芍药汤对湿热内蕴型溃疡性结肠炎大鼠疾病活动指数及血清IL-8的影响

窑药理研究

芍药汤对湿热内蕴型溃疡性结肠炎大鼠疾病活动指数及血清IL-8的影响*祖

健1，赵党生1△，王凤仪1，张小元2，徐兰萍2，卢晓婷1，何小磊1，王移飞1，蒲晓薇1

1甘肃中医药大学，甘肃兰州730000；2甘肃中医药大学附属医院

［摘要］目的：探讨芍药汤对湿热内蕴型溃疡性结肠炎(UC)大鼠疾病活动指数及血清中白介素8（IL-8）

模型对照组、芍药汤高、中、的影响。方法：将60只健康Wistar大鼠按照随机数字表法分为正常对照组、低剂

量组、柳氮磺吡啶(SASP)组。湿热内蕴型溃疡性结肠炎模型大鼠应用高脂高糖辛辣饮食加免疫复合法＋TNBS

按照IL-8ELISA试剂盒操作说明测定血清中的IL-8水平。在实(2，4，6-三硝基苯磺酸)结合乙醇方法复制。

验开始后24小时、造模成功后24小时、给药治疗后20天对各组大鼠进行疾病活动指数(DAI)评价。结果：DAI：在造模成功后24小时，空白对照组与其余各组相比较疾病活动指数差异有统计学意义(P＜0.05)。在治疗后第20天时，空白对照组与各组相比差异有统计学意义(P＜0.05)，模型对照组与不同剂量的芍药汤组和SASP组对比具差异有统计学意义(P＜0.05)。各组大鼠血清中IL-8含量：与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清中IL-8含量明显升高，具有统计学意义(P＜0.05)。与模型对照组相比较，各剂量芍药汤组、SASP组大鼠血清IL-8含量明显降低，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：芍药汤可降低IL-8的含量，降低组织中炎性细胞含量，并加快对肠黏膜修复的作用。

［关键词］芍药汤；溃疡性结肠炎；白介素8；动物实验［中图分类号］R574.62［文献标识码］A［文章编号］1004-6852(2019)04-0029-04

ImpactsofShaoYaoDecoctiononDiseaseActivityIndexandtheLevelsofIL-8oftheRatswithUlcerativeColitisofDamp-heatInternalAccumulationPatternZUJian1,ZHAODangsheng1△,WANGFengyi1,ZHANGXiaoyuan2,XULanping2,

LUXiaoting1,HEXiaolei1,WANGYifei,PUXiaowei1

1GansuUniversityofChineseMedicine,Lanzhou730000,China;2AffiliatedHospitalofGansuUniversityofChineseMedicine

Objective:ToexploretheeffectsofShaoYaodecoctionondiseaseactivityindexesandthelevelsof

IL-8oftheratswithulcerativecolitis(UA)ofdamp-heatinternalaccumulationpattern.Methods:Sixtyratsweredividedintonormalcontrolgroup,modelcontrolgroup,high,moderateandlowdosegroupsofShaoYaodecoction,SASPgroup.ratmodelssufferingUCofdamp-heatinternalaccumulationpatternwerereplicatedbyapplyinghigh-fathigh-sugaracriddietandimmunecomplexmethod+TNBScombinedwithalcoholmethod.ThelevelsofIL-8weredetectedonthebasisoftheoperationinstructionofIL-8ELISAkit.DAIoftheratsindifferentgroupswereassessedover24hoursaftertheexperimentbegan,24hoursaftersuccessfullyestablishingthemodelsand20daysaftertreating.Results:DAI:Over24hoursaftersuccessfullyestablishingthemodels,statisticaldifferencewasfoundinDAIamongblankcontrolgroupandothersgroups(P＜0.05).Over20daysaftertreating,thedifferenceswerestatisticallysignificantwhenblankcontrolgroupwascomparedwiththeothers(P＜0.05).StatisticaldifferenceswerefoundwhenmodelcontrolgroupwascomparedwithdifferentdosegroupsofShaoYaodecoctionandSASPgroup(P＜0.05).ThecontentsofIL-8intheratsofdifferentgroups:Comparedwithnormalcontrolgroup,thecontentsofIL-8raisednotablyintheratsofmodelcontrolgroup,andthedifferencehadstatisticalmeaning(P＜0.05).Comparedwithmodelcontrolgroup,thecontentsofIL-8loweredobviouslyindifferentdosegroupsofShaoYaodecoctionandSASPgroup,thedifferenceshadstatisticalmeaning(P＜0.05).Conclusion:ShaoYaodecoctioncoulddecreasethecontentsofIL-8,reducethecontentsofinflammatorycellsinthetissueandacceleratetherecoveryofintestinalmucosa.

