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细胞知识点10:细胞及生物大分子的动态变化

2024-11-06 来源:爱问旅游网

荧光漂白恢复(FPR)技术是一种在活体细胞中检测特定分子运动和迁移速率的先进方法。它通过使用荧光分子与蛋白或脂质偶联,利用高能激光束照射细胞特定区域,造成该区域荧光分子的不可逆淬灭,即光漂白。随后,由于细胞内部脂质或蛋白质的动态运动,周围未漂白区域的荧光分子不断向光漂白区迁移,导致光漂白区域的荧光强度逐渐恢复至初始水平。这一技术能提供活细胞中脂质或蛋白质运动的定性结果,同时还能获取定量信息,有助于解决细胞内分子动态变化问题以及它们与其他成分的相互作用。

单分子技术则是一种在细胞内实时观测单一生物分子运动规律的技术,能在纳米空间尺度和毫秒时间尺度上精确测量单分子的距离、位置、指向、分布、结构及其动态过程。这项技术涵盖了分子马达、核酸马达、细胞信号通路、细胞器、细胞骨架、染色质分布,以及细胞的分裂、迁移、胞吞、胞吐等过程,特别是在蛋白质和 DNA 的单分子力学测量方面有着广泛应用。

酵母双杂交技术是一种基于真核生物酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的系统。它通过构建携带 DNA 结合域(BD)和转录激活域(AD)的融合蛋白,以及与可能相互作用蛋白的融合蛋白,在细胞内表达,从而验证特定蛋白之间的相互作用。这一技术具有高灵敏度、快速、直接的优点,广泛应用于细胞信号转导网络中各种蛋白质关系的研究。

FRET(荧光共振能量转移)技术则是一种基于荧光分子间能量转移的分子相互作用检测方法。当两个发光基团之间的距离在一定范围内时,供体分子的荧光会被受体分子吸收并转化为特定波长的荧光,以此来判断两个蛋白质分子之间的直接相互作用。FRET技术特别适用于检测活细胞内蛋白质间的相互作用。

放射自显影技术是一种利用放射性同位素的电离射线对乳胶的感光作用,对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的细胞化学技术。通过掺入同位素标记的生物大分子前体,显示细胞内同位素所在位置,从而对细胞或生物体内生物大分子进行动态研究和追踪。举例而言,在研究 DNA、RNA 合成或含硫蛋白分子代谢时,常使用特定的同位素标记前体进行研究。
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