发酵罐(SY-3000E)操作规程
【目的】：规范发酵罐(SY-3000E)操作，确保操作过程正确、安全。 【范围】：适用于生物制品研究所发酵设备。 【职责】：由生物制品研究所归口管理。 【操作步骤】： 一．准备工作
1． 检查管路链接正常，能正常使用，无泄漏 2． 检查阀门系统是否通畅，无滴漏 3． 检查设备
空压机运转正常，出口压力不低于0.2Mpa；
蒸汽发生器运转正常，出口蒸汽压力不低于0.2Mpa； 发酵罐搅拌，蠕动泵，加热器等运转正常； 检查并更换易损O形圈，硅胶垫片；
检查空气过滤器芯并更换污染的滤芯，关闭所有手动阀门。 4． PH电极的标定校正 （1）PH电极使用前的水化
PH电极由于长时间未用，在使用之前必须浸入蒸馏水中3小时以上（第一次使用浸泡12小时以上），以使PH电极的玻璃膜与水反应形成一个覆盖层，此薄层对电极的测量特性起着决定作用。
（2）PH值的标定校正
在灭菌前，应对PH电极进行PH值的标定校正。 A. PH电极的零点校正
用蒸馏水冲洗电极，用吸水纸吸干后，浸于PH=6.86的标准缓冲液中，待下位机控制器屏幕上显示出稳定值后，通过方向键将光标移到6.86字样的【标定】键上，按【确定】键。此时，在PH右侧会自动根据采样的数据显示6.86值，完成零点标定。 B．PH电极斜率校正
用蒸馏水冲洗电极，吸干后，浸入PH=4.00或9.18的标准缓冲液中，待下位机控制器屏幕上显示出稳定值后，通过方向键将光标移到4.00或9.18字样的【标定】键上，按【确定】键。此时，在PH右侧会自动根据采样的数据显示4.00或9.18值，完成零点标定。 5． 溶氧电极（DO）的标定 （1） 溶氧电极的极化
在使用前加满电解液，浸入水中至少通电极化6小时，然后进行电极的标定。 （2） 溶氧电极测量的标定 A． 标定零点值
在灭菌升温过程，当温度超过100℃后，按下溶氧标定按下溶氧标定按钮，可作为溶氧标定的零点值。也可在灭菌前先用饱和亚硫酸钠溶液标定为零点。 B． 标定100%值
在正式发酵前，设定发酵初始温度，搅拌转速，通气量和罐压（0.02-0.1MPa），将该初始状态下的溶氧标定为100%值，将通过方向键将光标移到空气字样后的【标定】键上，按【确定】键。此时，在显示屏上会自动根据采样的数据显示100%值，完成100%值标定。 二．气密性检查
1． 安装好PH电极，溶氧电极；
2． 打开空气压缩机，同时打开空气进气阀，空气减压阀，关闭罐体放空阀，打开空气隔膜
江苏恒丰强生物科技有限公司 发酵罐(SY-3000E)操作规程
阀，使发酵罐压力表保持在0.15Mpa左右，过滤器上压力表0.2MPa左右；
3． 关闭空气隔膜阀，使其稳压30min，稳压时，检测罐体压力下降幅度，超过0.02Mpa则
有泄漏，需检查各端口；
4． 关闭空气进气阀，打开罐体放空阀。 三．灭菌操作 1． 罐体灭菌
（1） 投料并开启搅拌（可设定200rpm），并有一定程度进风；
（2） 关闭所有阀门，打开蒸汽总管路上的阀门，半开启罐体排空阀，打开罐体夹套排气
阀，放净夹套水后，半开启该阀；
（3） 进入灭菌页面，进行灭菌参数设定（转速，灭菌温度，灭菌时间）按下【S/E】键，
灭菌开始；
（4） 温度升至90℃时，搅拌自动关闭，当温度超过100℃后可作为溶氧电极的零点标定，
在变量（溶氧）标定界面选择【亚硫酸钠】，选择【确认】键即完成标定；
（5） 温度升至121℃时，相应罐压升至0.12Mpa左右。 2． 空气过滤器、管路及管内空气分布器的灭菌
（1） 当温度升至100℃时，打开进空气过滤器的蒸汽阀，再慢慢打开空气过滤器排水排
气阀，看到过滤器蒸汽出来为止；
（2） 打开空气隔膜阀，通过调节隔膜阀，罐体放空阀或过滤器排水排气阀调节过滤器压
力表，使过滤器压力表保持在0.15-0.2Mpa（不超过0.25Mpa），维持罐内压力表在0.12Mpa左右；
（3） 根据需要打开取样蒸汽灭菌阀，半开启取样阀，对罐底取样管路灭菌。 3． 结束灭菌
（1） 务必先关闭隔膜阀（防止罐内液体倒吸）；
（2） 灭菌完毕，自动关闭蒸汽电磁阀，自动打开冷水进水电磁阀，开始快速降温； （3） 关闭空气过滤器的蒸汽阀，空气过滤器排水排气阀，罐体夹套排气阀，关闭取样蒸
汽灭菌和取样阀；
（4） 打开循环水阀和冷凝器水阀，打开空气进气阀和隔膜阀；
（5） 打开循环水阀调节罐内压力和过滤器压力，罐压维持0.15Mpa，过滤器上表压维持
0.2Mpa；
（6） 温度降至90℃时开启搅拌。降温阶段注意调节隔膜阀和罐体放空阀的开度，控制罐
内压力不要降压至0.02Mpa以下；
（7） 在罐内料液温度降至70-80℃时，手动切换至灭菌结束状态； （8） 在温度控制界面，选择温度控制方式（手动或自动），并设定温度；温度稳定在设定