ShaoYaodecoction;ulcerativecolitis;IL-8;zoopery

溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis，UC)是一种由多种因素导致的非特异性大肠黏膜的慢性炎症和溃疡性疾病，至今发病原因尚未明确［1］。其临床表现为腹部疼痛、腹泻、大便中有黏液脓血，目前我国UC的发病率逐年攀升。大多数研究

免疫、结果表明遗传、环境等因素在溃疡性结肠炎

的发病原因中起主导作用，其中免疫因素在UC发病的诸多原因中已得到公认。随着研究的进一步

中国科技29核心期刊窑药理研究

WesternJournalofTraditionalChineseMedicine,2019Vol.32No.4

深入，发现UC的发生与白介素8(IL-8)有着重要的联系，可作为评价溃疡性结肠炎严重程度的重

［2］要指标之一。本研究通过采用高脂高糖辛辣饮食加免疫复合法垣TNBS(2，4，6-三硝基苯磺酸)结合乙醇的方法复制湿热内蕴型UC大鼠，观察芍药汤对UC模型大鼠血清中IL-8含量的影响以及在造

试探讨芍模后和治疗后疾病活动指数(DAI)评分。

药汤对湿热内蕴型溃疡性结肠炎模型大鼠的作用机理，为芍药汤的临床应用提供实验性理论依据。1材料与方法

1.1动物健康Wistar大鼠60只，雌雄各半，平均体质量(210依10)g，实验动物许可证号：SCXK(甘)2015-0001，均由中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物中心提供。

黄1.2药品与试剂芍药汤组成：芍药、大黄、

槟榔、当归、芩、黄连、肉桂、木香、炙甘草。药材由

甘肃中医药大学附属医院中药房提供。2，4，6-三

批号：硝基苯磺酸(TNBS，Sigma公司，SLBP0899V)；

柳氮磺吡啶肠溶片(SASP)［上海信谊嘉华制药有限公司产品，批号：(H31020557)］；IL-8ELISA试剂盒(兰州科宝公司，批号：10-72-037。北京红星二锅头(北京红星股份有限公司，产品标准号：GB/T10781.2)；食用猪油(江苏南顺食品有限公司，产品执行标准号Q/YH0001S)

1.3造模及给药60只健康Wistar大鼠按照随机数字表法分成正常对照组、模型对照组、芍药汤高剂量组(高剂量组)、芍药汤中剂量组(中剂量组)、芍药汤低剂量组(低剂量组)、SASP组，每组10只。雌雄各半，各组大鼠体质量无统计学差异(P＞0.05)。

除正常对照组外，其余各组按照高脂高糖辛辣饮食加免疫复合法＋TNBS(2，4，6-三硝基苯磺酸)结合乙醇复合造模法。具体如下：将大鼠在以普通饲料的喂养的同时使其饮用蜂蜜水(200g/L)，且隔日按大鼠体质量灌服油脂15g/kg，并在灌服油脂的次日按20mL/kg灌服浓度为52%白酒，共灌服20天。在高脂高糖饮食第6天和第20天大

