高效液相色谱法测定核黄素磷酸钠的有关物质

维普资讯 http://www.cqvip.com 天津药学Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２００８年８月第２０卷第４期　光光度法测定吸收波长，分别在２５４和２８９　ｎｍ处有吸　本测定方法方便、快速、专属性及重线性好，结果　准确可靠，可用于该制剂的质量控制。　收，其中２５４　ｎｍ为最大吸收波长，故选择２５４　ｎｍ作为　液相含量测定波长。　高效液相色谱法测定核黄素磷酸钠的有关物质　郝桂明，唐素芳　（天津市药品检验所，天津３０００７０）　摘要目的：建立高效液相色谱法测定核黄素磷酸钠有关物质的方法。方法：采用Ｄｉｋｍａ　Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　ＴＭＣ。　（４．６　ｍｍ×２５０　ｍｍ，５　ｍ）色谱柱，甲醇一０．０５４　ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（１５：８５）为流动相，流速１　ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长２６７　ｎｍ，柱　温为４０℃。结果：核黄素磷酸钠在８．０～６０．０　ｇ／ｍｌ浓度范围内呈良好的线性关系（ｒ＝０．９９９　８，ｎ＝７），精密度试验ＲＳＤ　为０．６％（ｎ＝５），最低检出量为２　ｎｇ。结论：本方法简便、灵敏、准确，能满足核黄素磷酸钠质量控制的要求。　关键词核黄素磷酸钠，高效液相色谱法，有关物质　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６－５６８７（２００８）０４－００３０－０２　中图分类号：Ｒ９２７．１１　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ　Ｓｏｄｉｕｍ　Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　Ｈａｏ　Ｇｕｉｍｉｎｇ，Ｔａｎｇ　Ｓｕｆａｎｇ　（Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ　Ｉｎｓｉｔｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３０００７０）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　０ＢＪ『ＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ　ｓｏｄｉｕｍ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ．　ＭＥＴＨ０ＤＳ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｉｎｃｌｕｄｅｄ　Ｄｉｋｍａ　ＤｉａｍｏｎｓｉｌＴＭ　Ｃ】８（４．６　ｍｍ×１５０　ｍｍ，５　Ｉｘｍ）ｃｏｌｕｍｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ｍｅｔｈａｎｏｌ一０．０５４　ｍｏｌ／Ｌ　ＫＨ２ＰＯ４（１５：８５），ｔｈｅ　ｌｆｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１　ｍｌ／ｍｉｎ．Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｓｅｔ　ａｔ　２６７　ｎｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　４０℃．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　８．０　ｔｏ　６０．０　ｇ／ｍｌ　ｏｆ　ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ　ｓｏｄｉｕｍ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　（ｒ＝０．９９９　８，ｎ＝７），ＲＳＤ　Ｗａｓ　０．６％（ｎ＝５），Ｔｈｅ　ＬＯＱ　Ｗａｓ　２　ｎｇ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ａｃｃｕ—　ｒａｔｅ．ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ　ｓｏｄｉｕｍ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ．　ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ　ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ　ｓｏｄｉｕｍ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＨＰＬＣ，ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　核黄素磷酸钠为核黄素补充剂，在临床应用比较　广泛。