温度时，连接三通补料，调节PH至培养要求；调节空气流量和罐内压力培养条件，此时标定溶氧电极的100%；
（9） 发酵罐待接种。 四．接种操作 1． 火焰接种法
（1） 医用酒精擦拭接种口；
（2） 火圈中加入酒精，点燃后套在接种口上；
（3） 关小隔膜阀，调节进风，降低罐压，打开接种口盖；
（4） 在火焰范围内打开接种瓶塞，在火焰上灼烧几秒后，在迅速将种子液倒入罐中； （5） 在火焰上灼烧接种口盖数秒，迅速盖好接种口盖。 五．发酵培养
江苏恒丰强生物科技有限公司 发酵罐(SY-3000E)操作规程
接种结束后，对培养各参数进行设定，开始发酵培养，发酵过程中打开冷凝器水阀。 发酵过程注意问题及处理 ，可以通过手动调节罐体放空阀完成； ◆ 发酵过程维持压力恒定（0.05-0.1Mpa） ◆ 发酵过程中，如遇突然断电，关闭进气阀和放空阀，保压，降温，减通气量，然后立即联系供电部门，迅速解决；突然停水，待温度降低手动升温； ◆ 发酵过程中，若泡沫过多，调小罐体放空阀，降低通气量，使罐压升高，补加几滴消泡剂； ◆ 过滤器放空阀关闭后，要定期排放积水。 六．取样操作
（1） 手动开启并调节取样阀上蒸汽支路阀门进行灭菌，一般灭菌30min。 （2） 关闭取样蒸汽灭菌阀，旋启取样阀手轮，进行取样； （3） 取样结束，旋动手轮，关闭取样阀；
（4） 打开取样蒸汽灭菌，将取样阀中料液吹进，再次灭菌30min； （5） 关闭取样蒸汽灭菌阀。 七．发酵结束处理
（1） 将温度，PH调节设定由自动改为手动状态，调节控制量为50；
（2） 关闭水循环阀，冷凝水阀，依次关闭隔膜阀，空气进气阀，打开罐体放空阀，半开
启夹套排气排水阀，同时通过过滤器排水排气阀，排气泄压；
（3） 在灭菌界面设定灭菌温度，灭菌时间处理发酵液；
（4） 发酵液处理完毕后，打开发酵罐底阀和空气进气阀，调节隔膜阀，罐体放空阀，保
证有一定罐压，将发酵液通过底阀，转入储罐，待进一步处理。
八．发酵罐系统的清洗、包养和维护 1． 清洗
（1） 关闭电源，取出电极并保养，电极插口冲洗干净，用塞子旋紧；
（2） 取下电机，断开冷凝器进出水管，打开罐盖，垂直拆卸搅拌与盖板，有条件尽可能
使搅拌轴处于自然悬垂状态；
（3） 拆下搅拌器，对螺纹处，搅拌器，轴出进行清洗，机械密封用水冲洗；
（4） 对罐体清洗，如有必要，可使用酒精或其它对罐体及工艺无影响的清洗剂对难清洗
物质进行擦洗，然后用清水冲洗；
（5） 拆下空气分布盘上的闷头进行清洗，用清水冲洗进风管，检查分布盘上小孔是否有
水均匀流出；
（6） 清洗O形圈槽，O形圈，对于出现变形，老化或划伤的要进行更换； （7） 清洗完毕，重新安装；
（8） 罐内加入清水，以水待料，进行灭菌； （9） 罐内水排清，设备待用；
（10） 若长期停电，切断总电源，盖防尘罩。 2． 保养
（1）溶氧电极保养
A.如果长期不用，将电极从罐上取下，用配套的保护套保护电极接头盒电极溶氧膜，放入电极盒中即可；
B.电缆线接头盒电极不能接触液体或潮湿空气； C.勿用利器刮擦敏感膜，以免损伤； （2）PH电极保养
江苏恒丰强生物科技有限公司 发酵罐(SY-3000E)操作规程
A.如果长期不哟该，将电极卸下，将电极接头上套上配套的盖帽，电极头用配套的敏感膜保护帽套上，放入电极盒中即可；
B.电极不能放在蒸馏水中保存，否则将大大缩短其实用寿命； C.电缆线接头盒电极不能接触液体或潮湿空气； D勿用利器刮擦敏感膜，以免损伤； （3）空气系统的保养
空气系统包括压缩机、粗过滤器、精过滤器、隔膜阀和空气分布器。
A.过滤器的保养：过滤器在使用一段时间后，其滤芯的微孔会逐渐堵塞，引起空气的流量严重不足和空气压降增大，从而影响通气量，同时可能引起染菌。需更换。
B.空气分布器的保养：每次发酵结束后需对空气分布器进行清洗。如果发酵液的性质与水相似，可在罐内加水，然后通压缩空气进行清洗。如果发酵液较粘稠，或含有细小颗粒，则最好把空气分布器拆下，然后把堵头拧下，用水冲洗。同时保证小孔通气畅通。 （4） 蒸汽系统的保养
蒸汽系统包括蒸汽发生器、蒸汽过滤器、蒸汽管路阀门等。 A.在使用过程中要经常注意保证蒸汽压力的恒定； B.蒸汽发生器的保养见该产品的使用说明书；
C.在操作过程中，注意不要一下全开蒸汽阀门，否则会冲击蒸汽过滤器滤芯，严重时会把滤芯冲断或泄漏而使其失效。同时需要注意蒸汽过滤器的滤芯在使用一段时间后摇更换。 （5） 其他
A.卡套球阀：由于球阀内的密封件是由两个半球状四氟乙烯制成的，长时间使用后，密封件与阀芯之间可能会泄漏，若泄漏，只要旋松阀两端的卡套接头螺帽，然后旋紧阀两端的圆柱状接头即可。
B.卡套接头的泄漏：旋紧接头上的压帽即可。
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容