右侧足跖、鼠的左、腹股沟及背部注射弗氏抗原乳

化液1mL(含抗原8mg)即可。在湿热内蕴证候模型成功后，各组大鼠在第21天禁食不禁水24小时后复建UC模型，即用10%水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉后，将直径2mm、长15cm的硅胶管由肛门轻缓插入6cm处，并按100mg/kg计算TNBS(约等于TNBS原液2mL/kg)+50%乙醇0.25mL缓慢注入距肛门约6cm处的肠腔内，捏紧肛门，倒

置8分钟即可。每隔1天1次，持续至21天；空白

对照组用生理盐水2.5mL缓慢注入距肛门约6cm处的肠腔内，捏紧肛门，倒置8分钟。

芍药汤高、中、低剂量组分别按6、12、24g/kg煎剂灌胃干预(相当于成人60kg)临床常规用量的2、5、10倍，按人与动物体型系数换算)，SASP组按1g/kg剂量灌胃(相当于60kg体质量成人每日用量的5倍，等效剂量按人与动物体型系数换算)，使用同等体积生理盐水对正常对照组及模型组灌胃。各组大鼠在造模成功后次日开始灌胃给药，1次/d，共进行21天。

1.4ELISA法测定血清IL-8水平实验结束后，使用10%水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉后，进行腹主动脉取血，4℃3500r/min离心10分钟，取上清液-80℃保存备测。按照IL-8ELISA试剂盒操作说明测定血清中的IL-8水平。

1.5疾病活动指数评分标准(DAI)在实验开始后24小时、造模成功后24小时、治疗后20天，观

大便性状以及潜血情察大鼠的体质量变化情况、

况。并根据OkayasuI等的评分标准DAI越(体质

［3］量下降分数垣大便性状分数垣便血分数)/3。按照表1对各组大鼠进行评分。

表1DAI评分标准0分1分2分3分4分症状

1-55-1010-15>15体质量下降/%无

正常半稀便稀便大便性状

（+）便血（-）便血便血肉眼血便

注：正常为成型大便；半稀便为不黏附于肛门的糊

稀便为可黏附于肛门的稀水样便状、半成形大便；

1.6统计学方法应用SPSS21.0软件对数据进

行统计学分析，计量资料以(字依s)表示，采用单因素方差分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。2结果

2.1大鼠组织形态学变化取大鼠肛门上8cm处直肠组织，采用HE染色法与正常对照组相比模型组直肠组织肉眼可见明显的水肿、充血。在电镜下，模型对照组大鼠大多黏膜层破坏、脱落，

毛细血管、可深达肌层。放大40倍可见肉芽组织、

成纤维细胞及大量炎性细胞浸润，以嗜中性粒细

表明造模成功。胞为主。各个治疗组与模型组相比

直肠病理有不同程度的改变，特别是高剂量组，肉眼下少见黏膜水肿及充血，在电镜下可见肉芽组织形成，黏膜层逐渐开始修复，在40倍镜下高剂量组与模型组相比炎症细胞明显减少，炎症程度减轻。见图1。

中国科技30核心期刊2019年第32卷第4期

窑药理研究

模型对照组20倍模型对照组40倍高剂量组20倍

高剂量组40倍低剂量组中剂量组

SASP组

图1空白对照组

大鼠组织形态学(HE，×20)

2.2疾病活动指数评分各组大鼠DAI评分结

果显示：在造模后24小时各造模组与空白对照组相比较疾病活动指数差异有统计学意义(P＜0.05)。在治疗后第20天时各造模组与空白对照组相比具有统计学差异(P＜0.05)，模型对照组与芍药汤治疗组和SASP组对比具有统计学差异(P＜0.05)。见表2。

表2疾病活动指数评分对比（字依s）只数造模前

空白对照组100.00±0.00模型对照组100.00±0.00

100.00±0.00高剂量组

100.00±0.00中剂量组

组别低剂量组SASP组

1010

分

造模后24h治疗后20d0.00±0.000.00±0.001.72±0.87#0.91±0.43#1.69±0.850.11±0.22

##

#*#*

相比，模型对照组大鼠血清中IL-8含量明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。与模型对照组相比较，各剂量芍药汤组、SASP组大鼠血清IL-8含量明显降低，组间差异明显，有统计学意义(P＜0.05)。中剂量与低剂量组之前组间差异不明显(P＞0.05)。高剂量组与SASP组之间的差异无统计学意义(P＞0.05)。见表3。