但是在文献中尚未见对其有关物质检测的报　道。目前，核黄素磷酸钠在《中国药典》　２００５年版二　部虽已收载，但未制定有关物质检查项。因此采用高　效液相色谱法（ＨＰＬＣ）对核黄素磷酸钠的有关物质进　行检测，可以更好地控制其内在质量。　１仪器与试药　（２５０　ｍｍ×４．６　１ＴＩｍ，５　ｍ）；以甲醇一０．０５４　ｍｏｌ／Ｌ磷　酸二氢钾溶液（１５：８５）为流动相，流速１　ｍｌ／ｍｉｎ，检测　波长２６７　ｎｍ，柱温为４Ｏ　ｃＩ二，进样量：２Ｏ　ｌ。　２．２溶液制备　２．２．１供试品溶液供试品溶液。　取供试品约１０　ｍｇ，精密称定，置　．　５Ｏ　ｍｌ量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为　美国Ｗａｔｅｒｓ　２６９５高效液相色谱仪，Ｗａｔｅｒｓ　２４８７紫　２．２．２对照品溶液取核黄素磷酸钠对照品约ｌＯ　外检测器，ＭＥＴｒＬＥＲ　ＡＥ２４０天平，核黄素磷酸钠对照　ｍｇ，精密称定，置５０　ｒｎｌ量瓶中，用流动相溶解并稀释　品（美国ＡＣＲＯＳ公司提供，纯度７３．Ｏ％一７９．Ｏ％，批　至刻度，摇匀，作为对照品溶液。　号Ａ０２２９６２４）；核黄素磷酸钠（样品①，山西集翔生物　２．２．３对照溶液精密量取供试品溶液２　ｍｌ，置ｌＯ　工程公司提供，批号０７０１０５；样品②，湖北广济药业股　ｒｎｌ量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液　份有限公司提供，批号０６１００３Ａ）。甲醇为色谱纯，磷　（２０．Ｏ％）。　酸二氢钾为分析纯，水为纯化水。　２．３系统适用性试验精密量取“２．２．２”项下对照品　２方法与结果　２．１．溶液２Ｏ　ｌ，注入液相色谱仪，记录色谱图。理论板数　色谱条件　色谱柱：Ｄｉｋｍａ　ＤｉａｍｏｎｓｉｌＴＭ　Ｃ　８柱　按核黄素磷酸钠峰计算应不低于５　０００，核黄素磷酸钠　收稿日期：２００７—１２—１３　维普资讯 http://www.cqvip.com

天津药学Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２００８年８月第２０卷第４期　３ｌ　峰与４　一核黄素磷酸钠峰的分离度应大于２．０。　２．４线性范围考查精密量取“２．２．２”项下对照品溶　ｍｌ的系列溶液，分别精密　液适量，用流动相稀释制成浓度为８．０、１２．０、２０．０、　３０．０、４０．０、５０．０和６０．０　量取上述溶液２０　，注入液相色谱仪，记录色谱图。　以核黄素磷酸钠的浓度（或杂质限度）为横坐标（　），　以相对应的峰面积为纵坐标（１，）进行线性回归，其线　性方程为Ｙ＝４．９７×１０　Ｘ一４．６０×１０　，ｒ＝０．９９９　８　表１核黄素磷酸钠有关物质测定结果　６　（ｎ＝７）。结果表明，核黄素磷酸钠在８．０—６０．０　ｍｌ浓度（相当于杂质限度在４．０％一３０．０％）范围　６Ｏ　９Ｏ　ｔ／ｍｉｎ　Ａ　内与其峰面积呈良好的线性关系。　２．５专属性试验本品经酸、氧化、Ｅｔ光照射破坏后，　杂质均有所增加，但主峰和杂质峰能很好的分离，表明　该色谱条件可行。本品经碱破坏后，几乎完全分解。　２．６精密度试验取“２．２．２”项下对照品溶液，照上　述色谱条件连续进样测定５次，结果按峰面积计算，　ＲＳＤ为０．３％（ｎ＝５）。　２．７重复性试验按“２．２．１”项下方法制备供试品溶　液６份，照上述色谱条件重复进样测定６次，结果ＲＳＤ　为２．０％（ｎ＝６）。　’　２．８稳定性试验　取“２．２．１”项下供试品溶液和　“２．２．２”项下对照品溶液，分别在室温放置０、３、６、１２　和２４　ｈ，依次进样测定，结果ＲＳＤ分别为０．５４％和　０．６８％。表明对照品溶液和供试品溶液在２４　ｈ内基　本稳定。　２．９最低检出限取“２．２．２”项下对照品溶液用流动　相稀释制成不同浓度的溶液，分别注入液相色谱仪，记　录色谱图。以Ｓ／ＮＩ＞３计算，最低检出限为２　ｎｇ。　２．１０　样品测定　取样品①和②，按“２．２．１”和　“２．２．３”项下方法分别制备两批样品的供试品溶液和　对照溶液。精密量取对照溶液２０　注入液相色谱　仪，记录色谱图，调节仪器灵敏度，使主成分色谱峰的　峰高为满量程的２０％。再精密量取供试品溶液和对　照溶液各２０　ｌ，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至　主成分峰保留时间的２．５倍。结果见表１和图１。　６Ｏ　９Ｏ　ｌ２Ｏ　ｔ／ｍｉｎ　Ｂ　１．３　４　核黄素二磷酸酯；２．３　５，＿核黄素二磷酸酯；３．４　５　核黄素　二磷酸酯；４．３　一核黄素磷酸钠；５．４　一核黄素磷酸钠；６．核黄素磷酸　钠；７．核黄素　图１对照品（Ａ）供试品（Ｂ）ＨＰＬＣ色谱图　３讨论　３．１取供试品溶液用流动相稀释至适宜浓度进行紫　外扫描，供试品溶液在波长２６７　ｎｍ处有最大吸收，因　此选择２６７　ｎｍ为检测波长。　３．２供试品的色谱图显示，在给定的色谱条件下，除　核黄素和核黄素磷酸钠主峰以外，还可分离出３个核　黄素二磷酸酯和２个不同取代位的单磷酸盐，而且各　色谱峰之间分离度均达到要求。采用本方法进行核黄　素磷酸钠有关物质检测，能更好的对样品的质量做出　评价。　参考文献　１　中国药典．二部．２００５．６０１