｌ，注入　高效液相色谱仪，重复进样５次，测定其峰面积，经计算ＲＳＤ为　北方园艺，２００４，５：５２．　１．６３％，表明仪器精密度良好。　［３］　张须学，李海霞，刘延泽．ＨＰＬＣ法研究雄、雌虎杖不同部位化学成　２．６稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在（０，６，１２，２４．４８　分的变化［Ｊ］．中草药，２００６，３７（８）：１２５８．　ｈ）精密吸取１０　Ｌ注入高效液相色谱仪，测定其峰面积，计算ＲＳＤ　１　４］　田砚亭，张秀海．银杏性别分化阶段的早期鉴定及其激素调控　［Ｊ］．河北林果研究，１９９８，１３（３）：１９９．　为１．８２％（ｎ＝５）。结果表明，供试品溶液在７２　ｈ内稳定。　２．７重复性实验取８月１日采集的同一批雌性样品，精密称取　［５］孙晖，杨舸，孟祥才，等．打顶对北柴胡皂苷类成分季节积累规　［２］　王克霞，寿森炎，吴蓉．雌雄芦笋嫩茎营养价值的比较研究［Ｊ］．　５份，按“２．３”项下操作，在上述色谱条件测定薯蓣皂苷元的含　律的研究［Ｊ］．中药现代研究与实践，２００８，２２（２）：１０．　［６］孟祥才，孙晖，杨舸，等．打顶对北柴胡产量和质量影响［Ｊ］．中药　量，ＲＳＤ分别为２．９９％（ｎ＝５）。　材，２００８，３１（３）：３３６．　２．８回收率实验精密称取５份８月１日采集的同一批雌性样　品药材粉末０．２　ｇ，分别加入一定量的对照品，按“２．３”项下操　作。在上述色谱条件下测定，得出薯蓣皂苷元平均回收率分别为　９８．７％，ＲＳＤ分别为１．７％。　３讨论　［７］　李谦，高向涛，赵文垒，等．盐酸催化薯蓣皂苷水解过程的优化研　究［Ｊ］．中药材，２００８，３１（７）：１０５９．　１　８］胥晓，杨帆，尹春英，等．雌雄异株植物对环境胁迫响应的性别　差异研究进展［Ｊ］．应用生态学报，２００７，１８（１１）：２６２６．　［９］　李珊，程舟，李彦，等．雌雄栝楼植株内含物比较研究［Ｊ］．中　草药，２００８，３９（２）：２６０．　大量研究表明，在逆境生境中雄性植株生长良好，雄性个体　比例较大。相反，雌性在较适宜的生境中生长良好，数量占优势，　［１０］黄璐琦．分子生药学，第２版［Ｍ］．北京：北京医科大学出版社，　２００６：９．　主要是由于不同性别的植物对逆境的耐受程度不同所致　。栝　楼雄株的光合色素，可溶性蛋白质的量，超氧化物岐化酶、过氧化　［１１］黄璐琦，陈美兰，肖培根．中药材道地性研究的现代生物学基础及　模式假说［Ｊ］．中国中药杂志，２００４，２９（６）：４９４．　物酶活高于雌株，而雌株的丙二醛、可溶性糖、紫外吸收物的量高　・２８０９・