表3各组大鼠血清中IL-8含量对比(字依s)组别空白对照组模型对照组低剂量组中剂量组高剂量组

只数101010101010

ng/L

IL-8105.95±9.36209.18±34.29#177.80±24.00*△173.1±34.14*139.62±18.88*□139.19±15.53*

1.65±0.840.19±0.30

0.00±0.001.63±0.74#0.22±0.42#*0.00±0.001.73±0.91#0.09±0.25#*

注：与空白对照组相比，#表示P＜0.05；与模型对照组相比，*表示P＜0.05

SASP组

注：与空白对照组相比，#表示P＜0.05；与模型对照组相比，△表示P＜0.05；与SASP相比，□表示P＞0.05

2.3各组大鼠血清IL-8含量与正常对照组

中国科技31核心期刊窑药

3

理研究

WesternJournalofTraditionalChineseMedicine,2019Vol.32No.4

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讨论

溃疡性结肠炎是一种结肠黏膜的慢性炎症性疾病，它通常由直肠开始，并逐渐延伸至整个结肠。血性腹泻是其特征性症状。临床病程不可预

［4-7］测，常以加重期和缓解期交替进行为特征。有研究显示发达国家的发病率要大于发展中国家，我国溃疡性结肠炎的发病率也呈现逐年上升趋势。近些年来免疫因素导致UC发生的研究被更多的学者得到认可，因此UC的发病多数会涉及到T细胞亚群的变化以及炎症介质的变化。有学者发现UC发生后多种细胞因子的含量发生改变，随着促炎因子和抗炎因子的平衡被打破从而导致炎症的发生，所以恢复二者之前的平衡是治疗UC的

［8-12］关键。

《素问病机气宜保芍药汤出自金代刘完素的

命集》，刘河间云：“行血则便脓自愈，调气则后重

黄连为君药，自除”。方中以黄芩、二者苦寒入大肠

用芍药养血和营止痛经，以奏清热燥湿解毒之功。

并与养血活血的当归相配，以期行血而致脓便自

木香、愈之效。二者相配可解热毒留恋伤阴之忧。

槟榔行气消导，四药相伍共为臣药，气血顺畅则里

通腑去热，急后重可愈。大黄可泻下活血、使蕴积

肠道的湿热之邪随大便而出，此法谓之通因通用。少佐肉桂，以其温通为用，一方面可以增强归、芍行气和血之功，另一方面可降逆止呕，防止拒

能调和渚药，药。炙甘草为本方佐使之药，与臣药

诸药合和为用，芍药相配共奏柔肝缓急止痛之功。

行气调血，除后重利湿热，清脓便止疼痛。本方功不在单纯的止下痢，其根本目的在于使药效直达致痢之本。

［4］通过Uguccioni的研究，我们发现，IL-8作

发展中起为关键的炎性因子之一，在UC的发生、

着重要的的作用。本研究发现湿热内蕴型溃疡性结肠炎大鼠血清中的IL-8含量较健康大鼠明显升高。而通过芍药汤治疗之后湿热内蕴型溃疡性结肠炎大鼠血清中的IL-8含量明显下降，芍药汤起到了降低IL-8的含量，恢复相关炎性因子水平，降低组织中炎症细胞含量，并加快对肠黏膜修复的作用。但其具体的作用机制还有待进一步研究。

收稿日期：2018-07-02

*基金项目：国家自然科学基金(编号81560746)。

作者简介：祖健(1992—)，男，在读硕士研究生。研究方向：肛肠疾病的中医药防治。

硕士研究△通讯作者：赵党生(1969—)，男，教授，主任医师，治则治法研生导师。研究方向：皮肤病以及肛肠疾病证候基础、究。

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