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1,检查抗体是否过期,保存方法是否正确,稀释比例是否正确。 2,抗体的孵育时间、温度是否正确。 3,洗涤液中是否含有triton-100等破膜物质。 4,洗涤时间是否过长。 5,排除所有人为因素,考虑该细胞可能确实不表达该蛋白。